3Rs prensibi içinde görüş-in seçimli-e doğru hayvan çalışmaları olarak solunum modelleri gelişmektedir. Özellikle solunum maddelerin risk değerlendirmesi için uygun deneyleri eksikliği vardır. Burada, biz insan hassas kesim akciğer dilimleri hava maddelerin değerlendirilmesi için nasıl kullanılacağını açıklar.
Onların geniş çeşitlilik solunum hastalıkları uygun model sistemleri temel mekanizmaları anlamak ve yeni tedavi gelişimi etkinleştirmek gerekir. Ayrıca, kayıt, yeni maddelerin uygun risk değerlendirmesi bireylerin, örneğin, çalışma ortamında zarar riskini önlemek için yeterli test sistemleri ile gerektirir. Bu tür risk değerlendirmeleri genellikle hayvan çalışmaları yapılmaktadır. 3Rs prensip ve hayvan deneyleri karşı kamu şüphecilik içinde görüş-in gibi hassas kesim akciğer dilimleri (PCLS), insan alternatif yöntemler gelişen. Mevcut kağıt amonyum hexachloroplatinate (HClPt) gibi düşük moleküler ağırlıklı maddeler immunomodulatory potansiyelini çalışmaya insan PCLS ex vivo teknik anlatılmaktadır. Ölçülen bitiş noktaları canlılığı ve yerel solunum inflamasyon, sitokinler ve kemokinler değişmiş salgılanmasını tarafından işaretlenmiş bulunmaktadır. Pro-inflamatuar sitokinlerin, tümör nekroz faktör alfa (TNF-α) ve İnterlökin 1 alfa (IL-1α) anlamlı bir artış içinde insan PCLS HClPt alt toksik konsantrasyon maruz kaldıktan sonra. PCLS tekniği önemli ölçüde son on yıl içinde optimize edilmiş olsa bile, immunomodulation test için onun uygulanabilirliği hala gelişme olduğunu. İnsan PCLS potansiyel değerli bir araç solunum araştırmada gösteriyorlar olsa bile bu nedenle, burada sunulan ön, sonuçlarıdır.
Alerjik astım, mesleki astım, kronik obstrüktif akciğer hastalığı (KOAH), Amfizem ve üst ve alt solunum yolları enfeksiyonları gibi solunum yolu hastalıkları artmaktadır ve dünya çapında sağlık yük1,2temsil eder. Uygun test sistemleri, bazı uygun maddelerden test ve geliştirme ek olarak bu hastalıkların altında yatan temel mekanizmaları belirlemek için gereklidir. Temel araştırma yanı sıra preklinik ilaç geliştirme vitro veya vivo içinde deneyleri elde sonuçları üzerinde duruldu. Bu deneyleri, ancak, kendi sınırlamaları3var. İlk olarak, vitro deneyleri izole ve bitişik doku veya organ kaldırılması insan hücreleri kullanmak ve böylece artık ile etkileşim veya diğer hücreleri3tarafından korunuyor edebiliyoruz. İkinci olarak, hayvan modelleri insan fizyolojisi ve biyokimyasal farklılıkları gidermek4farklılıklar nedeniyle çevrilebilir değildir. Bu sınırlamalar, en aza indirmek için ve 3Rs bağlamında (değiştirme, arıtma, azaltma) ilke5, yeni alternatif modeller sürekli gelişen.
Alternatif insan 3D doku modelleri, PCLS gibi insan tabanlı vitro ve karmaşık hayvan vivo içinde modelleri arasında bir bağlantı vardır. PCLS solunum yolu6‘ mevcut tüm ilgili hücre tipleri ile fonksiyonel heterojenite yansıtır. Ayrıca, PCLS teknik birkaç ince dilimler kesin kalınlıkta bir tek hayvan veya insan doku donörden tekrarlanabilir hazırlanması bir avantaja sahiptir. Bu bir iç kontrol yanı sıra farklı konsantrasyonlarda izin verir veya test edilecek uyuşturucu.
