Kan ve Serum lekeler kanser biyolojik değerlendirmek örnek depolama için yararlı bir araç olarak kurutulmuş
Summary
Bu iletişim kuralı periferik kan ve serum/plazma tek nükleotit polimorfizmi (SNP) değerlendirme ve ELISA tahlil gibi aşağı akım analizleri için saklamak için basit ve kullanışlı bir yöntem açıklanır.
Abstract
Kan örnek kalite gerçek zamanlı PCR veya ELISA gibi doğru aşağı akım analizleri sağlamak çok önemlidir. Biyolojik malzeme doğru depolama tekrarlanabilir ve güvenilir sonuçlar elde etmek için başlangıç noktasıdır. Tüm örneklerini aynı şekilde depolama birimine kan koleksiyonundan değerlendirilmelidir. Analizler yapılması için bağlı olarak, tam kan ve serum numuneleri-20 ° C veya-80 ° C kadar kullanmak saklanmalıdır. Kan/serum numuneleri de birden çok donma-çözülme önlemek için bölünmemeli olmalıdır. Bir başka önemli konu bir laboratuvar Sevikiyatta başka bir örnek koşullar bulunuyor. Kuru buz kullanılamaz veya sevk irsaliyesi birkaç günden daha uzun sürer, alternatif yaklaşımlar ihtiyaç vardır. Filtre kağıdı kan toplanması için kullanılmasını bir seçenektir. Burada, bir yöntem kan için önerdiğimiz ve yararlanır serum örnek toplama kan lekeleri (DBS) kurutulmuş ve serum noktalar (DSS) kurutulmuş. Biz DNA DBS bazı tek nükleotid polimorfizmleri (SNPs) aşağı akım değerlendirme için gerçek zamanlı PCR ayıklamak için prosedür geliştirilmiştir. Biz de DSS eluted proteinler başlayarak bir ELISA tahlil optimize. Bu yöntem diğer ELISA testleri veya yordamlar proteinler değerlendirilmesi ile kullanılabilir.
Introduction
Araştırmanın temel amacı kanser biyolojik içine tanı, predicting hasta prognoz ve bir hasta belirli bir tedaviye yanıt olup olmadığını belirlemek için kullanılabilir yeni biyolojik parametreler tanımlamasıdır. Bu araştırma alanı yenilikçi kanser tedavileri keşfi için temel ve özel tedavisinde önemli bir rol oynar.
Her adımında biyomarker tanımlama ve doğrulama sırasında yürütülen yordamlar güvenilir ve tekrarlanabilir olmalıdır. Kan ve serum gibi biyolojik örneklerin doğru depolama translasyonel araştırma başarısı için bir taşıdır. Moleküler biyoloji deneyleri veya protein testleri gerçekleştirmek için kullanılan yüksek kaliteli biyolojik malzeme elde etme yolunda ilk adım bu.
Kadınlarında çalışmalar kez sağlam veri elde etmek için yeterli hasta işe almak için ihtiyaç vardır. Tüm kurumları örnekleri-80 ° C’de veya kuru buz içinde uluslararası diğer merkezlere örnekler göndermek için edebiliyoruz. Filtre kağıdı kullanımı kan koleksiyonu için kan ve serum depolamak için basit bir yöntemdir ve örnekleri1,2hemen dondurulması gerektirmez. Bir damla kan veya serum kuru gecede yaptı ve sonra 14 gün oda sıcaklığında1,2için depolanan kağıt üzerine lekeli olabilir. Bu araştırmacılar örnekleri diğer laboratuvarlar için göndermek için zaman verir. Kurumuş kan kullanımı (DBS) noktalar ve kurutulmuş serum noktalar (DSS) böylece gelişmiş ve gelişmekte olan ülkelerde kurumları arasındaki işbirliğini kolaylaştırmak.
Kullanım kolaylığı göz önüne alındığında, DBS örnekleme yaygın serolojik veya genetik aşağı akım analizleri için çeşitli deneyleri içinde kullanılır. Örneğin, geçmişte, DBS sık gelişmekte olan ülkelerde1,2,3,4,5‘ te eleme HIV için kullanılmıştır. Bu depolama yöntemi bir diğer avantajı kan örnekleri parmak-pislikler, böylece tarama testleri 6,7,8yenidoğan için kullanımı etkinleştirilmesi toplanan olduğunu. Kolay örnek kullanım ve taşıma vardır daha fazla DBS, avantajları özellikle uzak sitelerdeki toplanan örnekleri için olduğu yerde yok Labaratuar donanımları. Bir önceki yayın biz DBS ve DSS D vitamini ve D vitamini bağlayıcı protein (DBP) beyaz ve Afrika hastaların9bir dizi sınamak için kullanılır. Afrikalı meslektaşlarımıza Kuru buz elde etmek mümkün değildi. D vitamini yolu iki etnik nüfus arasındaki farklılıkları anlamak için biyolojik veri işaretleyicilerini karşılaştırmak için daha fazla eşleşen örnekler standart koşullar altında ve filtre kağıdı depolanmış yordam geliştirilmiş. DBS/DSS yordamı optimize sonra biz DBP ve her iki tabur hasta serumda D vitamini çözümlemek başardık. Biz de DNA ekstraksiyon işgal için tam kan ve DBS Afrikalılar9dan sonra bir dizi tek nükleotid polimorfizmleri (SNPs) değerlendirildi. Mevcut Protokolü kaliteli kan örnekleri karşıdan akış analizleri moleküler biyoloji ELISA deneyleri için arasında değişen farklı türde etkilemeden oda sıcaklığında saklanmasına izin verir. Bu Biyolojik materyallerde kadınlarında çalışmalarda yönetmek kullanmak veya standart depolama koşulları için imkanlar var mı merkezleri için tavsiye edilir. Aşağıdaki iletişim kuralı en iyi duruma getirilmiş bu yordamları doruk temsil eder.
