A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Chapters
- 00:10Introduction
- 00:42Expression and Purification of Target Protein and Tagged Ubiquitin
- 03:15Immunoprecipitation
- 04:51SDS-PAGE and Immunostaining
- 05:48Detection of Protein Ubiquitination in vitro
- 07:02Representative Results
- 08:22Conclusion
Ubiquitinação é uma modificação fundamental posttranslational realizado por um conjunto de três enzimas. Mutações dos genes envolvidos nesta modificação estão associadas com diferentes tipos de doenças humanas. Aqui, descrevemos os protocolos para detectar ubiquitinação de proteínas em células cultivadas<em> In vivo</emTubos> e testar<em> In vitro</em>.
Tags
Protein UbiquitinationPosttranslational ModificationUbiquitin-activating Enzyme E1Ubiquitin-conjugating Enzyme E2Ubiquitin Ligase E3Deubiquitylating EnzymesProtein StabilityCellular LocalizationBiological ActivityGene MutationsHuman DiseasesCancerNeurodegenerationMetabolic DisordersPathogenesisDetection ProtocolsCultured Cells In VivoTest Tubes In VitroSumolyationNeddylation
