الشيخوخة في الخميرة الزمني يشير الى فقدان قابلية الخلايا المرتبطة بها مع مرور الوقت في مرحلة ثابتة. نحن هنا وصف أسلوب الإنتاجية العالية لتحديد كميا مدى الحياة الخميرة زمني.
Abstract
الخميرة في مهدها<em> السكيراء الجعوية</em> وقد ثبت أن كائن نموذجا هاما في مجال البحوث الشيخوخة<sup> 1</sup>. وتنسخي ويمتد زمنيا الحياة هما النماذج المستخدمة لدراسة وضع الشيخوخة في الخميرة. وتعرف الشيخوخة تنسخي حيث بلغ عدد خلايا الخميرة والدة ابنة وحيدة الخلية تنتج قبل الشيخوخة ، ويمكن تعريف الشيخوخة الزمني بواسطة طول الوقت خلايا البقاء في حالة هدوء غير تقسيم شبيهة<sup> 2</sup>. طورنا أسلوب الإنتاجية العالية للقياس الكمي لمدى الحياة زمني. هذا الأسلوب ينطوي شيخوخة الخلايا في المتوسط في إطار تعريف التحريض وعند درجة حرارة ثابتة. في كل نقطة العمر ، تتم إزالة السكان فرعية من الخلايا من الشيخوخة وتحصين الثقافة المتوسطة في النمو الغنية. بعد ذلك يتم الحصول على النمو وارتفاع القرار منحنى لهذه الفئة من السكان دون سن من الخلايا باستخدام آلة Bioscreen MBR C. ثم يتم تطبيق خوارزمية لتحديد الحصة النسبية من خلايا قابلة للحياة في كل من الفئات السكانية الفرعية على أساس حركية النمو في كل نقطة في سن. هذه الطريقة تتطلب وقتا أقل بكثير والموارد بالمقارنة مع غيرها من المقايسات عمر زمني مع الحفاظ على استنساخ والدقة. ينبغي للطبيعة عالية الإنتاجية من هذا الاختبار يسمح للشاشات واسعة النطاق الوراثية والكيميائية لتحديد معدلات طول العمر رواية للمزيد من التجارب في الكائنات الحية أكثر تعقيدا.
Protocol
الجزء 1 : التحضير للثقافات الشيخوخة سلالات متواصلة من الاهتمام من الأسهم المجمدة على لوحات أجار YEPD (1 خلاصة الخميرة ٪ و 2 ٪ bacto – ببتون ، أغار 2 ٪ ، السكر بنسبة 2 ٪). احتضان الخلايا في 30 ˚ مئوية لمد?…
Discussion
الحياة زمني عالية الإنتاجية مقايسة تمتد الموصوفة هنا هو وسيلة فعالة لقياس القدرة الشيخوخة أعداد كبيرة من السلالات ذات الدقة العالية والدقة. التقدم الرئيسي لهذا الأسلوب أكثر من الطرق التقليدية لتحديد بقاء على قيد الحياة من خلال إحصاء الوحدات المكونة للمستعمرة (انظر…
Acknowledgements
وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح 1R21AG031965 – 01A1. عضو الكنيست هو باحث طبي جديد اليسون مؤسسة في الشيخوخة.