Protocol
Representative Results
Discussion
Bu iletişim kuralı laboratuarlar personel ya da kan örnekleri doğru kullanımı için gerekli altyapı var mı ne zaman kan ve serum filtre kağıt üzerinde depolamak için potansiyel inceler. Özellikle, tam kan veya serum standart tüpler veya parmak-hıyar tarafından toplanan bu yöntem kullanılarak depolanabilir ve hemen sonra kan toplama örnekleri-20 ° C veya-80 ° C dondurmak için gerek yoktur. DBS/DSS oda sıcaklığında kan/serum bütünlük içinde herhangi bir değişiklik olmaksızın 14 güne kadar…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Gráinne Tierney Editör Yardım için teşekkür etmek istiyorum.
Materials
| Whatman protein saver cards 903 Protein saver card, 100/pk | Sigma | Z761575 | Useful to store samples at room temperature for downstream analyses |
| Falcon Serological Pipettes, 5 mL | Stem cell | #38003 | |
| 50-200 µL tips | Star-Lab | S1120-8810 | |
| 1.5 mL centrifuge tube | Eppendorf | 4036-3204 | |
| QIAamp DNA microkit | Qiagen | 56304 | This is a DNA extraction kit designed to isolate small quantities of DNA |
| Buffer ATL (included in QIAamp DNA microkit) | Qiagen | This is reported as Lysis Buffer 1 in the text | |
| Buffer AL (included in QIAamp DNA microkit) | Qiagen | This is reported as Lysis Buffer 2 in the text | |
| QIAamp mini elute column | Qiagen | This is reported as column in the text | |
| AW1 (included in QIAamp DNA microkit) | Qiagen | This is reported as Wash Buffer 1 IN THE TEXT | |
| AW2 (included in QIAamp DNA microkit) | Qiagen | This is reported as Wash Buffer 2 in the text | |
| Human Vitamin D BP Quantikine ELISA Kit | R&D systems | DVDBP0 |
References
- Bertagnolio, S., et al. HIV-1 drug resistance surveillance using dried whole blood spots. Antivir Ther. 12 (1), 107-113 (2007).
- Mei, J. V., Alexander, J. R., Adam, B. W., Hannon, W. H. Use of filter paper for the collection and analysis of human whole blood specimens. J Nutr. 131 (5), 1631S-1636S (2001).
- Garrido, C., et al. Subtype variability, virological response and drug resistance assessed on dried blood spots collected from HIV patients on antiretroviral therapy in Angola. J Antimicrob Chemoth. 61 (3), 694-698 (2008).
- Steegen, K., et al. Feasibility of detecting human immunodeficiency virus type 1 drug resistance in DNA extracted from whole blood or dried blood spots. J Clin Microbiol. 45 (10), 3342-3351 (2007).
- Costenaro, P., et al. Viral load detection using dried blood spots in a cohort of HIV-1-infected children in Uganda: correlations with clinical and immunological criteria for treatment failure. J Clin Microbiol. 52 (7), 2665-2667 (2014).
- Gong, Z. H., Tian, G. L., Huang, Q. W., Wang, Y. M., Xu, H. P. Reduced glutathione and glutathione disulfide in the blood of glucose-6-phosphate dehydrogenase-deficient newborns. BMC Pediatr. 20 (17), 172 (2017).
- Lukacs, Z., Barr, M., Hamilton, J. Best practice in the measurement and interpretation of lysosomal acid lipase in dried blood spots using the inhibitor Lalistat 2. Clin Chim Acta. 471, 201-205 (2017).
- Skogstrand, P. T., Bent, N. P., Schendel, D. E., Sørensen, L. C., Hougaard, D. M. Simultaneous measurement of 25 inflammatory markers and neurotrophins in neonatal dried blood spots by immunoassay with xMAP technology. Clin Chem. 51 (10), 1854-1866 (2005).
- Amadori, D., et al. Vitamin D receptor polymorphisms or serum levels as key drivers of breast cancer development? The question of the vitamin D pathway. Oncotarget. 8 (8), 13142-13156 (2017).
- Gupta, B. P., Jayasuryan, N., Jameel, S. Direct detection of hepatitis B virus from dried blood spots by polymerase chain reaction amplification. J Clin Microbiol. 30 (8), 1913-1916 (1992).
- Colson, K. E., Potter, A., Conde-Glez, C., Hernandez, B., RíosZertuche, D., Zúñiga-Brenes, P. Use of a commercial ELISA for the detection of measles-specific immunoglobulin G (IgG) in dried blood spots collected from children living in low-resource settings. J Med Virol. 87 (9), 1491-1499 (2015).
- Drabe, C. H., Blauenfeldt, T., Ruhwald, M. ELISA-based assay for IP-10 detection from filter paper samples. Methods Mol Biol. 1172, 27-37 (2014).
- St Julien, K. R., et al. High quality genome-wide genotyping from archived dried blood spots without DNA amplification. PLoS One. 8 (5), e64710 (2013).
- Shaner, R. L., Schulze, N. D., Seymour, C., Hamelin, E. I., Thomas, J. D., Johnson, R. C. Quantitation of fentanyl analogs in dried blood spots by flow-through desorption coupled to online solid phase extraction tandem mass spectrometry. Anal Methods. 9, 3876-3883 (2017).
