미국 호르세쇼 게, Limulus Polyphemus의 혈액 수집
Summary
미국 말굽 게, Limulus polyphemus은 틀림없이 모든 무척추 동물의 혈액의 다량을 위해 가장 편리한 소스입니다. 혈액의 일반적인 순환, 세분화 amebocyte, 그리고 플라즈마, hemocyanin, C – 반응 단백질 및 α2 – macroglobulin에서 3 풍부한 단백질에 하나의 셀 유형, 구성의 간단하다. 혈액은 심장에서 수집되고 혈액 세포 및 플라즈마 원심 분리로 구분됩니다.
Abstract
말굽 게 어떤 긴 무척추 동물의 가장 특징 면역 체계가 있습니다. 말굽 게는에서 면역의 연구는 혈액의 대량 수집 용이성으로하고 혈액의 단순에서 촉진되었다. 말굽 게는 일반적인 순환, 세분화 amebocyte에서만 하나의 셀 유형을 보여줍니다. 플라즈마는 바닷물의 염분 성분을 가지고 있으며, 단지 세 풍부한 단백질, hemocyanin, 호흡기 단백질, C – 반응 박테리아 세포를 포함한 외부 세포의 cytolytic 파괴 기능 단백질, 및 α2 – macroglobulin은 프로 테아제를 억제하는 병원균을 침해니다. 혈액은 lipopolysaccharide (일명, 내독소, LPS), 그람 음성 세균의 제품으로 오염을 최소화 조건 하에서 직접 심장 주사에 의해 수집됩니다. 혈액 400 ML – 대형 동물은 200를 얻을 수 있습니다. 플라즈마의 연구, 혈액 세포는 즉시 원심 분리에 의해 혈장에서 제거되며 플라즈마 다음의 구성 단백질로 fractionated 수 있습니다. 혈액 세포가 편리하게 다음 그 coverglasses를 장착, 문화 접시 표면에 대한 자세한 중 하나 LPS 무료 coverglasses를 삽입하여 직접 현미경 검사를 허용 조건 LPS 무료 isotonic 호수 (0.5 M NaCl)에 혈액 작은 볼륨을 수집하여 미세 공부 아르 세포 부착 다음과 같은 간단한 관측 실 인치 직접 관찰을위한 두 번째 준비 3를 수집하는 것입니다 – LPS없는 배아 요리의 혈액 5 ML하고 다음 실로 총체적 amebocytes의 조각을 explanting하는 슬라이드와 coverglass 사이에 샌드위치가 조직. 이 준비에서 운동성이있는 amebocytes 그들이 쉽게 볼 수 있습니다 coverglass 표면에,에 마이 그 레이션. 혈액 응고 시스템 amebocytes의 집합과 혈액 세포의 분비 과립의에서 발표되는 단백질, coagulin의 세포외 응고의 형성을 포함한다. 세탁 혈액 세포의 생화 학적 분석 2퍼센트 트윈 – 20, 0.5 M LPS 무료 NaCl, 세포의 원심 분리에 의해 다음과 0.5로 세척 M의 0.1 볼륨으로 혈액을 수집하여 수행할 수 수 집합과 degranulation가 발생하지 않습니다을 필요로 NaCl.
Protocol
Discussion
말굽 게 4 종의, 동쪽의 북아메리카 해안 세 종 일본에서 벵골 만 해당 범위에서 Limulus polyphemus의가 있습니다. 해부학적인 몸의 구조와 유사한 형태가 27 4억4천5백만년 전에서 화석으로 발견 되었기 때문에 동물은 "살아있는 화석"으로 식별됩니다. 성숙에 도달 13 년 최소한 20 년은 28 생활 – 말굽 게 10을 필요로하는, 긴 동물을 나타냅니다. 그것은 장어와 콘치 어업 29 미끼로 ?…
Acknowledgements
위에서 설명한 기존 연구는 NSF 교부금 0,344,630에 의해 지원되었다.
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