כאן מתואר פרוטוקול לאיסוף ושמירה על מושבות נמלים בריאות מסוג Atta (Hymenoptera: Formicidae) בתנאי מעבדה. בנוסף, סוגי קנים ותצורות שונות מפורטים יחד עם הליכים ניסיוניים אפשריים.
נמלים הן אחת הקבוצות המגוונות ביותר מבחינה ביולוגית של בעלי חיים על פני כדור הארץ ומאכלסות סביבות שונות. תחזוקת מושבות נמלים בסביבות מבוקרות מאפשרת הבנה מועשרת של הביולוגיה שלהן שיכולה לתרום למחקר יישומי. נוהג זה משמש בדרך כלל במחקרי בקרת אוכלוסייה של מינים הגורמים להפסד כלכלי, כגון נמלי אטא. כדי לטפח את הפטרייה ההדדית שלהם, נמלים חותכות עלים אלה אוספות עלים ולשם כך נחשבות למזיקים חקלאיים הנפוצים ברחבי יבשת אמריקה. הם מאורגנים חברתית מאוד ומאכלסים קנים תת-קרקעיים מורכבים המורכבים ממגוון תאים. תחזוקתם בסביבה מבוקרת תלויה בשגרה יומית של מספר נהלים וטיפול תכוף המתוארים כאן. זה מתחיל עם אוסף של מלכות במהלך עונת הרבייה (כלומר, טיסת נישואין), אשר מועברים בנפרד למכלי פלסטיק. בשל שיעור התמותה הגבוה של מלכות, איסוף שני יכול להתבצע כ -6 חודשים לאחר טיסת הנישואין, כאשר קינים עם פטריות מפותחות נחפרים, נקטפים ביד ומונחים במיכלי פלסטיק. במעבדה, עלים מסופקים מדי יום למושבות מבוססות, ופסולת המיוצרת על ידי נמלים מוסרת מדי שבוע יחד עם שאריות חומר צמחי יבש. ככל שגינת הפטריות ממשיכה לגדול, מושבות מועברות לסוגים שונים של מכולות בהתאם למטרת הניסוי. מושבות נמלים חותכות עלים ממוקמות במיכלים מחוברים, המייצגים את המערכת הארגונית עם תאים פונקציונליים שנבנו על ידי אותם חרקים בטבע. מערך זה אידיאלי לניטור גורמים כגון כמות פסולת, בריאות פטריות בגינה והתנהגות העובדים והמלכה. איסוף נתונים קל ותצפיות מפורטות יותר נחשבים ליתרון הגדול ביותר של שמירה על מושבות נמלים בתנאים מבוקרים.
נמלים מרכיבות קבוצה מגוונת של פרטים המשפיעים על רוב הסביבות היבשתיות1. הם פועלים כמפזרים יעילים 2,3,4, טורפים5 ומהנדסי מערכות אקולוגיות 6,7,8,9,10, ומדגישים את חשיבותם והצלחתם האקולוגית במערכות אקולוגיות טבעיות. כל מיני הנמלים מסווגים כחרקים אאוסוציאליים; עם זאת, הארגון החברתי שלהם משתנה מאוד בין קבוצות מינים שונות, כלומר, מערכות חלוקת עבודה, קבוצות פונקציונליות, תקשורת בין פרטים, ארגון מספוא, יסוד מושבה ותהליך רבייה11. כקבוצה מגוונת מאוד, הם פונים למספר משאבי מזון והתנהגויות האכלה מיוחדות. לאמיתו של דבר, החקלאות לא היתה רק צעד ענק עבור הציוויליזציה האנושית, אלא גם עבור מיני נמלים. לפניכ-55 עד 65 מא לפני 12, נמלי אטין החלו להתרבות פטריות ולשלב אותן בתזונה כמעט בלעדית. הם התמחו עד כדי כך שהם פיתחו אינטראקציות קפדניות, תלויות ומחייבות המסווגות כסימביוזה, שבה אדם אחד אינו שורד ללא השני.
