从成年大鼠心脏同时分离高质量心肌细胞，内皮细胞和成纤维细胞
Summary
已经开发并描述了用于从大鼠心脏分离不同心脏细胞类型的几种方案。在这里，描述了优化的方案，其允许从单一制剂分离高质量的主要心脏细胞类型（心肌细胞，内皮细胞和成纤维细胞），降低了实验成本。
Abstract
大鼠是用于心血管研究的重要动物模型，大鼠心脏细胞常规用于体外分析心血管疾病进展的分子机制，如心脏肥大，纤维化和动脉粥样硬化。尽管已经对从心血管系统开发永生化细胞系以了解这些细胞机制进行了多次成功的尝试，但是对于这些研究，原代细胞提供了更加自然和接近于体内环境。因此，在特定细胞类型上工作的不同实验室已经制定了分离感兴趣的大鼠心脏细胞的各种类型的方案。然而，允许隔离多个单元格类型的协议丢失。这里描述了优化的方案，其允许从单一制剂中分离高质量的主要心脏细胞类型（心肌细胞，内皮细胞和成纤维细胞），并使得该r用于细胞分析。这样可以最有效地利用可用资源，这可以节省时间并降低研究成本。
Introduction
长期以来，啮齿动物模型被用作扩大对健康和疾病心血管生理学理解的工具。 1虽然这些动物模型可以让我们了解器官水平的疾病的病理生理学，并且分析用于治疗心血管疾病的各种药理学药物的药代动力学和药效学，了解心血管疾病发展的分子机制以及特定的细胞类型需要使用体外细胞培养模型。为此，已经开发了来自心血管系统的不同永生细胞系;然而，新鲜分离的原代细胞在生理和功能上与活组织和生物体更相关。
心脏是含有所有主要类型的心血管细胞的通用器官ystem，大鼠心脏仍然是一种常用的心血管生理学理解模型。在过去几十年中，已经描述了将各种细胞类型与心脏组织隔离的不同方法。然而，这些方法仅关注一种特定细胞类型的分离，导致不能再用于细胞分析的其他类型细胞的丧失。这里描述了优化的方案，其能够同时且高质量地分离主要细胞类型的心脏组织，即心肌细胞，内皮细胞和成纤维细胞。所有这些细胞类型可用于不同的实验装置8,9,10以及来自相同动物的细胞 – 细胞相互作用的分析。
Protocol
Representative Results
Discussion
在本文中，描述了用于分离和培养心肌细胞，内皮细胞和成纤维细胞的可重复方案。该方案描述了与仅仅一种细胞类型相反的心脏组织， 即心肌细胞，内皮细胞和成纤维细胞的主要细胞类型的同时和高质量分离。分离过程中的关键步骤是适当消化心脏组织。如果消化不完全，仍然可以获得大量的肌细胞，但其质量非常差，并且它们大多是超收缩和圆形的（ 图2B ），并且在实验…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
感谢L. Rinaldi，S.Schäffer，D. Reitz，H. Thomas和A. Weber的技术支持。作者还希望感谢Dr. E. Martinson博士对手稿进行广泛的阅读和语言编辑。该研究由Giessen Anschubsfinanzierung大学授予M. Aslam和D.Gündüz授予的支持。
Materials
| anti-vWF | Santa Cruz Biotech. | SC-14014 | |
| Calcium chloride | Merck | 102378 | |
| Carnitin | Sigma-Aldrich | C0283 | |
| Collagenase type II | Worthington | LS004176 | |
| Creatin | Sigma-Aldrich | C0780 | |
| D-Glucose | Merck | 108342 | |
| Dil-Ac-LDL | Thermo Scientific | L3484 | |
| EDTA Solution (0.2 M) | Biochrome AG | L2113 | |
| Embeding solution | Citiflour | AF1-25 | |
| Endothelial cell medium MV2 | PromoCell | C-22022 | |
| Foetal calf serum (FCS) | Biochrome AG | S0615 | |
| Gentamicin | Serva Chemicals | 47991 | |
| HEPES | Sigma-Aldrich | H0887 | |
| Isoflurane | Abbott | TU 061219 | |
| Laminin | Roche/Sigma | 11243217001 | |
| M199 medium | Thermo Scientific | 11150059 | |
| M199 medium (Powder) | Biochrome AG | T061 | |
| Magnesium sulphate | Sigma-Aldrich | 63138 | |
| Mouse anti-rat CD31 antibody (TLD-3A12) | Thermo Scientific | MA1-81051 | |
| NaCl solution (0.9%), Sterile | B. Braun | 30820080 | |
| Pan mouse IgG beads (Dynabeads) | Thermo Scientific | 11041 | |
| Paraformaldehyde (PFA) 4% Solution | Santa Cruz Biotech. | sc-281692 | |
| Penicillin-Streptomycin | Thermo Scientific | 15070-063 | |
| Phosphate buffer saline (PBS) 1x | PAN-Biotech | P04-36500 | |
| Plastic consumables | Greiner Bio-One | ||
| Potassium Chloride | Merck | 4933 | |
| Potassium dihydrogen phosphate | Merck | 7873 | |
| Sodium Chloride | Merck | 6404 | |
| Sodium Hydroxide Solution (2 N) | Merck | 109136 | |
| Sterile filtration system | Thermo Scientific | 5660020 | |
| Taurine | Sigma-Aldrich | T8691 | |
| TO-PRO | Thermo Scientific | T3605 | |
| Trypsin-EDTA Solution (10X) | Sigma-Aldrich | T4174 | |
| Water, Sterile | B. Braun |
References
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