Orthotopic 쥐 유 방 지방 패드 유방암 세포의 주입
Summary
여기, 우리는 간단 하 고, 침략, 그리고 쉽게 처리 방법, 더 적은에서 유 방 지방 패드에 유방암 세포를 이식 하는 프로토콜을 제시 하 고이 마우스 orthotopic 유 방 암 모델 적절 한 유 방 지방 패드 환경으로 사용할 수 있습니다의 다양 한 측면을 조사 하 암입니다.
Abstract
적절 한 동물 모델은 질병의 더 나은 이해를 위해 중요 합니다. 동물 모델 설립 (피하 주사, xenografts, 유전자 조작, 화학 시 약 유도, 등) 다른 방법으로 다양 한 병리학 자 및의 특정 측면을 조사 하 고 있는 중요 한 역할 질병입니다. 비록 아무 모형도 없다 완전히 전체 인간의 질병의 진행을 모방 수 있습니다, 적절 한 stromal 환경 orthotopic 장기 질병 모델 한 역할 대신할 질병을 이해 하 고 잠재적인 약물에 대 한 심사. 이 문서에서는, 우리는 간단 하 고, 더 적은 침략, 그리고 쉽게 처리 방법에서에서 유 방 지방 패드에 유방암 세포를 이식 하 여 먼 장기에 전이 수행 방법을 설명 합니다. 기본 종양 성장, 유 방 및 젖꼭지 병 적인 변화에의 적절 한 기능 및 다른 장기의 전이의 높은 발생, maximumly이 모델 인간의 유방암 암 진행을 모방합니다. 기본 종양 성장에서 제자리에서긴-먼 전이, 그리고 유방암의 종양 microenvironment이이 모델을 사용 하 여 조사 될 수 있다.
Introduction
유방암은 전세계 여성 사망의 주요 원인. 점차적으로 증가 발생률, 유방암 공중 보건1에 대 한 심각한 도전 되고있다. 암 murine 모델은 전 임상 및 임상 연구, 사이 좋은 교량 그리고 좋은 모방 murine 질병 모델 질병 및 의학 연구의 정확도 증가 합니다.
기본 종양 성장 전이 및 합병증은 죽음 및 가난한 생활 질 대부분의 암 환자에서의 주요 원인은 악성 질환의 진행을 시작 합니다. 여러 murine 모델은 인간 유 방 암2,,34의 병 리를 모방 하는 데 사용 됩니다. 이 종이 식 모델은 널리 사용 화면 약물을 병 적인 캐릭터를 이해 하는 암 연구에 대 한 안전과 효능5,,67. 유전자 조작된 생쥐 (보석) 특정 oncogenes 또는 종양 억제기 유전자8대상으로 인간의 유방암을 모방 하기 위해 생성 됩니다. 보석 암 진행; 유전자의 역할을 이해 하는 비교적 간단 하 고 제복을 입은 배경을 그러나, 인공 환경 및 배경 조사 전이 병 리 제한 됩니다 및 관련 요법9. 인간의 암 세포, 비록 인간의 병 적인 특징으로, 수만 이식 면역 결핍 생쥐에서 그리고 종양 호스트 면역 상호 작용의 부족 편견된 결과10으로 이어질 수 있습니다.
단단한 종양 시작 질병11,,1213의 생물 학적 및 병 적인 캐릭터에 직접적인 영향이 있다. 암 진행 종양 세포, stromal 세포, 면역 세포, 염증 세포, 성장 요인, 및 프로 테아 제 간 상호 작용의 복잡 한 결과 이기 때문에, 1 차 종양 이식 제자리에 것입니다 더 나은 통찰력을 제공 하 고 모방은 화학 약품 또는 종양의 피하 주입에 의해 유도 된 종양 보다 더 정확 하 게 세포 암의 과정. 종양을 유발 하는 데 사용 하는 화학 약품 연구자와 환경에 해로울 수 있습니다 하 고 심지어 일부 국가에서 금지 된다. 유 방 지방 패드 환경의 부재로 인해 실제 유방암 환자에 그 암 발생 및 유 방 지방 패드에서 그만두지 피하 주사의 진행 하는 병 적인 상황으로 달라질 수 있습니다. 피하 주사의 단점은 orthotopic 종양 성장 연구 모델의 사용을 권장 합니다. 이전 연구에서 높은 전이성 MDA-MB-231 종양, 7 orthotopic 간이식 후 개발 주입 위치14의 중요성을 표시. 최근, 수술과 유 방 지방 패드에 유방암 세포의 orthotopic 주입 보고15,16이었다. 유 방 패드 환경, 종양의 성장 및 병 적 관련 사이트에서 유방암의 먼 장기 커버 전체 과정으로 마이그레이션는 인간 질병의 진행의 미니어처 모델이 게 합니다. 그러나, 수술 후, 피부는 자동으로 자체는 정상적인 유 방 암 개시 방해의 잠재적인 위험을가지고 있으며 결과 편견을 치료 하려고 시도 합니다.
