Ortotópico injeção de células de câncer de mama para a almofada de gordura mamária de ratos
Summary
Aqui, apresentamos um protocolo para implante de células de câncer de mama para a almofada de gordura mamária de forma simples, menos invasiva e fácil de manusear de maneira, e este modelo de câncer de mama ortotópico rato com um ambiente adequado do tecido mamário pode ser usado para investigar vários aspectos da câncer.
Abstract
Um modelo animal adequado é crucial para uma melhor compreensão de doenças. Animal modelos estabelecidos por métodos diferentes (injecções subcutâneas xenografts, manipulação genética, indução de reagentes químicos, etc.) tem vários personagens patológicas e desempenhar um papel importante na investigação de certos aspectos da doenças. Embora nenhum modelo único totalmente pode imitar a progressão da doença humana inteira, modelos de doença ortotópico órgãos com um ambiente adequado do estroma desempenham um papel insubstituível na compreensão de doenças e de rastreio de drogas potenciais. Neste artigo, descrevemos como implante de células de câncer de mama para a almofada de gordura mamária de forma simples, de maneira menos invasiva e fácil de manusear e siga a metástase para órgãos distantes. Com os recursos adequados de crescimento do tumor primário, da mama e alterações patológicas do mamilo e uma alta ocorrência de metástase de outros órgãos, este modelo màxima imita a progressão do câncer de mama humano. Tumor primário crescimento em situ, long-metástase à distância e o microambiente do tumor do câncer de mama podem ser investigada usando este modelo.
Introduction
Câncer de mama é a principal causa de mortalidade feminina em todo o mundo. Com sua incidência progressivamente crescente, câncer de mama tornou-se um sério desafio para a saúde pública1. Modelos de câncer murino são boas pontes entre os estudos pré-clínicos e clínicos, e um modelo de bom imitar murino doença aumentará a precisão das pesquisas sobre a doença e a medicina.
O crescimento do tumor primário começa o progresso da doença maligna, enquanto metástase e as complicações são as principais causas de morte e qualidades de vida pobre, na maioria dos pacientes de câncer. Vários modelos de murino são usados para imitar a patologia do câncer de mama humano2,3,4. Modelos de enxerto são amplamente utilizados para o estudo do câncer entender os personagens patológicos e às drogas da tela para a segurança e eficácia de6,5,7. Ratos geneticamente modificados (GEM) são gerados para imitar o câncer de mama humano pela segmentação determinados oncogenes ou tumor supressor genes8. GEM tem um fundo relativamente simples e uniformizado para entender o papel dos genes em andamento canceroso; no entanto, o ambiente artificial e fundo limitam-se a investigar a patologia de metástase e relacionados a terapias9. Células cancerosas humanas, embora com características patológicas humanas, poderá apenas ser implantadas em camundongos deficientes em imune, e a insuficiência da interação imune tumor-hospedeiro pode conduzir a resultados tendenciosos10.
Onde inicia o tumor sólido tem uma influência direta sobre os caracteres biológicos e patológicos da doença11,12,13. Desde que progresso canceroso é o complicado resultado das interações entre as células do tumor, células do estroma, células de Imunologia, células inflamatórias, fatores de crescimento e proteases, tumores primários implantados em situ fornecerá uma visão melhor e imitar o processo canceroso mais precisão do que tumores induzidos por agentes químicos ou uma injeção subcutânea de tumor de células. Agentes químicos utilizados para induzir tumores podem ser prejudiciais para os pesquisadores e o meio ambiente e até são proibidos em alguns países. Devido à ausência de um ambiente do tecido mamário, a evolução patológica de uma injeção subcutânea pode diferir com que em pacientes de câncer de mama real, cujo câncer se origina e irrita do pad gordo mamário. As desvantagens de injecções subcutâneas incentivam a utilização de modelos ortotópico para estudar o crescimento do tumor. Na pesquisa anterior, altamente metastáticos tumores MDA-MB-231, desenvolvidos após sete transplantes ortotópico, indicaram a importância da injeção local14. Recentemente, a implantação ortotópico de células de câncer de mama para a almofada de gordura mamária com cirurgia foi relatado15,16. Com o ambiente de almofada mamária, o crescimento do tumor e a migração para o disfarce de órgãos distantes de todo o processo de câncer de mama em sites relevantes patologicamente, que torna este modelo uma miniatura do progresso de doenças humanas. No entanto, após a cirurgia, a pele automaticamente tentativas para curar a próprio, que pode trazer o risco potencial de interferir com a originação de câncer mamário normal e influenciar os resultados.