נמלים שמגדלות פטריות נמוכות יותר אוספות ומעבדות חומר אורגני מת, כגון שברי עלים נרקבים, כדי לגדל את הפטרייה ההדדית שלהן; בעוד נמלים הגדלות פטריות גבוהות יותר קוטפות חומר צמחי טרי, ומרכיבות את אחת המערכות הטבעיות הסימביוטיות המוצלחות ביותר13. טכניקה חקלאית מיוחדת זו אפשרה להם לתפוס נישה חדשה. נמלי האטין הגבוהות יותר כוללות את הנמלים חותכות העלים, קבוצה מונופילטית המעוררת בין 19 מא (15-24 מא) ו-18 מא (14-22 מא)14,15,16 המורכבת מארבעה סוגים תקפים: אטא פבריציוס, אקרומירמקס מאייר, אמוימירמקס כריסטיאנו ופסאודוטה גאלארדו. מערכת החקלאות חותכת העלים המבוצעת על ידי הנמלים חותכות העלים, התפתחה ממערכות חקלאות נגזרות17. רוב המינים הללו מנצלים באופן בלעדי את מין הפטרייה ההדדית Leucoagaricus gongylophorus Singer18 (נקרא גם Leucocoprinus gongylophorus Heim 19), מה שמסמן מעבר אבולוציוני משמעותי 11. זני הפטריות מועברים אנכית, מקינים מקוריים לצאצאים, מה שמרמז על כך שהם מופצים באופן משובט20.
למרבה הפלא, חברות עטא פיתחו מבנה ארגוני מורכב בעל חשיבות עצומה בסביבתן ועניין רב למירמקולוגים. אוכלוסייתן יכולה להיות מורכבת ממיליוני פרטים, רובם עובדות סטריליות המציגות פולימורפיזם מודגש, כלומר גודל מובחן ומורפולוגיה אנטומית. האוכלוסייה נבדלת על ידי קאסטות על פי גיל, מצב פיזיולוגי, סוג מורפולוגי, התנהגויות ופעילויות מיוחדות במושבה21. ניתן להפלות את העובדים לגננים ואחיות, גנרלים בתוך הקן, מגדלים וחופרים, ומגינים או חיילים21. ארגון זה מאפשר ביצוע משימות בשיתוף פעולה ומערכת ארגון עצמי שיכולה לייצר התנהגויות קולקטיביות מובנות מאוד, ומאפשרת להם להגיב ביעילות להפרעות סביבתיות22.
את תפקיד התחדשות האוכלוסייה ממלאת מלכה אחת (כלומר, מונוגנית), כל עוד היא חיה, המהווה את קאסטת הרבייה הקבועה22. ידוע כי מלכות אטא חיות יותר מ-20 שנה, ומטלות ביצים לאורך כל תוחלת החיים שלהן23. מכיוון שלמלכה אין תחליף, הסיבולת שלה חיונית להישרדותה של המושבה 13,20,23,24. עם זאת, אלפי נקבות וזכרים בעלי כנף נמצאים בקן בעונות הרבייה, אך אף אחד מהם לא נשאר בקן המקורי, ויוצר קאסטהזמנית 22. במושבות Atta sexdens מיוצרים כמעט 3,000 נקבות רבייה ו-14,000 זכרי רבייה25. היא מתרחשת כאשר מושבה מגיעה לבגרות מינית, כ-38 חודשים מיישומה, וחוזרת על עצמה מדי שנה מאז ועד לכיבויה23,25. מושבות אטא חדשות מוקמות באמצעות הפלומטרוזיס, שם מלכה אחת מתחילה קן חדש.
כאשר התנאים הסביבתיים נוחים, המשכפלים עוזבים את הקן התת-קרקעי כדי להתחיל את טיסת הנישואין. תקופת התרחשותו משתנה לפי אזור, ונעה לאורך השנה ברחבי השטח הברזילאי בהתאם למין. עם זאת, נראה כי לאירוע קדמו גשמים וגובה לחות26, אשר יכול להיות קשור להקלה על החפירה בשל לחות הקרקע22. לעתים קרובות, 1-5 שבועות לפני טיסת הנישואין, כניסות הקן ותעלות מורחבות כדי להקל על הרבייה לעזוב. לפני שהן עוזבות את מושבות האם שלהן, הנקבות המכונפות אוספות ומאחסנות, בחלל תת-קרקעי, חלק מהפטרייה ההדדית20,27. מספר רב של זיווגים מבוצעים באמצע הטיסה, ומחושב כי מלכה אחת יכולה להיות מוזרעת על ידי שלושה עד שמונה זכרים (כלומר, פוליאנדריה) במינים מסוימים28, מה שמבטיח שונות גנטית29. לאחר מכן, המלכות ממשיכות לאדמה, תוך מתן עדיפות למקומות ללא או מעט צמחייה25, שם הן מסירות את כנפיהן וחופרות את חדר הקן הראשון שלהן. זו התקופה היחידה שבה ניתן לראות מלכות מחוץ לקן. אף על פי שפרטים מהקאסטה הזמנית נראו בקנים מלאכותיים, לא ידוע אם כל התנגשות מוצלחת (כלומר, טיסת נישואין) בוצעה בתנאי מעבדה24.
