Ein vielseitiges Modell schwer Tick Befall an Kaninchen, Labor
Summary
Wir haben eine einfache und vielseitige System um harten Zecken ernähren sich von Labor Kaninchen entwickelt. Unsere nicht mühsam Protokoll leicht zugängliche Materialien verwendet und kann je nach den Anforderungen der verschiedenen experimentellen Einstellungen angepasst werden. Die Methode ermöglicht die komfortable Überwachung bzw. Stichprobe von Zecken während der gesamten Dauer der Fütterung.
Abstract
Der Einsatz von lebenden Tieren in der Zecke Forschung ist entscheidend für eine Vielzahl von experimentellen Zwecken, einschließlich der Wartung der harten Tick Kolonien im Labor. In Zecken alle Entwicklungsstadien (außer Ei) sind Hematophagous und erwerben eine Blutmahlzeit, wenn ihre Wirbeltier Wirte zugeordnet ist unerlässlich für den erfolgreichen Abschluss ihres Lebenszyklus. Hier zeigen wir Ihnen eine einfache Methode, die leicht öffenbare Kapseln verwendet für die Fütterung von harten Zecken auf Kaninchen. Die Vorteile der vorgeschlagenen Methode sind seine Einfachheit, kurzer Dauer und vor allem vielseitige Anpassung an die Bedürfnisse der spezifischen experimentellen Anforderungen. Die Methode ermöglicht die Verwendung von mehreren Industrie-und Handelskammern (verschiedene Größen) auf das gleiche Tier, das Fütterung mehrerer Phasen oder verschiedenen Versuchsgruppen senken die insgesamt tierische Anforderung erlaubt. Nicht reizend und leicht zugänglichen Materialien minimiert Beschwerden an die Tiere, die leicht erholt von einem Experiment und angeboten für Annahme oder wiederverwendet werden können wenn das ethische Protokoll erlaubt.
Introduction
Die harten Zecken (Ixodidae) sind bekannt als langsame Fütterung Arthropoden und aufsetzbar auf einem Host für mehrere Tage oder Wochen, je nach Tierart und Entwicklungs-Stufe1. Diese obligatorische Hematophagous Arthropoden sind Vektoren einer Vielzahl pathogener Erreger, wie Bakterien, Protozoen und Viren, und so stellen eine erhebliche Gefahr für Mensch und Tier1. Wenn Tick Biologie studieren oder Bewertung neuer Methoden, die Einrichtung eines effektiven Häckchens Fütterungssystem ist entscheidend, um effektiv die Experimente zu entwerfen und erreichen die Ziel(e) der Studie. Vor kurzem mehrere künstliche Tick Fütterungssysteme (Vermeidung des Einsatzes von lebenden Tieren) wurden entwickelt,2,3,4 und sollten wann immer möglich verwendet werden. Jedoch diese Systeme konnten nicht vollständig Zecken ernähren sich von lebenden Tieren zu ersetzen, und sie sind kein geeigneter Ersatz für viele physiologische Voraussetzungen für wissenschaftliche Studien. Daher in einigen Fällen ist der Einsatz von experimentellen Tiere beherbergt entscheidend für die Relevanz der experimentellen Ergebnisse garantieren.
Labor-Neuseeland-Kaninchen haben gezeigt, die am besten geeignete und zugänglich Gastgeber für mehrere Ixodid Häckchen Arten5,6,7,8,9. Zwei gemeinsame Strategien der Zecken ernähren sich von Kaninchen wurden häufig verwendet: (a) ernähren sich von Hasenohren bedeckt mit Baumwolle Tuch oder Socken6,7, und (b) Fütterung in Baumwolle Taschen9, Nylon-Flaschen10 oder Neopren Kammern11 an das Kaninchen Rücken geklebt. Die Fütterung auf die Hasenohren ist kein elegantes System, weil Zecken (vor allem Frühphase, Larven oder Nymphen) können kriechen und befestigen Sie tief in den Gehörgang, das ist unangenehm für das Tier und macht die Überwachung der Zecke Fütterung und/oder die Erholung der gestaut Zecken schwierig. Dieses System ist auch beschränkt sich auf nur zwei Tick Fachgruppen auf Ohren von Socken geschützt durch elisabethanischen Halsbänder, vollständig abgedeckt, die eine erhebliche Unannehmlichkeit für das Tier. Andere Systeme9,10,11 sind auf jeden Fall weiter fortgeschritten und gut geeignet für harte Tick Kolonie Wartung. Jedoch sind sie in der Anzahl der experimentellen Gruppen platziert auf das Kaninchen sowie in die veränderbaren Größen/Formen der Fütterungen Kammern eingeschränkt. Darüber hinaus müssen diese Protokolle oft humpelnd die hinteren Kaninchen Beine zur Vermeidung von kratzen und die Verwendung des elisabethanischen Halsbänder Pflege zu verhindern.