İnsan akciğer agar dolu dilimleri Fisher ve ark. tarafından 1994 yılında ilk giriş beri 7 dilimleme ve akciğer dokusunun kültür için teknik önemli ölçüde geliştirilmiştir. Christian Martin vd. Bu teknik daha fazla kimyasal ve farmakolojik uygulamaları8için iyileştirilmiştir. Grubumuz bu teknik için 2007 yılında Christian Martin tarafından kullanılmaya başlandı. O zamandan beri PCLS uygulama araştırma fonksiyonel tepkileri, gibi hava yolu9,10 ve vazokonstriksiyona11, immünolojik, farmakolojik12,13test dan genişletmiştir, ve toksikolojik7 çeşitli türlerin birkaç laboratuarlarında test. Örneğin, Schlepütz vd. 14 hava yolu yanıt türler farklılıklar için araştırdık ve periferik nöron harekete geçirmek elektrik alanı stimülasyon (EFS) veya kapsaisin farelerde, sıçanlar, karşılaştırıldığında eskiden şiling şimdi pigs, koyun, marmosets ve insanlar. Sinir-aracılı bronchoconstriction farklı ama farklı desenler için çeşitli türler bulundu ve yaygın olarak kullanılan Laboratuvar hayvanlarının (fare ve sıçanlar) her zaman insan yanıt yansıtmaz sonucuna vardı. Akciğer toksisite test etmek ve bu bağlamda, Hess vd. hayvanlarda sayısını azaltmak için 15 sıçan PCLS inhalasyon toksisite araştırmaları için ex vivo alternatif olarak önceden doğrulanmış. PCLS umut verici sonuçlar ile kullanarak iki tahmin modelleri geliştirilmesi çok merkezli bu ön doğrulama çalışma sonuçlandı.
Ayrıca, temel araştırma, PCLS16, erken Alerjik yanıt-e doğru17ve viral enfeksiyon yanıt-e doğru18,19sinyal kalsiyum aydınlatmak için kullanılmıştır. Teknik ilerleme devam ediyor ve daha da ileri incelenmiştir. Örneğin, alan insan dokusu yararına depolama ve yeniden donmuş doku tarafından artmaktadır. Rosner ve ark. açıklanan donma ve solunum yolları stimülasyon sözleşme yeteneğini korur fare PCLS çözme tekniği: Bu nedenle, sınırlı bir süre pencerenin içinde doku kalır uygun ve çok daha fazla teknik uzatır deneyleri zamanla aynı donör20‘ ye uygulanır. Ek olarak bu araştırma gelişmeler, Lauenstein vd. 21 son zamanlarda insan PCLS mesleki astım için potansiyel sensitizers olarak hareket çeşitli kimyasal risk değerlendirmesi araştırıldı.
Mesleki astım belirtileri olan hava akımı tıkanma ve hava yolu hyperresponsiveness, Alerjik astım için benzer, yüksek molekül ağırlıklı (HMW)22 veya düşük molekül ağırlıklı (LMW) maddeler23 maruz kalma tarafından indüklenen (Örneğin , Platin bileşikleri) işyeri ortamında. LMW ajanlar anhidridler oluşturan yüksek Sensitizasyonu potansiyel var ve taşıyıcı proteinler21‘ e bağlanın. Yeni HMW veya LMW kimyasalların kayıt gerektiren içinde in vitro ve in vivo risk değerlendirmesi ile ilgili potansiyel onların sözde Sensitizasyonu (örn., OECD kılavuz 429)24. Olsa orada görünüyordu bazı uyum için küçük bir alt kümesi maddeler25 potansiyel, sözde Sensitizasyonu belirlemek için kullanılan testler ancak, aslında solunum sensitizers, risk değerlendirmesi, ama iletişim sensitizers için tasarlanmamıştır . Lauenstein ve ark. eseri Sens-BT-IV, Avrupa Birliği projesi kapsamında risk değerlendirmesi sözde temas veya akciğer sensitizers21için alternatif test stratejileri geliştirmek için tasarlanmıştır. Bu proje için biz insan PCLS kullanılabilirlik alternatif bir test aracı olarak test üzerinde duruldu. Bu nedenle, immunomodulatory bitiş noktaları (örneğin, canlılık ve sitokin salgısının) bir dizi LMW Platin bileşikleri gibi kimyasal maddelerin tahriş edici veya inflamatuar potansiyelini belirlemek üzere seçildi. Lauenstein için tüm solunum sensitizers uygulanabilir genel yok desen bulundu vd. ; Ancak, işlerini Vakfı kısa bir süre önce protokolleri26için sağlanan.