בניית הקן הראשונית תואמת את התקופה הקריטית ביותר של המושבה, שיכולה להימשך בין 6 שעות ל 8 שעות23,25. ברגע זה, המלכה cloisters עצמה בחדר הראשוני, ובתוך ימים ספורים, oviposition מתחיל. הביצים הראשונות מוזנות לתפטיר שהמלכה משחזרת, ומסמן את תחילתו של גן הפטריות של המושבה. הזחלים הראשונים מופיעים בערך 25 ימים22, וכמעט בסוף החודש הראשון, המושבה מורכבת מחצלת של פטריות מתרבות, שבה מקננים לא בוגרים (ביצים, זחלים וגלמים), והמלכה, שמגדלת את צאצאיה הראשונים בבידוד23. ביצים הן גם משאב המזון של הזחלים הראשונים ונצרכים מאוד על ידי המלכה13. בנוסף, המלכה מקיימת את עצמה עם עתודות שומן בגוף ושרירי כנף קטבולים שכבר אינם בשימוש13. תרבות הפטרייה הראשונית אינה נצרכת שכן הישרדות המושבה תלויה בהתפתחותה, ובתקופה זו המלכה מפרה אותה בנוזל צואה13. ימים ספורים לאחר ההתעוררות, העובדים הראשונים פותחים את הכניסה לקן ומתחילים בפעילות זיוף באזור המיידי של הקן13. הם משלבים את החומר שנאסף כמצע של גן הפטריות, המשמש כיום כמזון לעובדים13,22. לפני שמוסיפים אותו לתרבית הפטריות, החומר הצמחי שמכניסים העובדים נחתך לחתיכות קטנטנות ומרטיב בנוזל צואה13. הנמלים מתמרנות את הפטרייה כדי להגביר ולשלוט בצמיחתה, אשר תשמש לחלוקת תאים גדולים שנחפרו באדמה, המתמחה במיזוג הגן 13,22,25.
כ-6 חודשים לאחר טיסת הנישואין, קינים של A. sexdens מכילים תא פטריות וכמה ערוצים. ההתמחות הגדולה בבניית קני נמלים חותכות עלים פועלת כמנגנון הגנה מפני אויבים טבעיים וגורמים סביבתיים שליליים22. ידוע כי נמלים חותכות עלים קוטעות את גינת הפטריות ומעבירות אותה לתאים בלחות גבוהה כאשר התאים מתחילים להתייבש13. כך, למרות שלחפירת הקן יש עלות אנרגיה ניכרת, האנרגיה המושקעת מתהפכת בתועלות עבור המושבה עצמה22. למעט כמה יוצאים מן הכלל, מיני אטא גם מייצרים תאים מיוחדים לפסולת המושבה, העשויים בעיקר ממצע פטריות מדולדל ומגופות של נמלים מתות, מבודדים אותה משאר הקן, ומבססים אסטרטגיית חסינות חברתית חשובה30. בנוסף, קבוצה מובחנת של עובדים לתמרן את הפסולת ישירות, כדי למנוע זיהום של אנשים אחרים. העובדים כל הזמן מספוא כדי לטפח את הפטרייה, שהיא המשאב התזונתי העיקרי של המושבה. עם זאת, הם יכולים להיזון גם מוהל צמחים תוך חיתוך שברים. החומר הצמחי נבחר בקפידה לתחזוקת גינת הפטריות ומושפע מגורמים רבים כגון תכונות העלים ותכונות המערכת האקולוגית13.
