На основе клеток пробирного является широко используемым методом для обнаружения сыворотка анти Аквапорин-4 иммуноглобулина G. Этот метод может применяться для клинической диагностики и научных исследований нейромиелит оптического спектра расстройств.
Анти Аквапорин-4 (AQP4) иммуноглобулина G (IgG) является основной диагностики biomarker для нейромиелит optica спектра расстройств (NMOSD). На основе клеток пробирного (ЦБА) является широко используемым методом для обнаружения анти AQP4 IgG в сыворотке крови человека с высокой чувствительностью и специфичностью. Вкратце, сыворотка анти AQP4 IgG захвачен AQP4-transfected клеток, что является фиксированной на биочип затем определяется флуоресцеин, меченного вторичное антитело. Микроскопии флуоресцирования используется для визуализации флюоресценция, и интенсивность флуоресценции оценивается по крайней мере два опытных клиницистов. Окончательный диагноз NMOSD может производиться на основе на комбинации результаты обнаружения анти AQP4 IgG, клинические проявления и перенёс выводов. По данным предыдущих исследований ЦБА чувствительными, чем другие методы обнаружения анти AQP4 IgG, и оно может применяться для клинической диагностики и исследования NMOSD. Этот метод имеет ограничения; например в международном масштабе по оценке сыворотке крови анти AQP4 IgG титры по-прежнему отсутствует. Здесь описан подробный протокол для сыворотки крови человека анти AQP4 IgG обнаружения с помощью ЦБА.
Сыворотка AQP4 IgG-это основные диагностические biomarker для нейромиелит optica спектра расстройств (NMOSD)1. Пробирного ячейки на основе (ЦБА) является широко используемым анти AQP4 метод обнаружения IgG с высокой чувствительностью и специфичностью. Здесь представлен подробный протокол для АЗВ.
AQP4, белок канала воды, имеет шесть единиц, охватывающих мембраны и два винтовых доменов, вокруг один водный поры2. Анти-AQP4 IgG участвует в патогенезе NMOSD через привязку к ее целевому объекту AQP4, который расположен главным образом на endfeet астроциты3. Было показано, что анти AQP4 IgG положительный примерно две трети пациентов NMOSD4. В самых последних международных диагностические критерии для NMOSD считается, что основные диагностические биомаркер5анти AQP4 IgG. В этой связи крайне важно создать надежный протокол обнаружить сыворотке человека анти AQP4 IgG и облегчения клинический диагноз NMOSD.
В настоящее время доступны различные методы обнаружения анти AQP4 IgG, такие как ЦБА, на основе ткани пробирного, энзим соединенный assay иммуносорбента и потока цитометрии6,7. ЦБ Азербайджана занято EU90 клетки, которые являются transfected с человеческой AQP4, чтобы захватить анти AQP4 IgG. Захваченные анти AQP4 IgG обнаружены флуоресцентные вторичные антитела и впоследствии визуализированное микроскопии. Накопление доказательств показал, что АЗВ является более чувствительной, чем другие анти AQP4 IgG определение методов6,7. По словам мета анализ чувствительность и специфичность ЦБА было показано, что 76% и 99%, которые были выше, чем на основе ткани и иммуноферментного assays6. Кроме того многоцентровое Сравнение диагностических анализов анти AQP4 IgG был проведены7. В общей сложности 193 исследования, предметы из 15 европейских диагностических центров были зачислены7. Четыре различные методы были использованы для выявления сыворотка анти AQP4 IgG7. Было продемонстрировано, что куб был чувствительными, чем другие методы7. Как AQP4 выражается в виде двух основных изоформ (AQP4-M1 и AQP4-M23), анти AQP4 IgG захват клеток является transfected с AQP4-M1 или AQP4-M23. Однако какой тип захвата клеток — лучше остается спорным. Одно расследование поддерживает AQP4-M1 на базе ЦБ8, в то время как другие указали, что AQP4-M23 основе АЗВ является более7,9,10. Однако на основе AQP4-M23 ЦБА может дать ложные положительные результаты благодаря неспецифических IgG привязки8. Jarius и др.. 11 сообщили, что не было никаких существенных различий в показатели выявления IgG анти AQP4 AQP4-M1 и на основе AQP4-M23 КТД.
В резюме, сыворотка анти AQP4 IgG-это ядро biomarker для NMOSD. КУБ имеет выше специфичность и чувствительность, чем другие методы обнаружения анти AQP4 IgG. Она остается спорным ли AQP4-M1 – или AQP4-M23-на основе ЦБА лучше. В этой статье описан подробный протокол для АЗВ, основанные на AQP4-M1, которые можно применить к клинической диагностики и исследования NMOSD.
Мы описали широко доступный метод для обнаружения анти AQP4 IgG в сыворотке крови человека. Анти-AQP4 IgG тесно связана с NMOSD, и создание надежных анти AQP4 метод обнаружения IgG имеет решающее значение для клинической диагностики NMOSD. Во-первых анти AQP4 IgG специфичен для NMOSD. Рассеянный склероз явля?…
The authors have nothing to disclose.
Авторы признательны за поддержку от субсидий из национального фонда науки Китая (№ 31600820), здравоохранения и планирования семьи Комиссии провинции Цзилинь (нет 2016Q036) и наука и технология планирования проекта из провинции Цзилинь (No. 20180520110JH).
Anti-aquaporin-4 IIFT | Euroimmun | FA 1128-2005-50 | Contains biochip slides coated with AQP4-M1 transfected and untransfected EU 90 cells, fluorescein-labelled anti-human IgG, anti-AQP4 antibody as positive control, antibody negative sample, salt for PBS pH 7.2, Tween 20 and embedding medium. |
CellSens Dimension | OLYMPUS | N/A | photograph software |
Gel & clot activator tube | Improve medical | 623040202 | From a local Chinese company |