Спящие и активный рак клеток фенотипов характеризовались с использованием количественных этапа визуализации. Клетки распространения, миграции и морфология анализы были интегрированы и проанализированы в один простой способ.
Приобретение ангиогенных фенотипа является важным компонентом побег из опухоли покоя. Хотя несколько классических в vitro анализов (например, распространение, миграция и другие) и в естественных условиях модели были разработаны для расследования и характеризуют ангиогенных и не ангиогенных клеток фенотипов, эти методы являются время и трудоемким и часто требуют дорогостоящих реагентов и инструментов, а также значительный опыт. В недавнем исследовании мы использовали Роман количественных этап визуализации (QPI) техника для проведения промежуток времени и без маркировки характеристики ангиогенных и не ангиогенных человека остеосаркома KHOS клеток. Группа клеточных параметров, включая морфологии клеток, распространение и моторики, измерялись количественно и анализируются с помощью QPI. Этот роман и количественный подход обеспечивает возможность непрерывно и неинвазивным изучить соответствующие клеточных процессов, поведения и характеристик раковых клеток и другие типы клеток в простой и комплексным образом. В настоящем докладе описываются наши экспериментальный протокол, включая подготовка клетки, QPI сбора и анализа данных.
Один из первых контрольно-пропускных пунктов в развитии и прогрессировании твердых опухолей является приобретение ангиогенных фенотип, признаком рака. Этот прогресс включает в себя целый ряд биохимических и молекулярных процессов в1,2,3. Техническая проблема в изучении этой ключевой шаг в опухолевой прогрессии является отсутствие инструментов непрерывно и количественно охарактеризовать и дифференцировать между ангиогенных и не ангиогенных фенотипов живой раковых клеток в непредвзято. Традиционные анализы, используется для изучения клеточного поведения ангиогенных и не ангиогенных клеток обычно требуют дорогостоящих реагентов и инструментов, например, клеток распространения/миграции assays4,5, 6,,78,9,10,11,12,,1314 или Дополнительные в естественных условиях оценки4,5,6,8,15,16, а также требует значительного опыта и интенсивной расход времени и труда.
Недавно количественные этап визуализации (QPI) стала Роман технику, которая позволяет промежуток времени и маркировки свободной оценки различных клеток морфологии и поведении параметров17,18,19, 20 , 21 , 22. в отличие от обычных оптической микроскопии, QPI количественно вариации сдвиг фазы попиксельно после того, как свет проходит через оптический объект и реконструирует собственноручно с преобразованной оптической толщины и объем, таким образом позволяя прямой анализ живых клеток и следующие возможности: (1) количественные изображений, изображений (2)-неинвазивные и промежуток времени, (3) лейбл свободных изображений и (4) одновременно нескольких параметров визуализации. Эти особенности делают QPI мощный инструмент для оценки и понимания патологических процессов на клеточном уровне.
В недавнем исследовании, мы использовали QPI количественно охарактеризовать и дифференцировать между ангиогенных KHOS-A и не ангиогенных KHOS-N фенотипов клеток человека остеосаркома на основе систематического и количественных, объединяя анализ морфологии клеток, распространение и моторики23. С помощью программного обеспечения для анализа изображений, группа клеток морфологических и поведения параметров были количественно сравнить между ангиогенных и не ангиогенных клеток человека остеосаркома и были определены пять характерных отличий между этими двумя фенотипов. Этот новаторский подход обеспечивает комплексное и количественные платформу для оценки различных биологически соответствующих характеристик сотовой.
В этом исследовании мы описываем в пробирке, неинвазивная и этикетка бесплатно использование метода QPI количественно характеризовать ангиогенных и не ангиогенных фенотипов клеток человека остеосаркома. Одновременно были проанализированы несколько клеточных параметров этим ме?…
The authors have nothing to disclose.
Авторы с благодарностью признаем поддержку Фонд исследований рака молочной железы и расширенный медицинский исследовательский фонд.
T75 flask | Corning, NY, USA | 353136 | |
6-well plates | Corning, NY, USA | 3506 | |
Dulbecco’s modified Eagle medium (DMEM) | Thermo Fisher Scientific, MA, USA | 11965092 | |
Fetal bovine serum (FBS) | Atlanta Biologicals, GA, USA | S11550 | |
Penicillin Streptomycin | Thermo Fisher Scientific, MA, USA | 15140122 | |
Phosphate buffered saline (PBS) | Thermo Fisher Scientific, MA, USA | 10010023 | |
Beckman Z1 Coulter counter | Beckman Coulter, IN, USA | Z1 | |
HoloMonitor M4 | Phase Holographic Imaging Phi AB, Lund, Sweden | M4 | Microscope |
Hololid | Phase Holographic Imaging Phi AB, Lund, Sweden | PHI 8020 | |
HStudioM4 | Phase Holographic Imaging Phi AB, Lund, Sweden | HStudioM4 | Software |