Özetle, burada hazırlık ve insan PCLS sonraki maruz kalma için sunulan Protokolü potansiyel akciğer toksik değerlendirilmesi ve/veya solunum gelişiminde dahil immunomodulatory maddeler için yararlı bir yöntem sağlar Mesleki astım gibi hastalıkların.
İnsan PCLS bizim laboratuvarda iyi kurulmuş bir tekniktir. Mevcut kağıt bu tekniği ve akciğer doku ex vivomaddelerin toksisite testleri için kullanımı bir açıklamasını verir. Genel olarak, bu teknik bir tahlil ayarlamak için aramak gerekir kullanarak herhangi bir laboratuvar ölçülebilir aralıkları tanımını, tahmin variabilities ve kalite deneme geçerliliğini garanti denetimlerin ilgili. Mümkün Standart prosedürler olabilir, örneğin, her bir son nokta, örneğin, sitotoksisite tahlil üç biyolojik bağış (bireysel metinler) en az iki ya da üç teknik çoğaltır pozitif de dahil olmak üzere örnek başına en az yinelenecek ve negatif başvurular. Laboratuar personeli tahlil tutarlılığını artırmak ve tahlil değişkenlik en aza indirmek için eğitim.
Sık akciğer dokusu üzerinde maddeler immunomodulatory etkilerini değerlendirmek için kullanılan bitiş noktaları dahil sitotoksisite farklı deneyleri (örneğin, karaciğer tahlil, WST-1 tahlil, tahlil boyama mikroskobik) kullanarak ölçüleri, sitokin yayın deneyleri, de gibi değişiklikleri ifade profil ve immunohistopathological yöntemleri6hücresel nüfus değişiklikleri karakterizasyonu. Ayrıca, orada da insan PCLS için transfer edilebilir ve böylece daha önce hücresel kompozisyon gösteren daha ayrıntılı bilgilere sağlayabilir fare PCLS28 , pulmoner dendritik hücreleri gibi hücrelerin görselleştirme açıklayan teknikleri ve sözde sitotoksik maddelerle tedaviden sonra.
Bu temel Protokolü ve insan Akciğer doku bölümleri hazırlanması için teknik yayınlar29de tarif edilmiştir teknikleri karşılaştırılabilir. Kısacası, organ malzeme cerrahi rezeksiyon veya nakli geçmesi gibi akciğer kanseri, kronik hastalıkların canlı tehdit eden acı hastalar elde edilir. Çalışmalar yerel Etik Komitesi tarafından onaylanmış olması gerekir. Hastaların bilinçli yazılı izni gereklidir. Bir iş akışı arasında klinik ve laboratuar kurma kritik bir konudur ve iletişim ve arabirimleri ve her iki site arasında altyapı tanımını gerektirir. Doğrudan rezeksiyon canlılığı doku korumak için sonra işlenmek üzere insan akciğer malzeme vardır. İnsan PCLS için burada açıklanan tekniği hem genç ve yaşlı akciğerler ve sağlıklı ve hastalıklı akciğer uygulanabilir kayda değer olduğunu. Örneğin, ABD’de, kazalarda ölen veya kimin organ nakli için reddedilmiştir sağlıklı organ bağış akciğerler elde etmek mümkündür.