Nós temos comparado a alguns modelos de câncer de mama e estabeleceu um modelo ortotópico minimamente invasiva para investigar o potencial efeito das drogas sobre1817,progressão do cancro da mama. Neste estudo, um protocolo de vídeo sobre como orthotopically injetar células de câncer de mama a almofada de gordura mamária de forma simples, da maneira menos invasiva é apresentada. Este método de injeção ortotópico sem cirurgia é vantajoso em muitos aspectos. Primeiro, a operação é simples e rápida, cerca de 1 minuto por rato. Em segundo lugar, com focos de tumor primário começando no sites bem patológicos, abrange o processo inteiro tumorigênico da progressão de câncer de mama do crescimento do tumor para outras metástases de órgãos, que fornece um bom modelo animal experimental para estudar a interação de células tumorais e o microambiente do tumor. Além disso, pode ser um modelo valioso para estimar os efeitos do tratamento em todas as fases do câncer de mama. O objetivo desse método é fornecer um modelo animal para a progressão de câncer de mama humano imitar màxima.
Protocol
Representative Results
Discussion
As células utilizadas neste estudo são 4T1-luc2, células cancerosas murino mama triplo-negativo com rotulagem luciferase, que são uma ferramenta útil para investir efeitos antitumorais e antimetastatic de drogas devido à sua natureza altamente invasivo2,19 . Luciferases, estáveis para a próxima geração de célula, são usados para indicar o tumor de vida células, ambos na glândula mamária e em outros órgãos distantes20. Em a…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Os autores gostaria de agradecer a Fundação Nacional de ciências naturais da China (grant n º 81873111, 81673924, 81774039, 81503517), a Fundação de ciência Natural de Beijing (grant n º 7172095, 7162084, 7162083) e a Xu Xia Fundação do Hospital de Beijing Medicina tradicional chinesa (conceder n, xx201701). Agradecemos o Prof Chang-Zhen Liu, do centro de pesquisa Experimental, China da Academia de ciências médicas chinesas, para imagens bioluminescentes.
Materials
| anesthesia machine | Midmark Corporation, Dayton, OH, USA | Matrx VMS | anesthesia |
| In-Vivo Imaging System | PerkinElmer | IVIS Spectrum | used for bioluminescence detecion |
| isoflurane | Hebei yipin chemical reagents company | O21400 | anesthesia |
| 1 ml syringe | Becton,Dickinson and Company | A257 | cell injection |
| digital caliper | Shang Hai Shen Han Measuring Tools Co., Ltd. | S-H | volume measurement |
| tramadol | Mundipharma company | – | pain killer |
| D-luciferin | Gold Biotechnology Inc. | LUCK-1G | used for bioluminescence detecion |
| The primary antibody against cluster of differentiation (CD) 31 | Abcam | ab28364 | used for MVD detection |
| hematoxylin and eosin staining kit | Beijing Zhong Shan Jinqiao Biotechnology Co., Ltd. | ZLI-9615 | histology |
| hair removal cream | Veet | – | hair removal cream |
| Carbomer Eye Gel | Dr.GerhardMannChem-Pharm.FabrikGmbH | – | ophthalmic ointment |
| sewing needle | Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd. | 17U0302J | suture |
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