סרטן רדום ופעיל תא פנוטיפים מאופיינים באמצעות הדמיה שלב כמותית. מבחני התפשטות ההעברה, מורפולוגיה תאים משולבים, מנותח בשיטה פשוטה אחת.
רכישת פנוטיפ האנגיוגנזה היא מרכיב חיוני של הבריחה מן הגידול תרדמה. למרות מספר הקלאסי במבחנה מבחני (למשל, הפצה, העברה ואחרים) ומודלים ויוו פותחו כדי לחקור ולהעמיד לאפיין פנוטיפים תא האנגיוגנזה, הלא-אנגיוגנזה, שיטות אלו הן זמן עבודה אינטנסיבית, ולעיתים קרובות דורשים ריאגנטים יקר, מכשירים, כמו גם מומחיות משמעותית. במחקר שנערך לאחרונה, השתמשנו תקופה כמותיים הרומן הדמיה (ה-QPI) טכניקה לנהל את אפיוני בצילום מואץ ללא תיוג של תאים KHOS האנושי אוסטאוסרקומה האנגיוגנזה, הלא-אנגיוגנזה. פאנל של פרמטרים הסלולר, כולל תא, התפשטות, חיות וצורות, נמדדו באופן כמותי, נותחה באמצעות ה-QPI. מרומן זה ואף הגישה הכמותית מספקת הזדמנות ללמוד באופן רציף, לא פולשני תהליכים תאיים הרלוונטיים, התנהגויות, ואת מאפייני תאים סרטניים, סוגי תאים אחרים בצורה פשוטה משולב. הדו ח מתאר פרוטוקול הניסוי שלנו, כולל הכנה תא, ה-QPI רכישה של ניתוח נתונים.
אחד המחסומים המוקדם התפתחות, התקדמות של גידול מוצק הוא הרכישה של פנוטיפ אנגיוגנזה, סימן היכר של סרטן. התקדמות זו כוללת מגוון רחב של תהליכים הביוכימי והמולקולרי1,2,3. אתגר טכני במחקר של שלב זה מפתח בהתקדמות הגידול היא היעדר כלים כדי לאפיין באופן רציף ולא באופן כמותי להבדיל בין פנוטיפים האנגיוגנזה, הלא-אנגיוגנזה של תאים סרטניים חיים בצורה בלתי לא משוחדת. מבחני מסורתי בשימוש כדי לחקור את התנהגויות הסלולר של תאים האנגיוגנזה ושאינם-אנגיוגנזה בדרך כלל דורשים ריאגנטים יקר וכלי נגינה, למשל, התפשטות/נדידת תאים מבחני4,5, 6,7,8,9,10,11,12,13,14 או משלימים ויוו הערכות4,5,6,8,15,16, וכן הדורשים מומחיות משמעותית לטיפול נמרץ צריכת זמן ודיני.
לאחרונה, שלב כמותיים הדמיה (ה-QPI) התפתחה טכניקה חדשנית המאפשרת הערכת זמן לשגות ללא תיוג מגוון רחב של התא מורפולוגיה והתנהגות פרמטרים17,18,19, 20 , 21 , 22. בניגוד קונבנציונאלי מיקרוסקופ אופטי, ה-QPI מכמתת וריאציות של המופע. ההתחלתי על ידי פיקסל פיקסל אחרי האור עובר דרך עצם אופטי, ומשחזרת הולוגרף עם המומר אופטי עובי ונפח, ובכך מאפשר הישיר ניתוח של תאים חיים, התכונות הבאות: הדמיה (1) כמותית, הדמיה (2) לא פולשנית, זמן לשגות, (3) ללא תווית ההדמיה וה הדמיה multi-parameter (4) בו זמנית. תכונות אלה להפוך את ה-QPI כלי רב עוצמה כדי להעריך ולהבין תהליכים פתולוגיים ברמה התאית.
במחקר שנערך לאחרונה, אנחנו מנוצל ה-QPI לאפיין באופן כמותי, להבדיל בין האנגיוגנזה KHOS-A ושאינם-אנגיוגנזה פנוטיפים KHOS-N של תאים אנושיים אוסטאוסרקומה בצורה שיטתית, תפוקה, שילוב של ניתוח של מורפולוגיה תאים, התפשטות, תנועתיות23. באמצעות תוכנת ניתוח התמונה, פאנל של התא מורפולוגי והתנהגות פרמטרים הושוו באופן כמותי בין תאים אנושיים אוסטאוסרקומה האנגיוגנזה, הלא-אנגיוגנזה וזוהו חמשת ההבדלים האופייני בין שני אלה פנוטיפים. גישה חדשנית זו מספקת פלטפורמה משולבת, כמותיים להערכת מגוון מאפיינים הסלולר רלוונטי מבחינה ביולוגית.
במחקר זה, אנו מתארים במבחנה, לא פולשנית, ללא תווית שיטה באמצעות ה-QPI לאפיין באופן כמותי את פנוטיפים האנגיוגנזה, הלא-אנגיוגנזה של תאים אנושיים אוסטאוסרקומה. מספר פרמטרים הסלולר יש נותחו בו זמנית בשיטה זו משולבים, תפוקה גבוהה, כולל אזור תא, עובי התא, נפח התאים, קצב התפשטות, הכפלת זמן ההעבר?…
The authors have nothing to disclose.
המחברים מאשר בתודה את התמיכה של הקרן לחקר סרטן השד ועל קרן מחקר רפואי מתקדם.
T75 flask | Corning, NY, USA | 353136 | |
6-well plates | Corning, NY, USA | 3506 | |
Dulbecco’s modified Eagle medium (DMEM) | Thermo Fisher Scientific, MA, USA | 11965092 | |
Fetal bovine serum (FBS) | Atlanta Biologicals, GA, USA | S11550 | |
Penicillin Streptomycin | Thermo Fisher Scientific, MA, USA | 15140122 | |
Phosphate buffered saline (PBS) | Thermo Fisher Scientific, MA, USA | 10010023 | |
Beckman Z1 Coulter counter | Beckman Coulter, IN, USA | Z1 | |
HoloMonitor M4 | Phase Holographic Imaging Phi AB, Lund, Sweden | M4 | Microscope |
Hololid | Phase Holographic Imaging Phi AB, Lund, Sweden | PHI 8020 | |
HStudioM4 | Phase Holographic Imaging Phi AB, Lund, Sweden | HStudioM4 | Software |