Ici, nous présentons une méthode pour sélectionner pour de nouvelles variantes de la bitine-protéine E. coli ligase BirA qui biotinylates un peptide cible spécifique. Le protocole décrit la construction d'un plasmide pour l'affichage bactérien du peptide cible, la génération d'une bibliothèque BirA, la sélection et la caractérisation des variantes de BirA.