우리 일부 유 방 암 모델을 비교 하 고 유 방 암 진행17,18에 약물의 잠재적인 효과 조사 하는 최소 침 습 orthotopic 모델 설립. 이 연구에서 orthotopically 하는 방법에 비디오 프로토콜, 간단한 유 방 지방 패드 유방암 세포 주입, 더 적은 침략 적인 방법 제시. 수술 없이이 orthotopic 주입 방법 많은 방법으로 유리 하다. 먼저, 작업은 간단 하 고 빠른, 마우스 당 약 1 분. 둘째, 기본 종양 foci 바로 병 적인 사이트에서와 전체 tumorigenic 과정을 공부 하기 위한 좋은 실험 동물 모델을 제공 하는 다른 장기 전이 종양의 성장에서 유 방 암 진행의 커버는 종양 세포와 종양 microenvironment의 상호 작용입니다. 게다가, 그것은 유방암의 모든 단계에서 치료 효과 예측 하는 중요 한 모델을 수 있습니다. 이 방법의 목표는 maximumly 모방 인간의 유방암 암 진행 하는 동물 모델을 제공 하는입니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
이 연구에 사용 된 셀은 4T1-luc2, murine 트리플 부정적인 유방암 세포 luciferase 라벨와 그들의 매우 침략 적 자연2,19 때문 마약의 antitumor 및 antimetastatic 효과 투자를 위한 유용한 도구입니다. . Luciferases, 차세대 셀에 안정적인 생활 종양을 나타내는 데 사용 됩니다 세포, 유 방 동맥에서 및 다른 먼 장기20. 경우에 따라 저 산소 증 및 발광 신?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
저자는 국립 자연 과학 재단의 중국 (보조금 번호 81873111, 81673924, 81774039, 81503517), 감사 하 고 싶습니다 베이징 자연 과학 재단 (보조금 번호 7172095, 7162084, 7162083), 및의 베이징 병원의 쑤 쌰 재단 전통 중국의 술 (아니, 부여 xx201701). 우리 실험 연구 센터, 중국 과학원 중국 의료, 발광 이미지에서 교수 장 젠 리 우 감사합니다.
Materials
| anesthesia machine | Midmark Corporation, Dayton, OH, USA | Matrx VMS | anesthesia |
| In-Vivo Imaging System | PerkinElmer | IVIS Spectrum | used for bioluminescence detecion |
| isoflurane | Hebei yipin chemical reagents company | O21400 | anesthesia |
| 1 ml syringe | Becton,Dickinson and Company | A257 | cell injection |
| digital caliper | Shang Hai Shen Han Measuring Tools Co., Ltd. | S-H | volume measurement |
| tramadol | Mundipharma company | – | pain killer |
| D-luciferin | Gold Biotechnology Inc. | LUCK-1G | used for bioluminescence detecion |
| The primary antibody against cluster of differentiation (CD) 31 | Abcam | ab28364 | used for MVD detection |
| hematoxylin and eosin staining kit | Beijing Zhong Shan Jinqiao Biotechnology Co., Ltd. | ZLI-9615 | histology |
| hair removal cream | Veet | – | hair removal cream |
| Carbomer Eye Gel | Dr.GerhardMannChem-Pharm.FabrikGmbH | – | ophthalmic ointment |
| sewing needle | Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd. | 17U0302J | suture |
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