Β-aminopropionitrile-유도 대동맥 동맥 및 해 부의 마우스 모델에서 Aortopathy의 양적 마이크로 CT 분석
Summary
이 문서는 대동맥 동맥 및 해 부의 마우스 모델에 대동맥 직경 정량화에 대 한 murine 맥 관 구조 perfuse를 방사선 불 투과성 리드 기반 실리콘 고무를 사용 하 여 상세한 방법론을 설명 합니다.
Abstract
대동맥 동맥 류 및 해 부 상당한 병 적 상태와 사망률은 인구에 연결 되어 있으며 매우 치명적일 수 있다. 대동맥 질환의 동물 모델 존재는 맥 관 구조의 이미징 vivo에서 제한 되었습니다. 최근 몇 년 동안, 미세 전산화 단층 촬영 (마이크로 CT) 모두 크고 작은 혈관 이미징에 대 한 기본 양식 적임 떠오르고 있다 vivo에서 및 전 비보. 함께 관 주조 방법, 주파수 및 C57/Bl6 마우스 β-aminopropionitrile 치료에 대동맥 병 리의 분포 특성 마이크로-CT를 사용 성공적으로 했습니다. 이 방법의 기술적 한계 가난한 동물 준비, 선박 크기 정량화에 대 한 적절 한 방법론의 응용 프로그램 및 비-이 절차의 생존에 의해 소개 하는 관류의 품질에 변화를 포함 합니다. 이 문서는 동맥 및 해 부의 마우스 모델에서 aortopathy의 양적 특성에 대 한 리드 기반의 방사선 불 투과성 실리콘 고무의 혈관 내 관류에 대 한 방법론을 자세히 설명합니다. 대동맥 병 리를 시각화, 뿐만 아니라 다른 혈관 침대에 vivo에서 또는 혈관 침대 제거 사후 조사이 메서드를 사용할 수 있습니다.
Introduction
대동맥 해 부의 발생률은1년 당 100000 당 3 경우. 대동맥 해 부 및 aneurysmal 계정 10000 죽음에 대 한 미국에서 매년, 서방 국가2에 있는 모든 죽음의 1-2%. 대동맥 해 부 생리 압력에서 대동맥 벽의 층을 통해 혈액의 전파와 그릇의 내 층에 눈물에 의해 시작 됩니다. 높은 환자 펄스 압력 해 부 및 합병증의 발생률이 증가와 연결 됩니다. 증가 벽 전단 응력 선도 동맥 형성3,4대동맥 벽 확장 연결 됩니다. 대동맥 해 부의 결과 두뇌, 신장, 대변, 및 사지, 만성 동맥 류, 파열, 또는 죽음5,,67의 형성을 포함 하 여 먼 장기에 혈액 흐름의 폐색을 포함 합니다.
현재, 개시 및 대동맥 동맥 류 및 해의 진행에 관련 된 생화학과 세포 프로세스 여전히 제대로 이해 하 고. 대동맥 동맥 류 및 해 부 재현 동물 모델은 그들의 병 태 생리학을 이해 하는 열쇠입니다. Β-aminopropionitrile (BAPN)은 lysyl 산화 효소 억제제, 엘라 스 틴과 콜라겐의 교차 연결을 방지 하 고 혈관 벽 세포 외 매트릭스와의 biomechanical 무결성6의 구조를 크게 변경 표시 되었습니다, 8. BAPN로 치료 하는 설치류 대동맥 동맥 및 해 부9,10의 일반적인 동물 모델 활용 되어 있다.
혈관 이미징 형식 혈관 병 리를 확인 하 고, 선박 patency 확인 평가 기관 관류에 있습니다. 최근, 마이크로 계산 된 단층 촬영 (마이크로 CT)은 쥐와 유사 하 게 치수가 재 진된 동물의 맥 관 구조를 공부 하 이용 되었습니다. Intraluminal 혈액은 본질적으로 비교적 radiolucent 뼈와 달리 단층에 의해 혈관의 축 이미징, 제한 됩니다. 그러나 혈관 내 조 영제와 결합 하면,, 마이크로-CT 수 있습니다 매크로 해부학 혈관 병 리11연구를 위한 동물 vasculatures의 상세한 3 차원 복원을.
선택한 대비 에이전트는 방사선 불 투과성 실리콘 고무 리드 크롬과 리드를 포함 하는 ( 테이블의 자료를 참조). 촉매의 면 전에 서 관류, 시 신속 하 게 견고 하 게 캐스팅 배경 조직 달리 높은 방사선 불 투과성는 맥 관 구조를 만드는 혈관의 매크로 해부학 아키텍처에 최소한의 변경으로 맥 관 구조를 형성 하는 경우 radiographically 검사. 이 대비 에이전트 처리를 쉽게 하 고 조직 저하와 자주 관련 혈관 캐스트 부식 된 파손으로 인해 선박 손실 방지 때문에 유리 하다. 그것은 최소한의 수축12치료, 혈관 혈액의 허가 특허 유지 하 고는 동물 매크로-맥 관 구조 비 생존 실험에의 한 정확한 평가 대 한 허용. 이전 작업은 성공적으로 동물 연구의 다양 한 방사선 불 투과성 실리콘 고무-대비를 사용 했다. 특히, 관상, 사, 태 반, 그리고 대뇌 순환11,12,13,,1415 머릿속에 적용 표시 되었습니다. 이 논문에서 우리 세부 양적 마이크로-코네티컷에 의해 마우스 모델에서 대동맥 병 리 BAPN 유도 하 리드 기반의 방사선 불 투과성 실리콘 고무의 혈관 내 관류에 대 한 오픈 왼쪽 심 실 펑크의 방법론
Protocol
Representative Results
Discussion
마이크로-CT 영상 동물 모델에서 혈관 병 리의 매우 상세 하 고 3 차원 개조를 제공 하기 위해 사용할 수 있습니다. 혈관 내 대비 향상 된 미디어의 사용을 통해 향상 된 비 부드러운 조직, 혈관, 루멘 등 그는 강화에서 분화 수 있다. 레이저 도플러, microangiography, 자기 공명 혈관, confocal, 또는 두 광자 현미경으로 조직학 혈관 침대를 평가 하기 위해 사용 될 수 있습니다, 그리고 그들은 일반적으로 연?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
우리는 방사선 영상으로 그의 지원에 대 한 마크 스미스에 게 감사 하 고 싶습니다. 이 작품은 NIH T32 그랜트 심혈 관 질환 (보아), 미국 심장 협회 (SMC), 및 NIH R35 그랜트 (DKS)에서 학 제 연구에 지원 됩니다.
Materials
| Microfil | Flow Tech, Inc | MV-122 | We use yellow, a different color can be ordered as desired. Kit includes MV-Compound, MV-Diluent, and MV-Curing Agent. |
| Heparin (1000 U/mL) | Sagent Pharmaceuticals | 25021-400-10 | |
| Phosphate buffered saline | Corning | 21-031-CV | |
| Isoflurane | Vet One, MWI | 502017 | |
| 3-Aminopropionitrile fumarate salt | Sigma-Aldrich | A3134 | |
| Single syringe pump | Fisher Scientific | 14-831-200 | |
| 27-gauge scalp vein set needle | Exel Int | 26709 | 27G x 3/4", 12" tube |
| Inveon Micro-CT scanner | Siemens Medical Solutions | ||
| Osirix MD | Pimxmeo SARL | Version 8.0.2 | |
| Inveon Research Workplace | Siemens Medical Solutions | Version 4.2 | |
| Rodent Chow | Harlan Teklad | 2018sx |
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