İlk kritik adım protokolündeki airways ve özel çözüm ile çevredeki parankimi enflasyon olduğunu. Bu adım sonraki Dilimleme yordam için çok yumuşak doku kuvvetlendirmek gereklidir. Hastalık özgeçmişlerine dayalı insan akciğer malzeme kalitesi ve burada önemlidir. Sadece loblar sağlam plevra ile doldurulabilir. Bronş yakınındaki son aşama tümörler bazen doldurma işlemi önlemek. İnsan malzeme şişirme önce özel çözüm sıcaklığını iyice kontrol edilmesi gerekiyor. Çok fazla kan (veya diğer sıvıları, exudates) insan içinde Akciğer doku özel istenmeyen seyreltme içinde neden olur ve polimerizasyon süreci etkileyecektir. Enflasyon akciğer dokusunun ve özel buz üzerinde gelling sonra akciğerler 200-300 µm kalınlık bölümlere kesilir. Tutarlılık dokusunun çok kritik bir konudur. Doku çok yumuşak ise, eşit bölüme Dilimleme zordur. Aynı microtome parametreleri her donör, bağışçılar arasında dilim kalınlığı değişebilir için ayarlanır, nedeniyle bireysel koşullar ve Şişirme sırasında değişiklikleri her akciğer için işlenmesi halinde bile. İnhomogeneous dolgu dokusunun farklı dilim kalınlıklarda neden olur. Ölçme ve dilim kalınlığı standartlaştırılması yerine toplam protein içeriği ölçümü dolaylı olarak akciğer dilim kalınlıkları izlemek için kullanılabilir. Dilimleme işlemi birkaç son aşama hastalıkları engel; örneğin, kan damarları son derece pulmoner hipertansiyon ve fibrotik doku kalınlaşmış-ebilmek var olmak çok sert doku silindir Dilimleme pek mümkün ve microtome bıçak çok sık değiştirilmesi gerekir.
İnsan PCLS ve adımları yıkama yoğun hazırlanması sonra hangi hücre artıkları kaldırmak için gerekli ve enzimler, doku bölümleri deneyler29için kullanılabilir serbest. İnsan PCLS normal hücre kültür koşullar altında kültürlü ve, örneğin, kimyasallar, uyuşturucu veya lipopolisakkaritler maruz. PCLS ara sıra kirlenme (bilinmeyen) enfeksiyonlar nedeniyle kültür insan akciğer malzemenin özel bir sorundur. Doku enfeksiyonları gösterilen kültürler atılmalıdır ve ekipman iyice dezenfekte gerekir. Bir yandan hazırlık için kullanılan Laboratuvar yerleri ve kültür arasında kayma ayrılık diğer taraftan çapraz-enfeksiyonları önlemek için yardımcı olabilir. İle ilgili ekipman, microtome kaçak ve gevşek onaltılık vida motor hasar ve bıçak hareketi durdurmak için neden olabilir. Dilimleyici her parçası paslanmaz çelikten imal edilmiştir ve çok o okside değil kurutulmuş Eğer hemen temizlik alter. Donanım sorunları aşmak için en az bir yedek aygıtı gerekli olabilir.
