Subaguda Microhemorrhages Cerebral induzida pela injeção de lipopolissacarídeo em ratos
Summary
Apresentamos um protocolo para induzir e detectar CMHs causadas pela injeção de LPS em ratos Sprague-Dawley, que pode ser utilizaram no futuro pesquisa investigações na patogênese do CMHs.
Abstract
Microhemorrhages cerebrais (CMHs) são comuns em pacientes idosos e estão correlacionados com vários distúrbios neuropsiquiátricos. A etiologia da CMHs é complexa e neuroinflammation frequentemente é observada como uma co-ocorrência. Aqui, descrevemos um sub-aguda CMHs modelo de rato induzido pela injeção de lipopolissacarídeo (LPS), bem como um método para a detecção de injeção CMHs. LPS sistêmica é relativamente simples, econômica e rentável. Uma grande vantagem da injeção de LPS é sua estabilidade para induzir a inflamação. CMHs causadas pela injeção de LPS podem ser detectadas pela observação bruta, hematoxilina e coloração eosina (HE), do Perl coloração prussiano, double-rotulagem de azul de Evans (EB) e tecnologia de (MRI-SWI) imagem de ressonância magnética-susceptibilidade ponderada. Finalmente, outros métodos de desenvolver modelos animais CMHs, incluindo suas vantagens ou desvantagens, também são discutidos neste relatório.
Introduction
Microhemorrhages cerebrais clássicas (CMHs) consulte perivascular pequenos depósitos de produtos de degradação do sangue tais como hemossiderina de células vermelhas do sangue no cérebro1. De acordo com o estudo de varredura de Rotterdam, CMHs podem ser encontrados em cerca de 17,8% das pessoas com idade entre 60-69 anos e 38,3% daqueles com 80 anos2. A prevalência do CMHs no idoso é relativamente alta, e uma correlação entre a acumulação de CMHs e disfunção cognitiva e neuropsiquiátricas tem sido estabelecida3,4. Vários modelos animais de CMHs recentemente têm sido relatados, incluindo modelos de roedores induzidos pelo tipo IV colagenase injeção estereotáxica5, APP transgênicos6, β-N-metilamino-L-alanina exposição7e hipertensão8, com CMHs induzidas por inflamação sistêmica como uma das escolhas mais bem aceitas. Fisher et al . 9 primeiro usado LPS derivados de Salmonella typhimurium para desenvolver um modelo de mouse CMHs agudo. Posteriormente, o mesmo grupo relatou o desenvolvimento de um modelo de mouse CMHs sub-aguda usando a mesma abordagem2.
LPS é considerado como uma injeção de estímulo inflamatório padronizado via intraperitoneal. Estudos anteriores confirmaram que injeção de LPS poderia causar neuroinflammation como refletido por grandes quantidades de micróglia e ativação de astrocyte no animal modelos2,10. Além disso, uma correlação positiva entre a ativação de neuroinflammation ativação e o número de CMHs tem sido estabelecida2,10. Baseado nestes estudos anteriores, recebemos para desenvolver um modelo do rato CMHs por injeção intraperitoneal de LPS.
Os avanços na deteção tecnologias resultaram em um aumento no número de investigações de pesquisa sobre CMHs. A mais amplamente reconhecida de métodos de detecção de CMHs incluem a detecção de células vermelhas do sangue pela hematoxilina e eosina (HE), coloração, deteção de ferro férrico por9, a coloração azul da Prússia deteção de Evans blue deposição (EB) por imunofluorescência imagem e ressonância magnética-susceptibilidade ponderada 7,0 Tesla da imagem latente (MRI-SWI)10. O presente estudo tem como objetivo desenvolver um método de triagem para CMHs.
Protocol
Representative Results
Discussion
Estudos sobre CMHs têm aumentado nos últimos anos. No entanto, o mecanismo de CMHs permanece obscuro, levando cientistas para a criação de modelos animais que simulam esta condição particular. Por exemplo, Hoffmann et al . desenvolveu um modelo de rato CMHs induzida por hipóxia que mostra que CMHs são causadas pela hipoxia e o rompimento de autoregulação cerebrovascular12. Reuter et al . 5 estabeleceu um modelo CMHs em ratos transgénicos-APP23, …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Agradecemos a professora Jian Feng Lei e colegas da Universidade de medicina de Capital para orientação durante o MRI. Agradecemos também Jing Zeng do departamento de Neurologia, Hospital de Yichang do povo segundo para apoio técnico.
Materials
| LPS | Sigma-Aldrich | L-2630 | for inflammation induction |
| EB | Sigma-aldrich | E2129 | for EB leakage detection |
| DAPI dying solution | Servicbio | G1012 | count medium for IF |
| Perl’s Prussian staining | Solarbio | G1424 | Kit for Prussian staining |
| HE staining | Solarbio | G1120 | Kit for HE staining |
| chloral hydrate | Sigma-Aldrich | 47335U | For anesthesia |
| phosphate buffer saline (PBS) | Solarbio | P1022 | a kind of buffer solution commonly used in experiment |
| 0.9% saline solution | Hainan DonglianChangfu Pharmaceutical Co., Ltd., China | solution for perfusion | |
| paraformaldehyde | Sigma-Aldrich | 158127 | a kind of solution commonly used for fixation |
| 20% sucrose solution | Solarbio | G2461 | a kind of solution commonly used for fixation |
| 30% sucrose solution | Solarbio | G2460 | a kind of solution commonly used for fixation |
| vet ointment | Solcoseryl eye gel, Bacel, Switzerland | for rat's eyes protection |
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