Hierin bieten wir eine einfache, nicht mühsam und sehr effektive Methode um mehrere Gruppen von harten Zecken in geschlossenen Kammern geklebt, um das Kaninchen wieder fallenden eine Jacke zu ernähren, überflüssig elisabethanischen Halsbänder oder humpelnd während des Experiments. Unser System verwendet insbesondere elastische Kapseln aus ein Ethylen-Vinyl-Acetat (EVA)-Schaumfolie von Moskito Netz abgedeckt und an das rasierten Kaninchen wieder mit schnellen erstarren (3 min) nicht reizend Latex Kleber geklebt. Diese Technik ermöglicht die Befestigung von mehreren Kapseln der gewünschten Größe oder Form, und nur wenige Wochen nach dem Experiment die Kaninchen sind vollständig erholt. Das System eignet sich vor allem für die nymphal und Erwachsenen schwer Tick-Phasen, aber mit einer kleinen Änderung kann es für Larven sowie Fütterung verwendet werden. Die EVA Schaumstoff-basierte Methoden für harte Tick Fütterung können auf andere Arten von Wirbeltieren Gastgeber, zum Beispiel Schafe angepasst werden (die als eine der Alternativen in diesem Papier gezeigt wird).
Protocol
Representative Results
Discussion
Der wichtigste Schritt in diesem gesamten Protokoll soll die Kapsel fest auf die rasierte Haut kleben. Aus diesem Grund ist konstanter Druck für mindestens 3 Minuten kritisch, besonders an den Ecken. Wenn die Zecken in die Kapsel zu impfen, ist es wichtig, diese anzuwenden tief in die gegenüberliegende Ecke vom offenen zum Zecke während der Versiegelung zu vermeiden. Bei der Planung der Experimente ist darauf zu achten, dass die Jacke um Schäden zu vermeiden, Kauen oder kratzen die Kapseln abgedeckt sind. Stellen Sie…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Wir anerkennen die technische Unterstützung von Evelyne Le Naour, Französisch nationalen Institut für landwirtschaftliche Forschung (INRA), Alain Bernier (INRA) und Océane Le Bidel (ANSES). Consuelo Almazán wurde durch ein Stipendium aus dem Labor of Excellence, Integrative Biology of Emerging Infectious Diseases (LabEx IBEID), Pasteur-Institut unterstützt. Die Hasen und Schafe wurden von ANSES gekauft. Teil dieser Arbeit wurde von der National Institutes of Health Grant RO1AI090062, Y. Park finanziert. Dr. Jeffrey L. Blair ist anerkannt für die Überprüfung der Handschrift.
Materials
| New Zealand Rabbits (2.5-3.5 kg) | Charles River | Strain Code 571 | |
| Rambouillet sheep | Local provider-tick free farm | Female 6 months old | |
| EVA foam 5 mm thick | Cosplay Shop | EVA-PE451kg (950mm x 450mm) | 10 mm PE45kg foam from the Cosplay Shop may be used for the large adult tick species |
| Foam Sheet 9" X 12" 6 mm-White | Amazon | FOAMSHT6-20 | 6 mm-EVA foam ca be ordered via Amazon as an alternative to the foam from Cosplay Shop |
| Full length rabbit jackets | Harvard Apparatus, Inc. | 620077- medium, 6270078 – large | |
| Non-toxic latex glue | Tear mender | Fabric & Leather Adhesive | |
| Tubular cotton orthopedic stockinette | BSN Medical | 9076 (12-15 cm wide) | |
| Mosquito mesh | Loisirs Creatifs | Very fine filter nylon mesh fabric | Any mosquito mesh, or curtain material with the mesh size less than 50 microns is suitable. |
| Leukoplast | BSN medical S.A.S | LF 72361-02 | |
| Adhesive hook-and-loop tape | AIEX store | AIEX 39.37 Feet/12m Hook and Loop Self Adhesive Tape Roll, 20 mm width, white colour | Fullfiled by Amazon |
| Fast drying glue | Fixtout | Superglue |
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