Önceki yayınlarda, özel yıkanması bildirdi ve yoğun adımları hazırlık sonra yıkama sırasında kaldırıldı. Aslında, bu mümkün değildir, özel kaldırılamaz. Özel tamamen kaldırılması için doku yok edeceğini yüksek sıcaklıklarda yeniden erimiş olması gerekir. Alveoller ve havayolları özel tarif bitiş noktaları ile karışmaz. Diğer bitiş noktaları özel varlığı ile etkilemiş (Ayrıca bkz: sınırlamalar). Doku canlılığı kültür kritik bir konu olduğu gibi vurguladı çok taze doku bölümleri hazırlamak için ihtiyaç vardır. Bronchoconstriction canlılık için geçerli bir parametre değil. Çevredeki parankimi canlılığı kontrol etmek için en az iki ya da üç bağımsız sitotoksisite deneyleri kullanmanızı öneririz; Bunun her deneme30‘ u kontrol edilmesi gerekiyor. Sitotoksisite deneyleri kalite denetimlerde yetersiz doku canlılığı göstergeleri olarak hizmet vermektedir. Bu nedenle, tüm sitotoksisite deneyleri bir deterjan gibi etkili bir toksik madde dokusunun, örneğin, yanıt verme becerisini değerlendirmek için önerilir. Doz-yanıt eğrileri üzerinde bağlı olarak, minimum ve maksimum değerleri emme sitotoksisite deneyleri için tanımlanmış olması gerekir ve sonraki deneyler için bir araya geldi. Protokol daha fazla değişiklikler çoğunlukla uygulamalı kimyasallar ve bitiş noktaları ilgi bağlıdır. Çözünmez ya da büyük ölçüde reaktif kimyasallar uygulanabilirliği sınırlıdır. DMSO için en yüksek çözücü konsantrasyonu % 1’e sınırlıdır. Daha yüksek konsantrasyonlarda kullanılabilir ancak belirgin serbest bırakmak-in Il-8 gibi pro-inflamatuar sitokinlerin neden olabilir. Öte yandan, kullanılan uyarıcı nispeten zayıf olabilir. Bu durumda, 2-iyi başına dört dilim doku miktarı artırılabilir. Bu yaklaşım 24 h canlılığı sınırlar.
Bir büyük insan PCLS Almanya’da onlar sadece hastalıklı insan akciğer malzemeden hazırlanabilir olduğunu kısıtlamasıdır. Hastalar ameliyat normalde 50 yaşından büyük ve akciğer kanseri muzdarip hastaların % 80’i ya da sigara içenler eskiden. Gibi sebepler, hastaların ilaç da insan dokusu kullanarak deneyler sonucu etkileyebilir. Bu nedenle, için esastır: doğrulamak i) her deney canlılığı, işlevsellik ve bireysel doku hassasiyeti doğrulama olumlu referanslar ve II) çapraz doğrulamak sağlıklı, hastalıklı olmayan, orta yaş akciğer dokusundan kullanarak sonuçları Laboratuvar hayvanlarının (cynomolgus gibi insan dışı primatlar ve mümkünse, fare, sıçan, eskiden şiling şimdi domuz). Hastalıklı dokuların daha iyi patoloji puanı daha iyi deneysel sonuçlar. Ağır hastalıklı doku-ebilmek var olmak kullanılmış çok zor ve çok sık gösterir canlılığı, yeterli ölçüde düşük veya çok yüksek sitokin düzeyleri, bakteriyel veya mantar enfeksiyonları ve daha az bronchoconstriction sınırlı. Donör donör varyasyon daha yüksek insanlar bireysel çeşitliliği yansıtan laboratuvar hayvanlardan elde edilen sonuçlar karşılaştırılır. Bu, ancak, bir sınırlama genel değildir; gibi yukarıda, diğer ülkelerde (örneğin, ABD) sağlıklı akciğerler nakli için reddetti vefat eden organ bağış elde etmek mümkündür. Yanıt dokusunun de akut maruz kalma deneylerde 48 h ilk kadar tarif edilmiştir. Canlılığı ve işlevselliği doku kültürünün birçok gün sonra veya depolama-80 ° C’de sonra azalır Kültür insan Akciğer doku için yaklaşık 14 gün kadar mümkündür. Canlılık bu süre içinde devam ediyor; Ancak, sınırlı sitokin yayın mitogens karşılık olarak sonuçlanan değişkenlik yanı sıra doku makrofajlar gibi birkaç hücre popülasyonlarının işlevsellik kaybı bir artış görülmektedir. Bir bitiş noktası için başka sınırlama dokusunda, örneğin, RNA31 yüksek kaliteli ve yeterli miktarda yalıtım veya tek hücre süspansiyonlar hazırlanması için sonraki Akış Sitometresi engelleyen özel varlığıdır ve hücre fenotipleme. Mekanik yorumlara tek hücreli yanıt ve işlevselliği elde etmek için olasılık böylece sınırlıdır.