אסטרטגיית הזיוף של נמלים חותכות עלים כדי להשיג חומר טרי היא מורכבת ביותר, ובשילוב עם הביקוש הגבוה לקציר של מושבות מבוססות, גורמים להפסד כלכלי ניכר ליצרנים החקלאיים ומסכנים את שטחי שיקום היערות22,31. לכן, נמלים אלה ניתן לסווג כמזיקים ברוב האזורים שבהם הם עשויים להיתקל, החל מדרום ארצות הברית לצפון מזרח ארגנטינה 11,13,22,32. כיבוין של מושבות בעייתיות הוא מאתגר בשל סדרת ההתאמות הטבועות בביולוגיה של חרקים אלה (כלומר, ארגון חברתי, הזדקנות, גידול פטריות, היגיינה ומבני קן מורכבים)33. לפיכך, אסטרטגיות בקרת האוכלוסייה נבדלות מאלו המיושמות בדרך כלל על מזיקים חרקים אחרים, ונוקטות בעיקר בהצעות אטרקטיביות של פיתיונות מזוהמים33,34. עם זאת, מכיוון שנמלים אלה יכולות לדחות חומרים מזיקים הן לפטרייה והן לפרטי המושבה, ולפגוע בשדות מעובדים 33, תרכובות טבעיות חדשות וחלופות של הדברה נבדקות כל הזמן33,35,36. מכיוון שקשה לעקוב אחר תוצאות הניסויים במושבות שנבדקו בשטח, מאמרים ראשוניים נערכים בסביבה מבוקרת.
לפיכך, פרוטוקולים ניסיוניים חייבים להיות מותאמים לקבוצות עניין בהתחשב באורח החיים ההטרוגני של נמלים, לתמוך במחקרים ברמת המין, ולקחת בחשבון מושבות כיחידות מבצעיות, שבהן נמלה אחת היא מרכיב של סופר-אורגניזם מורכב11. הדיווחים שנאספו עד כה בנוגע לסוג עטא אפשרו לאסוף ולתחזק בהצלחה מושבות בתנאי מעבדה ולהכיר בצרכים הבסיסיים שלהן ובתפקודן הכללי. בהתבסס על התהליכים הטבעיים שלהם כגון רבייה, הקמת מושבות והתנהגויות האכלה, פותחה שגרה של פרקטיקות המאפשרות הקמה ארוכת טווח של מושבות בסוגים שונים של קינים. כאן מתואר פרוטוקול פרוצדורלי לשמירה על נמלים חותכות עלים במעבדה ומדגיש מחקר כללי אפשרי עם מטרות ניסוי שונות והסברה מדעית.
הפרוטוקול המתואר כאן לשמירה על מושבות נמלים חותכות עלים פותח ויושם במשך למעלה משלושה עשורים בצורה אסרטיבית וניתנת לשכפול. היא אפשרה פיתוח מחקר שיהיה מוגבל על ידי תנאי שדה. לפיכך, נמלים ומושבות בריאות הפכו לזמינות למחקר במספר תחומים כגון מורפולוגיה השוואתית, טוקסיקולוגיה 51,52, היסטולוגיה<su…
The authors have nothing to disclose.
מוקדש למריו אוטואורי (לזכרו) ולוולטר הוגו דה אנדרדה קוניה שתרמו רבות למחקרי הנמלים חותכות העלים. אנו מכירים בתמיכתם של אוניברסיטת סאו פאולו והמכון למדעים ביולוגיים. מחקר זה מומן בחלקו על ידי Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior-Brasil (CAPES) – Finance Code 001, Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq), Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP), ו- Fundação para o Desenvolvimento da UNESP (Fundunesp).
Entomologic forceps | N/A | N/A | N/A |
Glass tank | N/A | N/A | Tempered glass, custom made |
Hose | N/A | N/A | Transparent, PVC 1/2 Inch x 2,0 mm |
Latex gloves | Descarpack | 550301 | N/A |
Nitrile gloves | Descarpack | 433301 | N/A |
Open arena | N/A | N/A | Polypropylene crate |
Plaster pouder | N/A | N/A | Plaster pouder used in construction, must be absorbant |
Plastic Containers for collection | Prafesta | Natural Cód.: 8231/Natural Cód.: 8262 | Lidded, transparent , polypropylene |
Plastic containers for nests | Prafesta | Discontinued | Polystyrene, hermetic |
Teflon | Dupont | N/A | Polytetrafluoroethylene liquid (PTFE Dispertion 30) |