Een methode is hier weergegeven voor de voorbereiding van de tong extracellulaire matrix (TEM) met efficiënte decellularization. De TEM kan worden gebruikt als functionele steigers voor de wederopbouw van een tong plaveiselcelcarcinoom (TSCC) model onder statische of stirred cultuuromstandigheden.
De methoden zijn om te bouwen van een model voor effectieve en realistische voor tong squamous cell carcinoma (TSCC) in vitro, gemaakt naar producten decellularized tong extracellulaire matrix (TEM) waarmee functionele steigers voor TSCC bouw. TEM voorziet een niche in vitro celgroei, differentiatie en cel migratie. De microstructuren inheemse extracellulaire matrix (ECM) en biochemische composities bewaard in de decellularized matrix wordt voorzien dat weefsel-specifieke niches verankering van cellen. De fabricage van TEM kan worden gerealiseerd door deoxyribonuclease (DNase) spijsvertering gepaard met een ernstige van organische of anorganische voorbehandeling. Dit protocol is eenvoudig te bedienen en zorgt voor een hoog rendement voor de decellularization. De TEM toonde gunstige cytocompatibility voor TSCC cellen onder statische of stirred kweekomstandigheden, waardoor de bouw van de TSCC model. Een zelf-gemaakte bioreactor werd ook gebruikt voor de aanhoudende stirred voorwaarde voor celkweek. Gereconstrueerde TSCC met behulp van TEM toonde de kenmerken en eigenschappen die lijken op klinisch TSCC Histopathologie, het potentieel in TSCC onderzoek suggereert.
De tong heeft verschillende belangrijke functies, zoals deglutition, articulatie en proeverij. Dus, de verslechtering van de tong functie heeft grote impact op patiënten levenskwaliteit1. De meest voorkomende maligniteit in de mondholte is tong plaveiselcelcarcinoom (TSCC), die meestal voorkomt bij mensen die drinken van alcohol of roken van tabak2.
In de afgelopen jaren, is weinig vooruitgang geboekt in fundamenteel onderzoek op TSCC. Het gebrek aan efficiënte in vitro onderzoek modellen blijft als een van de grootste problemen. Dus, de extracellulaire matrix (ECM) blijkt te zijn van een mogelijke oplossing. Aangezien ECM een complex netwerk frame samengesteld uit onderdelen van de hoogst georganiseerde matrix is, zou Steiger materiaal met een ECM-achtige structuur en samenstelling bevoegd voor kankeronderzoek zijn. Decellularized ECM kan perfect de niche bieden voor de cellen van dezelfde oorsprong in vitro, die blijkt te zijn van het belangrijkste voordeel van ECM.
ECM kan worden bewaard met cellulaire componenten wordt verwijderd uit de weefsels door middel van de decellularization met behulp van detergentia en enzymen. Verschillende ECM componenten, met inbegrip van collageen, fibronectine en laminin in de decellularized matrix bieden een native-weefsel-achtige communicatie voor gekweekte cellen, bevordering van de overleving, proliferatie en differentiatie van de cellen3. Bovendien kan de immunogeniciteit voor transplantatie worden gereduceerd tot een minimaal niveau aan de afwezigheid van cellulaire componenten in ECM.
Tot nu toe hebben fabricage methoden voor decellularized ECM geprobeerd in verschillende weefsels en organen, zoals hart4,5,6,7, lever8,9,10 ,11, Long12,13,14,15,16,17, en nier18,19 , 20. echter geen relevant onderzoek is te vinden op soortgelijke werkzaamheden in de tong om het beste van onze kennis.
In deze studie werd decellularized tong extracellulaire matrix (TEM) zowel efficiënt en goedkoop vervaardigd door een reeks van fysieke, chemische en enzymatische behandeling. Vervolgens werd de TEM gebruikt om te recapituleren TSCC in vitro, tonen een passende simulatie voor TSCC gedrag en ontwikkeling. TEM heeft goede biocompatibiliteit, evenals de mogelijkheid om te begeleiden van de cellen naar de weefsel-specifieke niche, waarmee wordt aangegeven dat de TEM groot potentieel in TSCC onderzoek3 wellicht. Het hier getoonde protocol biedt u de keuze voor onderzoekers bestuderen op pathogenese of klinische therapieën voor TSCC.
Een goed gangbaar protocol voor de fabricage van decellularized ECM moet behouden de oorspronkelijke samenstelling van de ECM tijdens het verwijderen van cellulaire componenten in weefsels bijna volledig21. Ondanks momenteel gerapporteerde decellularization protocollen waarvoor perfusie door middel van de therapieën materialen te verwijderen cellulaire door convectie vervoer, mechanische agitatie goedgekeurd hier, bekend als een traditionele, eenvoudige en goedkope methode22</su…
The authors have nothing to disclose.
De auteurs erkennen de steun van onderzoekssubsidies van nationale Natural Science Foundation van China (31371390), het programma van de staat High-Tech ontwikkelingsproject (2014AA020702) en het programma van Guangdong wetenschap en technologie (2016B030231001).
C57-BL/6J mice | Sun Yat-sen University Laboratory Animal Center | ||
Ethanol | Guangzhou Chemical Reagent Factory | HB15-GR-2.5L | |
Sodium chloride | Sangon Biotech | A501218 | |
Potassium chloride | Sangon Biotech | A100395 | |
Dibasic Sodium Phosphate | Guangzhou Chemical Reagent Factory | BE14-GR-500G | |
Potassium Phosphate Monobasic | Sangon Biotech | A501211 | |
1.5 mL EP tube | Axygen | MCT-150-A | |
Ultra-low temperature freezer | Thermo Fisher Scientific | ||
3.5 cm cell culture dish | Thermo Fisher Scientific | 153066 | |
6 cm cell culture dish | Greiner | 628160 | |
Triton X-100 | Sigma-Aldrich | V900502 | |
Calcium chloride | Sigma-Aldrich | 746495 | |
Magnesium chloride | Sigma-Aldrich | 449164 | |
DNase | Sigma-Aldrich | D5025 | |
Magnesium sulphate | Sangon Biotech | A601988 | |
Glucose | Sigma-Aldrich | 158968 | |
Sodium bicarbonate | Sigma-Aldrich | S5761 | |
Ampicillin | Sigma-Aldrich | A9393 | |
Kanamycin | Sigma-Aldrich | PHR1487 | |
Surgical suture | Shanghai Jinhuan | ||
250 mL wide-mouth bottle | SHUNIU | 1407 | |
Magnetic stirrer | AS ONE | 1-4602-32 | |
CO2 incubator | SHEL LAB | SCO5A | |
10 mL syringe | Hunan Pingan | ||
50 mL centrifuge tube | Greiner | 227270 | |
Cal27 cell | Chinese Academy of Science, Shanghai Cell Bank | Tongue squamous cell carcinoma cell line | |
U2OS cell | Chinese Academy of Science, Shanghai Cell Bank | Human osteosarcoma cell line | |
DMEM/F12 | Sigma-Aldrich | D0547 | |
Sodium pyruvate | Sigma-Aldrich | P5280 | |
Hepes free acid | BBI | A600264 | |
FBS | Hyclone | SH30084.03 | |
4 °C fridge | Haier | ||
Water purifier | ELGA | ||
Hemocytometer | BLAU | 717805 |