Organotypic doku modelleri, insan PCLS gibi temel ve klinik olmayan araştırma üzerinde yüksek bir etkisi olarak kabul edilir. İnsan akciğer malzeme normal organ mimarisi en benzer biçimde yansıtan bir biyolojik kompozisyon vardır. Bu, örneğin, konut alveoler ve bronş epitel hücreleri, düz kas hücreleri, fibroblastlar, endotel hücreleri, sinir lifleri ve makrofajlar içerir. Uygun doku ve hücreler çeşitli uyaranlara cevap. Sinir lifleri, her ne kadar yerel olarak aktif, terminal refleks yanıt14‘ e lider, kes. Sonuç olarak, bu ex vivo model hücresel doğuştan gelen bağışıklık yanıtı, savunma yanıt, sinyal sitokin ve indüksiyon hücre yüzey işaretlerinin çalışma imkanı sunuyor. Birkaç geliştirme tekniği, kültür ve geçerlilik bitiş noktalarının translasyonel bilimde insan PCLS kullanılsın. Gelecekteki yaklaşımlar örnekleri şunlardır: i) doğrulanmasını yeni hedefler insan akciğer dokusunda, bağışıklık yanıtı pozlama sonra bir değerlendirme II) Örneğin, kimyasallar, ilaçlar, nano tanecikleri, vb, III) takviyesi ile bağışıklık hücreleri, akciğer dokusunun böyle T-lenfositleri, IV) olarak kimlik ve solunum sensitizers, hastalık-inducing maddeler veya aktif bileşikler yollar; inhibe maruz kaldıktan sonra örneğin, moleküler kalıplarının değiştirilmesi Ayrıca, v) hava yolu remodeling ve VI) nöronal Yönetmeliği32. Bilimsel alan bu mevcut ve gelecekteki yaklaşımları PCLS ile ilgileniyor. Buna ek olarak, PCLS tekniği cryo-koruma20ve nefes alma sırasında veya mekanik doku doğal hareketini taklit etmek için33 uzanan doku gibi geliştirmek için yardımcı olacaktır farklı gelişmeler çeşitli vardır Havalandırma.
İnsan PCLS diğer 3D modelleri ile karşılaştırıldığında en büyük avantajı bağışıklık hücreleri ve sinir lifleri varlığıdır. Deneyler, fare, sıçan ve hala en sık Farmakoloji ve toksikoloji kullanılır hayvan türü olan insan dışı primatlar da gerçekleştirilebilir. İnsan Akciğer doku karmaşıklığı sonuçları hayvan insana ve vitro vivo içindeiçin çeviri destekler. Solunum sensitizers tanımlanması için varolan alternatif deneyleri bağlamında insan PCLS çok karmaşıktır ve tek hücre yanıt anlayışlar izin vermez. Henüz, doğru hücresel işaretçiyi birlikte, örneğin, Apoptozis, nekroz veya hücre içi işaretleri ile kullanılırsa mikroskobu ve Akış Sitometresi hücresel yanıt hakkında bilgi verebilir. Doğrulanmış ve solunum sensitizers tanımlanması için kullanılan rapor yayımlanmış deneyleri vardır. Ancak, tek hücreli deneyleri kendi avantajları PCLS kullanımıyla gelişmeler değerli katkıları teknik yüksek üretilen iş tarama için kullanılabilir anlamda Watson ve ark. tarafından açıklandığı gibi yapıyoruz 34 onlar fare cryo korunmuş PCLS hava yolu toksisite tahmin etmek için bir yüksek-den geçerek tarama tahlil geliştirilmiştir. Minyatür onların 96-şey PCLS biçimiyle, PCLS uygun bir yüksek-den geçerek tahlil yapma fare lavaj sıvı içinde benzer sonuçlar tespit etmişler.
The authors have nothing to disclose.
