지드 셀의 파생물로 효모 연대기의 수명 Quantifying
Summary
효모의 연대순의 노화는 고정 단계에서 시간과 관련된 세포 생존 능력의 상실을 말합니다. 여기 양적 효모 연대기 수명을 결정하는 높은 처리량 방법을 설명합니다.
Abstract
신진 효모<em> Saccharomyces cerevisiae</em> 노화 연구 분야에서 중요한 모델 생물로 입증되었습니다<sup> 1</sup>. replicative 및 연대기 생활에 걸쳐이 효모에서 노화 연구에 사용이 설립 패러다임입니다. Replicative 노화가 단일 효모 어머니 세포가 노화하기 전에 생산 딸 세포의 숫자로 정의되며 연대기 노화 시간이 세포의 길이에 의해 정의 것은 아닌 나누어, 정지 같은 상태에서 살아남을 수<sup> 2</sup>. 우리는 연대순 수명의 양적 측정을위한 높은 처리량 방법을 개발했습니다. 이 방법은 선동 아래 정의된 중간에서 일정한 온도에서 세포를 노화 포함됩니다. 각 연령 시점에서 세포의 하위 인구 노령화 문화에서 제거되며 풍부한 성장 매체에 주사. 고해상도의 성장 곡선은 다음 Bioscreen C MBR 시스템을 사용하는 세 세포의 하위 인구 얻을 수 있습니다. 알고리즘은 다음 각 연령 시점에서 성장 반응 속도론에 따라 각 하위 인구 가능한 세포의 상대적인 비율을 결정하기 위해 적용됩니다. 이 방법은 재현성과 정밀도를 유지하면서 다른 연대기 수명의 assays에 비해 실질적으로 더 적은 시간과 자원이 필요합니다. 이 분석의 높은 처리량 자연은 좀더 복잡한 유기체에 추가 테스트를위한 새로운 장수 수정자를 식별하는 대규모 유전 및 화학 스크린을 허용해야합니다.
Protocol
Discussion
여기에서 설명한 높은 처리량 연대기 수명 분석은 높은 정확성과 정밀도와 변종 다수의 고령화 잠재력을 quantifying위한 효과적인 방법입니다. 식민지 – 형성 단위 (예 3 참조) 계산에 의해 생존을 결정하는 고전적인 방법을 통해이 방법의 주요 사전은 높은 해상도의 성장 곡선을 얻기 위해 같은 Bioscreen C MBR 시스템으로 쉐이크 / 보육 / 플레이트 읽기 장치의 사용이다 각 나이 가리 킵니다. ?…
Acknowledgements
이 작품은 NIH 그랜트 1R21AG031965 – 01A1에 의해 지원되었다. MK는 노화에 엘리슨 의료 재단 신규 장학생입니다.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Bacto Peptone | Reagent | BD | 211677 | |
| Bacto Yeast Extract | Reagent | BD | 288620 | |
| Difco Agar | Reagent | BD | 214530 | |
| Yeast Nitrogen Base w/o A.A. and A.S. | Reagent | MidSci | J630-500G | |
| Amino Acids | Reagent | Sigma | ||
| Ammonium Sulfate | Reagent | Spectrum | AM185 | |
| Dextrose | Reagent | Fisher | D16-10 | |
| Bioscreen C MBR machine | Tool | Growth Curves USA | 5101370 | |
| Bioscreen 100-well Honeycomb plate | Tool | Growth Curves USA | 9502550 |
References
- Steinkraus, K. A., Kaeberlein, M., Kennedy, B. K. Replicative aging in yeast: the means to the end. Annu Rev Cell Dev Biol. 24, 29 (2008).
- Kaeberlein, M., Conn, P. M. . Handbook of models for human aging. , 109 (2006).
- Fabrizio, P., Longo, V. D. The chronological life span of Saccharomyces cerevisiae. Aging Cell. 2 (2), 73 (2003).
- Murakami, C. J., Burtner, C. R., Kennedy, B. K., Kaeberlein, M. A method for high-throughput quantitative analysis of yeast chronological life span. J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 63 (2), 113 (2008).
- Piper, P. W., Harris, N. L., MacLean, M. Preadaptation to efficient respiratory maintenance is essential both for maximal longevity and the retention of replicative potential in chronologically ageing yeast. Mech Ageing Dev. 127 (9), 733 (2006).
- Fabrizio, P., et al. Superoxide is a mediator of an altruistic aging program in Saccharomyces cerevisiae. J Cell Biol. 166 (7), 1055 (2004).
