Метод здесь показан для подготовки язык внеклеточного матрикса (ТЕА) с эффективным decellularization. ТЕА может использоваться как функциональные подмости для реконструкции модели плоскоклеточный рак (ККТС) язык в условиях статического или перемешивают культуры.
Для того, чтобы построить эффективную и реалистичную модель для язык плоскоклеточный рак (ККТС) в пробирке, методы были созданы для производства decellularized язык внеклеточного матрикса (ТЕА) которая обеспечивает функциональные леса для строительства ККТС. ТЕА обеспечивает в vitro нишу для роста клеток, дифференциация и миграции клеток. Микроструктур родной внеклеточного матрикса (ECM) и биохимические композиций, сохранить в матрице decellularized обеспечивают ткани конкретных ниш для закрепления клетки. Изготовление ТЕА может быть реализована путем пищеварение дезоксирибонуклеаза (DNase), сопровождается серьезным органических или неорганических предварительной обработки. Этот протокол проста в эксплуатации и обеспечивает высокую эффективность для decellularization. ТЕА показал благоприятные cytocompatibility для ККТС клеток в условиях статического или перемешивают культуры, который позволяет построение модели ККТС. Самодельные биореактор использовался также для стойких перемешивают условия для клеточной культуры. Реконструированный ККТС, используя ТЕА показал характеристики и свойства, напоминающие клинических ККТС гистопатология, предлагая потенциал в области исследований ККТС.
Язык имеет различные важные функции, такие как глотания, артикуляции и дегустации. Таким образом нарушение функции язык имеет большое влияние на качество жизни пациентов1. Наиболее распространенным злокачественности в ротовой полости является язык плоскоклеточный рак (ККТС), который обычно возникает у людей, которые пьют алкоголь или дыма табака2.
В последние годы был достигнут незначительный прогресс в фундаментальных исследованиях по ККТС. Отсутствие эффективных в vitro исследования моделей остается одним из самых больших проблем. Таким образом внеклеточная матрица (ECM) оказывается возможного решения. Так как ECM является сложной сети кадр состоит из компонентов высокоорганизованных матрицы, эшафот материалы, имеющие ECM-как структура и состав бы компетентным для исследований рака. Decellularized ECM может прекрасно обеспечить нишу для ячеек из той же происхождения в пробирке, который оказывается наиболее существенным преимуществом ECM.
ECM может быть сохранена с клеточных компонентов, удаляется из тканей через decellularization, с использованием моющих и ферментов. Различные компоненты ECM, включая коллаген, фибронектин и Ламинин decellularized матрицы обеспечивают микроокружения родной ткань как для культивируемых клеток, содействия выживанию, пролиферации и дифференцировки клеток3. Кроме того иммуногенность для трансплантации снижается до минимального уровня с отсутствием клетчатых компонентов в ECM.
До настоящего времени были опробованы методы изготовления для decellularized ECM в различных тканях и органах, таких как сердце4,5,6,7, печени8,9,10 ,11, легких12,13,14,,1516,17и18,почек19 , 20. Однако, не соответствующие исследования показали на аналогичную работу на языке, в меру наших знаний.
В этом исследовании decellularized язык внеклеточного матрикса (ТЕА) был сфабрикованы ряда физических, химических и ферментативные лечение эффективно и недорого. Затем ТЕА был использован для пилки ККТС в пробирке, показаны соответствующие моделирования ККТС поведения и развития. ТЕА имеет хорошие биосовместимость, а также способность направлять клетки ткани конкретных нишу, которая указывает, что ТЕА может иметь большой потенциал в ККТС исследований3. Протокол, показанный здесь обеспечивает выбор для исследователей, изучение патогенеза или клинической терапии ККТС.
Устоявшихся протокол для decellularized ECM изготовления следует сохранить родной ECM состав при удалении клетчатых компонентов в тканях почти полностью21. Несмотря на в настоящее время сообщил decellularization протоколов, которые требуют перфузии через сосудистую удалить ячеистых матер?…
The authors have nothing to disclose.
Авторы признают поддержки научно-исследовательских грантов от национального фонда естественных наук Китая (31371390), программа проекта развития хай-тек (2014AA020702) и программа Гуандун науки и технологии (2016B030231001).
C57-BL/6J mice | Sun Yat-sen University Laboratory Animal Center | ||
Ethanol | Guangzhou Chemical Reagent Factory | HB15-GR-2.5L | |
Sodium chloride | Sangon Biotech | A501218 | |
Potassium chloride | Sangon Biotech | A100395 | |
Dibasic Sodium Phosphate | Guangzhou Chemical Reagent Factory | BE14-GR-500G | |
Potassium Phosphate Monobasic | Sangon Biotech | A501211 | |
1.5 mL EP tube | Axygen | MCT-150-A | |
Ultra-low temperature freezer | Thermo Fisher Scientific | ||
3.5 cm cell culture dish | Thermo Fisher Scientific | 153066 | |
6 cm cell culture dish | Greiner | 628160 | |
Triton X-100 | Sigma-Aldrich | V900502 | |
Calcium chloride | Sigma-Aldrich | 746495 | |
Magnesium chloride | Sigma-Aldrich | 449164 | |
DNase | Sigma-Aldrich | D5025 | |
Magnesium sulphate | Sangon Biotech | A601988 | |
Glucose | Sigma-Aldrich | 158968 | |
Sodium bicarbonate | Sigma-Aldrich | S5761 | |
Ampicillin | Sigma-Aldrich | A9393 | |
Kanamycin | Sigma-Aldrich | PHR1487 | |
Surgical suture | Shanghai Jinhuan | ||
250 mL wide-mouth bottle | SHUNIU | 1407 | |
Magnetic stirrer | AS ONE | 1-4602-32 | |
CO2 incubator | SHEL LAB | SCO5A | |
10 mL syringe | Hunan Pingan | ||
50 mL centrifuge tube | Greiner | 227270 | |
Cal27 cell | Chinese Academy of Science, Shanghai Cell Bank | Tongue squamous cell carcinoma cell line | |
U2OS cell | Chinese Academy of Science, Shanghai Cell Bank | Human osteosarcoma cell line | |
DMEM/F12 | Sigma-Aldrich | D0547 | |
Sodium pyruvate | Sigma-Aldrich | P5280 | |
Hepes free acid | BBI | A600264 | |
FBS | Hyclone | SH30084.03 | |
4 °C fridge | Haier | ||
Water purifier | ELGA | ||
Hemocytometer | BLAU | 717805 |