הזדקנות בשמרים כרונולוגית מתייחס לאובדן של כדאיות התא הקשורים זמן בשלב נייח. כאן אנו מתארים את שיטת תפוקה גבוהה עבור כמותית בקביעת תוחלת החיים בשמרים כרונולוגי.
Abstract
שמרים ניצני<em> Saccharomyces cerevisiae</em> הוכיחה להיות אורגניזם מודל חשוב בתחום של מחקר ההזדקנות<sup> 1</sup>. Replicative ואת תוחלת החיים כרונולוגי שתי פרדיגמות הוקמה בשימוש ללמוד הזדקנות בשמרים. הזדקנות replicative מוגדר כמספר התאים בת תא יחיד אמא שמרים מייצרת לפני הזדקנות, הזדקנות כרונולוגי מוגדר על ידי האורך של התאים זמן יכול לשרוד במצב הלא חלוקת קפאון כמו,<sup> 2</sup>. פיתחנו שיטת תפוקה גבוהה עבור מדידה כמותית של תוחלת החיים כרונולוגי. שיטה זו כרוכה הזדקנות התאים בינוני מוגדר תחת תסיסה בטמפרטורה קבועה. בשלב גיל זה, האוכלוסייה משנה של תאים יוסר התרבות הזדקנות מחוסן לתוך מדיום גידול עשיר. רזולוציה גבוהה עקומת גדילה מתקבל אז לאוכלוסייה קטן זה של תאים בגילאי באמצעות מכונה Bioscreen C-MBR. אלגוריתם מוחל אז כדי לקבוע את חלקם היחסי של תאים קיימא באוכלוסייה משנה כל מבוסס על קינטיקה צמיחה בנקודה בגיל זה. שיטה זו דורשת זמן ומשאבים באופן משמעותי פחות בהשוואה כרונולוגי מבחני אחרות תוחלת החיים תוך שמירה על שחזור ודיוק. אופי תפוקה גבוהה של assay זה אמור לאפשר בקנה מידה גדול מסכי גנטיים כימיים לזהות מכפילי אריכות ימים הרומן לבדיקה נוספת של אורגניזמים מורכבים יותר.
Protocol
חלק 1: הכנת תרבויות הזדקנות Streak זנים של עניין ממניות קפוא על גבי צלחות אגר YEPD (1% תמצית שמרים, 2% bacto-peptone, אגר 2%, גלוקוז 2%). דגירה התאים ב 30 ˚ C למשך 48 שעות או עד מושבות יחיד להופיע. <li style=";text-align:righ…
Discussion
תפוקה גבוהה כרונולוגי תוחלת החיים assay המתוארת כאן היא שיטה יעילה לכימות פוטנציאל התיישנות מספר גדול של זנים עם דיוק דיוק גבוהה. ההתקדמות העיקרית של שיטה זו על פני שיטות קלאסיות לקביעת הישרדות ידי ספירת המושבה להרכיב יחידות (לדוגמא: לראות 3) הוא השימוש במכשיר שיי…
Acknowledgements
עבודה זו נתמכה על ידי NIH גרנט 1R21AG031965-01A1. ח"כ הוא רפואי אליסון קרן מלומד חדש הזדקנות.