Lan Lauenstein insan PCLS ile risk değerlendirmesi için alternatif test stratejileri ile ilgili ön onun iş için teşekkür etmek istiyorum. Bazı araştırma bir hibe 6inci çerçeve programı SENS-BT-IV “Roman test stratejileri alerjenler Vitro değerlendirilmesi için” içinde Avrupa Komisyonu tarafından desteklenen.
Silicon hose 3.0 x 5.0 mm | A. Hartenstein (Leipzig, Germany) | SS04 | |
Syringe | Faust Lab Science (Klettgau, Germany) | 9.410 050 | |
Coring tools | custom-made | custom-made | |
Trimming Blade Handle (FEATHER) | pfm medical ag (Cologne, Germany) | 205530001 | |
Trimming Blades (FEATHER) | pfm medical ag (Cologne, Germany) | 205500000 | |
Microtome: Tissue Slicer | Alabama R&D (Bad Homburg, Germany) | 303400-ADPT | Krumdieck Tissue Slicer (MD6000) |
Microtome blade | Wilkinson Sword (Solingen, Germany) | ENR-4027800011506 | |
Tissue culture dishes | Sigma (München, Germany) | Z666246-420EA | |
Cell strainer filter (100 µm Nylon) | Becton Dickinson (Heidelberg, Germany) | BD352360 | |
Inoculation loop | Copan Diagnostics (Murrieta, USA) | CD176S01 | |
TPP Tissue culture plates 24wells | Sigma (München, Germany) | Z707791-126EA | |
Cassette | Thermo Scientific (Schwerte, Germany) | 1000957 | |
Nunc MaxiSorp flat-bottom | Fisher Scientific GmbH (Hannover, Germany) | 44-2404-21 | |
Nunc MicroWell 96-Well | Thermo Scientific (Schwerte, Germany) | 260836 | |
Confocal Microscope | Zeiss (Jena, Germany) | Confocal LSM Meta 510 | |
Image rendering software | Bitplane AG (Zürich, Switzerland) | IMARIS 7.6 | |
LSM Image Browser | Zeiss (Jena, Germany) | ||
Multiwell-Reader | Tecan Group Ltd. (Männedorf, Switzerland) | Tecan infinite F200Pro | Plate Reader |
Plate shaker | Edmund Buehler GmbH (Hechingen, Germany) | KM-2 Akku | |
BenchMark ULTRA | Ventana Medical Systems (Tucson, USA) | Automated IHC/ISH slide staining system | |
Assays | |||
Cell Proliferation Reagent WST-1 | Roche (Basel, Switzerland) | 11644807001 | |
Cytotoxicity Detection Kit (LDH) | Roche (Basel, Switzerland) | 11644793001 | |
Microscopical vitality staining | Invitrogen (Carlsbad, USA) | L-3224 | LIVE/DEAD Viability/Cytotoxicity Kit |
BCA Protein Assay | Thermo Scientific (Schwerte, Germany) | 23225 | |
ELISA assay kit | R & D systems | various, e.g. DY210 (TNF-α) or DY200 (IL-1α) | DuoSet |
Reagents | |||
Agarose, low gelling temperature | Sigma (München, Germany) | A9414-100G | |
Balanced Salt Mixtures and Solutions, Cell Culture, Classic Media and Salts, Earle’s Balanced Salts (EBSS) | Sigma (München, Germany) | E2888-500ML | |
Penicillin and streptomycin | Lonza (Verviers, Belgium) | 17-602E | |
Dulbecco´s Modified Eagle´s Medium Nutrient Mixture F-12 Ham (DMEM F-12) | Gibco (Darmstadt, Germany) | 11039-047 | Culture medium |
Dulbecco´s Phosphate with Ca and Mg (DPBS) | Lonza (Verviers, Belgium) | BE17-513F | Buffer solution |
Albumin from bovine serum (BSA) | Sigma (München, Germany) | A9647-500G | |
Detergent | Sigma (Saint Louis, USA) | X100-100ML | Triton X-100 |
Washing buffer | Merck (Darmstadt Germany) | 524653 | 0.05% Tween 20 in PBS |