Summary

Un modello di roditore dell'operazione di Ross: impianto di innesto di arteria polmonare singenica in una posizione sistemica

Published: April 01, 2022
doi:

Summary

Dimostriamo come stabilire un modello murino di impianto della radice polmonare nell’aorta discendente per simulare la procedura di Ross. Questo modello consente la valutazione a medio/lungo termine del rimodellamento dell’autotrapianto polmonare in posizione sistemica, rappresentando la base dello sviluppo di strategie terapeutiche per favorirne l’adattamento.

Abstract

L’operazione di Ross per la malattia della valvola aortica ha riacquistato nuovo interesse grazie ai suoi eccezionali risultati a lungo termine. Tuttavia, quando impiegato come sostituto della radice indipendente, viene descritta la possibile dilatazione dell’autotrapianto polmonare e il successivo rigurgito aortico. Sono stati proposti diversi modelli animali. Tuttavia, questi sono solitamente limitati a modelli ex-vivo o esperimenti in vivo con modelli animali di grandi dimensioni relativamente costosi. In questo studio, abbiamo cercato di stabilire un modello di roditore di impianto di innesto di arteria polmonare (PAG) in una posizione sistemica. Sono stati inclusi un totale di 39 ratti Lewis adulti. Subito dopo l’eutanasia, la radice polmonare è stata raccolta da un animale donatore (n = 17). I ratti singenici riceventi (n=17) e sham-operated (n=5) sono stati sedati e ventilati. Nel gruppo ricevente, il PAG è stato impiantato con un’anastomosi end-to-end in posizione aortica addominale infra-renale. I ratti operati da Sham hanno subito solo transezione e re-anastomosi dell’aorta. Gli animali sono stati seguiti con studi ecografici seriali per due mesi e analisi istologiche post-mortem. Il diametro pagno mediano in posizione nativa era di 3,20 mm (IQR=3,18-3,23). Al follow-up, il diametro mediano del PAG era di 4,03 mm (IQR = 3,74-4,13) a 1 settimana, 4,07 mm (IQR = 3,80-4,28) a 1 mese e 4,27 mm (IQR = 3,90-4,35) a 2 mesi (p <0,01). La velocità sistolica di picco era di 220,07 mm/s (IQR=210,43-246,41) a 1 settimana, 430,88 mm/s (IQR=375,28-495,56) a 1 mese, e 373,68 mm/s (IQR=305,78-429,81) a 2 mesi (p=0,02) e non differiva dal gruppo a gestione fittizia alla fine dell'esperimento (p=0,5). L'analisi istologica non ha mostrato alcun segno di trombosi endoteliale. Questo studio ha dimostrato che i modelli di roditori possono consentire la valutazione dell'adattamento a lungo termine della radice polmonare a un sistema ad alta pressione. Un impianto pag singenico posizionato sistematicamente rappresenta una piattaforma semplice e fattibile per lo sviluppo e la valutazione di nuove tecniche chirurgiche e terapie farmacologiche per migliorare ulteriormente i risultati dell'operazione Ross.

Introduction

La stenosi congenita della valvola aortica è un sottogruppo di cardiopatia congenita caratterizzata da un’ostruzione del tratto ventricolare sinistro in cui la lesione si trova a livello valvolare. La malformazione colpisce circa 0,04-0,38 per 1000 nati vivi1.

Le opzioni disponibili per la correzione sono molte, ognuna con i suoi vantaggi e svantaggi. Per i pazienti idonei a una correzione biventricolare2, l’approccio può essere finalizzato alla riparazione valvolare (valvulotomia percutanea o chirurgica) o alla sua sostituzione3. Quest’ultimo è preferito quando la valvola aortica è considerata irrecuperabile; tuttavia, le opzioni disponibili sono limitate per i pazienti pediatrici. Infatti, le valvole bioprotesiche non sono indicate per la sostituzione aortica nella popolazione giovane a causa della loro calcificazione precoce4. D’altra parte, la degenerazione nelle valvole meccaniche è considerevolmente più lenta, ma queste richiedono una terapia anticoagulante per tutta la vita5. Inoltre, la principale limitazione di queste protesi è rappresentata dalla mancanza di potenziale di crescita, che predispone i pazienti a ulteriori reinterventi.

