Мы описываем чип-платформы для трехмерного культивирования клеток в микро-биореакторов. Один чип может вмещать до 10 мил. клеток, которые можно выращивать в точно определенных условиях в связи с потоком жидкости и т.д. напряжения кислорода в стерильной, замкнутый контур циркуляции.
Abstract
Мы разработали чип основе клеточной культуры система трехмерного выращивания клеток. Чип, как правило, изготовлены из не-биоразлагаемых полимеров, например, поликарбоната или полиметилметакрилата микро литья под давлением, микро горячего тиснения или микро горячего формования. Но, он также может быть изготовлен из биоразлагаемых полимеров. Его габаритные размеры составляют 0,7 1 х 20 х 20 х 0,7 1 мм (ВxШxД). Основные особенности чипы, используемые либо сетки до 1156 кубических микро-контейнеры (CF-чип), каждая размером 120-300 х 300 х 300 μ (ВxШxД) или круглые углубления диаметром 300 μ и глубины в 300 μ (г-чип). Эшафот можно разместить 10 млн.. клеток в трехмерной конфигурации. Для оптимального питательного и газоснабжения, чип вставляется в биореакторе жилья. Биореактор является частью замкнутого контура циркуляции стерильные, что в простейшей конфигурации, дополнительно состоит из насоса ролика и средний резервуар с газом. Биореактор может быть запущен в перфузии, superfusion, или даже в смешанном режиме эксплуатации. Мы успешно культивируемых клеточных линий, а также первичные ячейки над периодами в несколько недель. Для крыс первичных клеток печени, мы могли бы показать сохранение органотипической функции в течение более 2 недель. Для линий гепатоцеллюлярной карциномы ячейки мы могли бы показать индукцию печени специфических генов нет или незначительно выраженных в стандартной культуры монослоя. Система также может быть полезна как выращивание стволовых клеток системе, так как первые опыты дифференцирование стволовых клеток были многообещающими.
Protocol
Эта статья описывает использование чип-платформы (рис. 1) для трехмерного выращивания клеточных линий, а также первичные ячейки. Так как многие клетки выразить органотипической функции только в 3D-среде, мы разработали чип полимера, который обеспечивает эшафот которой клетки могут прид?…
Discussion
Мы разработали чип-платформы для трехмерного выращивания клеток в активное перфузии микро биореакторов. Чипы могут быть изготовлены из не поддающихся биохимическому разложению, а также биоразлагаемых полимеров методом микро литья под давлением, горячее тиснение, а также микро термоформования ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Мы хотели бы поблагодарить Мехтильд Herschbach и Анке Dech за отличную техническую помощь.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Cells
Other
ATCC
HB-8065
Collagen I from rat tail
Reagent
Roche Diagnostics
11 179 179 001
PARIS kit
Reagent
Ambion Inc.
AM1921
Syto16
Reagent
Invitrogen
S7578
anti cytokeratin 18
Antibody
Abcam plc
ab668
Primary Ab, Mouse monoclonal, used 1/100 in PBS
Anti E-cadherin
Antibody
Abcam plc
ab1416
Primary Ab, Mouse monoclonal, used 1/50 in PBS.
Goat anti-albumin
Reagent
Bethyl Laboratories
E80-129
Primary Ab, goat anti-human Albumin, used 1/200 in PBS
Rabbit anti-mouse IgG1
Antibody
Invitrogen
A11059
Secondary Ab, Alexa Flour 488 conjugated, used 1/100 in PBS + 0.5 % BSA
Cy3 anti-goat IgG
Reagent
Jackson ImmunoResearch Lab
705-165-003
Cy3 AffiniPure donkey a-goat IgG Ab, used 1/700 in PBS + 0.5% BSA
Gottwald, E., Lahni, B., Thiele, D., Giselbrecht, S., Welle, A., Weibezahn, K. Chip-based Three-dimensional Cell Culture in Perfused Micro-bioreactors. J. Vis. Exp. (15), e564, doi:10.3791/564 (2008).