تصف لنا منبرا يعتمد على الشرائح الالكترونية لزراعة ثلاثية الأبعاد من الخلايا في الدقيقة المفاعلات الحيوية. يمكن للمرء منزل رقاقة تصل إلى 10 ميو. الخلايا التي يمكن زراعتها في ظل ظروف محددة بدقة فيما يتعلق بتدفق السائل والأكسجين الخ التوتر في العقيمة ، حلقة الدوران مغلقة.
Abstract
قمنا بتطوير ثقافة الخلية يعتمد على الشرائح الالكترونية لنظام زراعة ثلاثية الأبعاد من الخلايا. عادة ما يتم تصنيعها من شرائح غير القابلة للتحلل البوليمرات ، على سبيل المثال ، أو البولي ميتاكريلات بواسطة حقن الصغرى ، والنقش الساخنة الصغرى أو الصغيرة بالحرارة. ولكن ، يمكن أيضا أن تكون مصنوعة من البوليمرات الحيوية القابلة للتحلل. أبعادها الشاملة هي 0.7 1 × 20 × 20 × 0.7 ملم 1 (hxwxl). الميزات الرئيسية للرقائق المستخدمة هي إما الشبكة تصل إلى 1156 مكعب الحاويات الصغيرة (CF – رقاقة) كل منها في حجم 120-300 × 300 × 300 μ (hxwxl) أو تجاويف مستديرة بأقطار من 300 μ وبعمق 300 μ (ص رقاقة). يمكن للسقالة 10 منزل ميو. خلايا في تكوين ثلاثي الأبعاد. للحصول على المواد الغذائية الأمثل والغاز ، ويتم إدراج الشريحة في السكن مفاعل حيوي. في مفاعل حيوي هو جزء من حلقة مغلقة steril تداول أنه في أبسط التكوين ، وتتألف من additionaly مضخة وخزان أسطواني مع المتوسط لتوريد الغاز. يمكن تشغيل مفاعل حيوي في التروية ، superfusion ، أو حتى وضع عملية مختلطة. لقد نجحنا في زراعة خطوط الخليوي ، وكذلك الخلايا الأولية لفترات تتراوح من عدة أسابيع. لخلايا الكبد الأولية الفئران يمكن أن تظهر لنا الحفاظ على وظائف عضوي النمط لأكثر من 2 اسابيع. لخطوط سرطان الخلايا الكبدية يمكننا إظهار تحريض جينات معينة لا الكبد أو قليلا عنها في الثقافة المونولاير القياسية. قد يكون النظام المفيد أيضا زراعة الخلايا الجذعية النظام منذ التجارب الأولى مع تمايز الخلايا الجذعية واعدة.
Protocol
توضح هذه الورقة استخدام منصة يعتمد على الشرائح الالكترونية (الشكل 1) لزراعة ثلاثي الأبعاد من خطوط الخلايا وكذلك الخلايا الأولية. منذ قيام العديد من الخلايا وظائف عضوي النمط التعبير فقط في بيئة 3D ، قمنا بتطوير شرائح البوليمر الذي يوفر السقالة التي يمكن أن تلتزم الخلاي…
Discussion
وقد وضعنا برنامجا يعتمد على الشرائح الالكترونية لزراعة ثلاثية الأبعاد من الخلايا في المفاعلات الصغيرة perfused بنشاط. ويمكن تصنيع رقائق من غير القابلة للتحلل ، وكذلك البوليمرات القابلة للتحلل بواسطة حقن الصغرى ، والنقش الساخنة وكذلك التقنيات الدقيقة بالحرارة 3. اعتمادا على …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
نود أن نشكر Mechthild Herschbach وDech انكه للحصول على مساعدة فنية ممتازة.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Cells
Other
ATCC
HB-8065
Collagen I from rat tail
Reagent
Roche Diagnostics
11 179 179 001
PARIS kit
Reagent
Ambion Inc.
AM1921
Syto16
Reagent
Invitrogen
S7578
anti cytokeratin 18
Antibody
Abcam plc
ab668
Primary Ab, Mouse monoclonal, used 1/100 in PBS
Anti E-cadherin
Antibody
Abcam plc
ab1416
Primary Ab, Mouse monoclonal, used 1/50 in PBS.
Goat anti-albumin
Reagent
Bethyl Laboratories
E80-129
Primary Ab, goat anti-human Albumin, used 1/200 in PBS
Rabbit anti-mouse IgG1
Antibody
Invitrogen
A11059
Secondary Ab, Alexa Flour 488 conjugated, used 1/100 in PBS + 0.5 % BSA
Cy3 anti-goat IgG
Reagent
Jackson ImmunoResearch Lab
705-165-003
Cy3 AffiniPure donkey a-goat IgG Ab, used 1/700 in PBS + 0.5% BSA
Gottwald, E., Lahni, B., Thiele, D., Giselbrecht, S., Welle, A., Weibezahn, K. Chip-based Three-dimensional Cell Culture in Perfused Micro-bioreactors. J. Vis. Exp. (15), e564, doi:10.3791/564 (2008).