Un’opzione terapeutica interessante nella popolazione pediatrica è il trasferimento dell’autotrapianto polmonare nella posizione aortica denominata “operazione di Ross”. In questo caso, la valvola polmonare viene quindi sostituita con un omoinnesto (Figura 1)6. Questa procedura può rappresentare la migliore scelta chirurgica per i bambini perché l’autoinnesto polmonare preserva il suo potenziale di crescita e non comporta i rischi della terapia anticoagulante per tutta la vita. Inoltre, la procedura di Ross può essere di grande valore anche nei giovani adulti per evitare una valvola meccanica o biologica, avendo il potenziale per diventare la migliore soluzione chirurgica.

I risultati dopo la sostituzione della valvola aortica con autoinnesto polmonare sono eccellenti, con una sopravvivenza superiore al 98% e buoni risultati a lungo termine7. Studi di letteratura riportano il 93% e il 90% di libertà dalla sostituzione dell’omotrapianto polmonare rispettivamente a 4 e 12 anni8.

Il principale limite di questa procedura è la tendenza dell’autoinnesto a dilatarsi a lungo termine, specialmente se impiegato come sostituto della radice indipendente. Ciò può causare incompetenza valvolare che può richiedere un nuovo intervento. In effetti, lo studio di follow-up più lungo eseguito finora riporta l’assenza di reintervento per la sostituzione dell’autotrapianto dell’88% a 10 anni e del 75% a 20 anni9.

La possibilità di ricreare un’operazione di Ross in ambito sperimentale rappresenta un prerequisito fondamentale per indagare il meccanismo alla base dell’adattamento dell’autoinnesto polmonare alle pressioni sistemiche. Diversi modelli sono stati proposti in passato. Tuttavia, questi sono solitamente limitati a esperimenti ex-vivo o modelli animali in vivo con animali di grandi dimensioni relativamente costosi. In questo studio, abbiamo cercato di stabilire un modello di roditore di impianto di innesto di arteria polmonare (PAG) in posizione sistemica, come radice indipendente.

Protocol

Tutte le procedure sono state approvate dal Comitato per la Cura degli Animali dell’Università di Padova (OPBA, numero di protocollo n° 55/2017) e autorizzate dal Ministero della Salute italiano (Autorizzazione n° 700/2018-PR), in conformità alla Direttiva dell’Unione Europea 2010/63/UE e alla Legge Italiana 26/2014 per la Cura e l’Uso degli Animali da Laboratorio. 1. Cura degli animali e modello sperimentale Assicurarsi che tutti i ratti Lewis siano ottenuti da …

Representative Results

Un totale di 39 ratti Lewis adulti sono stati inclusi in questo studio: 17 animali sono stati utilizzati come donatori di PAG, 17 animali come riceventi e 5 come finti (gruppo di controllo) (Tabella 1). I ratti maschi erano 22 (56%) e le femmine 17 (44%); questi ultimi sono stati utilizzati solo nel gruppo dei donatori. Nessun evento fatale si è verificato durante l’operazione con una sopravvivenza del 100%. Durante il follow-up, due animali del gruppo di trapianto hanno avut…

Discussion

La sostituzione della valvola aortica con la radice polmonare autologa (operazione di Ross) rappresenta un’opzione interessante per la riparazione della stenosi della valvola aortica congenita a causa del profilo favorevole e della potenziale crescita dell’autoinnesto10. Il principale limite a questa procedura è la potenziale dilatazione della neovalvola aortica, che predispone allo sviluppo di rigurgito a lungo termine. La possibilità di caratterizzare le modificazioni sull’arteria polmonare do…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Lo studio è stato finanziato dal bilancio integrato per la ricerca interdipartimentale (BIRD) 2019.

Materials

0.9% Sodium Chloride Monico SpA AIC 030805105 Two bottles of 100 mL. The cold one (4°C) for flushing the harvesting organ; the warm one (39°C) for moistening, and rehydration of the recipient
7.5% Povidone-Iodine B Braun AIC 032151211
Barraquer Aesculap FD 232R Straight micro needle holder for the vascular anastomoses
Castroviejo needle holder Not available J 4065 To close the animal
Clip applying forceps Rudolf Medical RU 3994-05 For clip application
Cotton swabs Johnson & Johnson Medical SpA N/A Supermarket product. Sterilized
Curved micro jeweller forceps Rudolf Medical RU 4240-06 Used to pass sutures underneath the vases.
Depilatory cream RB healthcare N/A Supermarket product
Electrocautery machine LED SpA Surton 200
Fine scissors Rudolf Medical RU 2422-11 For opening the abdomen (recipient)
Fine-tip curved Vannas micro scissors Aesculap OC 497R Only for preparing the pulmonary root, cut the lumbar vases and the 10/0 Prolene
Fluovac Isoflurane/Halotane Scavanger unit Harvard Apparatus Ltd K 017041 Complete of anesthesia machine, anesthesia tubing, induction chamber and scavenger unit with absorbable filter
Gentamycin MSD Italia Srl AIC 020891014 Antibiotic. Single dose, 5 mg/kg intramuscular, administered during surgery
Heparin Pharmatex Italia Srl AIC 034692044 500 IU into the recipient abdominal vena cava
I.V. Catheter Smiths Medical Ltd 4036 20G
Insulin Syringe, 1 mL Fisher Scientific 14-841-33 To inject heparin in the harvesting animal and to flush the sectioned aorta in the recipient
Jeweler bipolar forceps GIMA SpA 30665 0.25 mm tip. For electrocautery of very small vases
Lewis rats (LEW/HanHsd) Envigo RMS SRL, San Pietro al Natisone, Udine, Italy 86104M Male or female, weighing 200-250 g (pulmonary root harvesting animals) and 320-400 g (recipients)
Micro-Mosquito Rudolf Medical RU 3121-10 In number of four, with tips covered with silicon tubing. To keep in traction the Prolene suture during anastomosis
Operating microscope Leica Microsystems M 400-E Used with 6x, 10x and 16x in-procedure interchangeable magnifications
Perma-Hand silk 2-0 Johnson & Johnson Medical SpA C026D To lift the aorta
Petrolatum ophthalmic ointment Dechra NDC 17033-211-38
Prolene 10-0 Johnson & Johnson Medical SpA W2790 Very fine non-absorbable suture, with a BV75-3 round bodied needle, for the vascular anastomoses
Retractors Not any N/A Two home-made retractors
Ring tip micro forceps Rudolf Medical RU 4079-14 For delicate manipulation
Sevoflurane AbbVie Srl AIC 031841036 Mixed with oxygen, for inhalatory anesthesia
Spring type micro scissors Rudolf Medical RU 2380-14 Straight; 14 cm long
Standard aneurysm clips Rudolf Medical RU 3980-12 Two clips (7.5 mm; 180 g; 1.77 N) to close the aorta
Sterile gauze of non-woven fabric material Luigi Salvadori SpA 26161V 7.5×7.5 cm, four layers
Straight Doyen scissors Rudolf Medical RU/1428-16 For use to the donor
Straight micro jeweller forceps Rudolf Medical RU 4240-04 10.5 cm long. Used throughout the anastomosis
Syringes Artsana SpA N/A 20 mL (for the harvesting animal) and 5 mL (for the recipient). For saline flushing and dipping
TiCron 4-0 Covidien CV-331 For closing muscles and skin
Tissue forceps V. Mueller McKesson CH 6950-009 Used for skin and muscles
Tramadol SALF SpA AIC 044718029 Analgesic. Single dose, 5 mg/kg intramuscular
Virgin silk 8-0 Johnson & Johnson Medical SpA W818 For arterial branch ligation

References

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Dedja, A., Cattapan, C., Di Salvo, G., Avesani, M., Sabatino, J., Guariento, A., Vida, V. A Rodent Model of The Ross Operation: Syngeneic Pulmonary Artery Graft Implantation in A Systemic Position. J. Vis. Exp. (182), e63179, doi:10.3791/63179 (2022).

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