We demonstrate the procedure for intra-tracheal inoculation of Haemophilus influenzae into the lower respiratory tracts of mice. This is a very useful tool to study signaling pathways that regulate airway inflammation in mouse models.
Burada, verimli ayrıntılı bir prosedür tanımlamak ve doğrudan Haemophilus influenzae teslim farelerin alt solunum yollarına. Biz H. hazırlanması için prosedür göstermek influenza aşı, H. içi trakeal damlatma akciğere influenzae, farklı gen ekspresyon analizi için bronko-alveolar lavaj sıvısı (BALF), BAL sıvısında bağışıklık hücrelerinin analizi ve RNA izolasyonu toplanması. Bu prosedür, bir bakteri, virüs ya da mantar akciğer enflamatuar yanıtı çalışma için kullanılabilir. daha az belirsizlik ile daha verimli alt solunum yollarına bakteriyel inokulum sunar, çünkü doğrudan trakea damlatma çoğunlukla burun veya aerosol inhalasyon prosedürleri tercih edilir.
Enflamasyon enfeksiyöz ajanlara karşı savunma temel bir bağışıklık mekanizmadır. Bu patojen ortadan kaldırılması ve hasarlı doku onarımını teşvik eder. Aynı zamanda normal sağlıklı durumuna 1'e kurtarma kolaylaştırır. Ancak, düzensiz inflamasyon sıklıkla kronik enflamatuar hastalıklar 2 yol açar. Hava yolu inflamasyonu, kronik obstrüktif akciğer hastalığı (COPD), astım ve pulmonar fibrosis 3 farklı akciğer hastalıkları için bir başlangıç tetikleyicidir.
Tiplendirilemeyen (kapsüllenmemiş), Haemophilus influenzae (NTHi) kronik üst ve alt akciğer enflamatuar hastalıklar 4,5 ile ilişkilidir. Kronik obstrüktif akciğer hastalığı 4,6,7 çocuk ve yetişkinlerin alt solunum yolları izole baskın türdür. NTHi enfeksiyon sonrası inflamatuar yanıtı (örneğin, TNF ve IL-1 gibi) proenflamatuar sitokinlerin regülasyonu ile karakterize edilir ve b aracılıky mitojen aktive protein kinaz (MAPK) ve toll benzeri reseptörler aracılığıyla nükleer faktör-KB (NF-KB) (TLR) 8.
Fare modelleri nedeniyle farklı gen eksikliği hatlarının durumu akciğer inflamatuar hastalığın altında yatan patolojiyi analiz etmek için çok yararlı araçlardır. Çeşitli metotlar, intranazal uygulaması ve aerosol haline getirilmiş inhalasyon 9,10 dahil olmak üzere, canlı / zayıflatılmış bakterileri ve bakteriyel ürünler, aşılamak için kullanılmıştır. Burada, içi trakeal instilasyon göstermektedir. daha az sıklıkta kullanılmasına rağmen, bu yaklaşım daha verimli ve çünkü daha düşük solunum sistemine inokulum doğrudan teslimat yüksek tekrarlanabilir.
Bu yazıda, bakteriyel akciğer patojen ile farelerin akciğerleri aşılamak için eşsiz ve minimal invaziv prosedürü açıklar. Bu prosedür, inflamatuar sinyal yollarının genleri eksik olan fareler kullanılarak, farklı genlerin fonksiyonunu incelemek için kullanılabileceğini göstermektedir. Bu prosedür, aynı zamanda, viral ve mantar akciğer enfeksiyonu enflamatuvar yanıtları incelemek için kullanılabilir. Böyle intranazal veya aerosol inhalasyon gibi diğer yöntemlere göre bu prosedürün avantaj…
The authors have nothing to disclose.
We thank Dr. Carson Harrod for critical reading of the manuscript. We also thank Mr. Minghui Zeng and Drs. Mahesh Kathania and Prashant Khare for their contributions. This work was supported by grants from the American Cancer Society (Research Scholar grant, 122713-RSG-12-260-01-LIB) and the Sammons Cancer Center (Pilot Project grant) to K. Venuprasad.
Chocolate agar plate | Fisher Scientific | CAS50-99-7 | |
Dextrose Anhydrous | Themo Scientific | R01300 | |
Heparin | Hospira,Inc | RL-3010 | |
Deft quick solution | Sigma | GS500-500ML | |
Syringe needle 20/26G | BD | (REF305115/175) | |
Iml syringe | BD | REF 309602 | |
Catheter 20GA | BD | REF 381433 | |
Dissecting Scissors, straight, 10 cm long | kentscientific | INS600393 | |
Iris Forceps, serrated, 10cm long | kentscientific | INS650915 | |
Tweezer #5 Stainless steel, 11cm long | kentscientific | INS600095 | |
10% Formalin | Fisher Scientific | CAS 67-56-1 | |
Agarose | peqlab | 35-1020 | |
5ml polystyrene round-bottom tubes | BD | REF 352058 | |
1.5 ml Microcentrifuge tubes | Light Labs | A-7001-R | |
Reasy Mini kit | Qiagen | 74104 | |
Pellet pestile motor (Tissue homoginizer) | Sigma | Z359971-1EA | |
96 well microtiter plates V bottom | Thermo | 2605 | |
1X PBS | Gibco | 10010-023 | |
OneComp eBeads | eBioscience | 01-1111-42 | |
CD45.2-APC | eBioscience | 17-0454-81 | Working dilution 1:100 |
Ly-6G-eFlor 450 | eBioscience | 48-5931-82 | Working dilution 1:100 |
BSA | HyClone | SH30574.03 | |
RBC Lysis Buffer (10X) | Biolegend | 420301 | |
Live/Dead fixable aqua dead cell stain kit | Invitrogen | L-34957 | |
EDTA (0.5M) | lifetechnologies | 15575-020 | |
CD16/CD32 FcBlock | BD | 553142 | |
Facs tubes polystyrene round bottom tube | BD | 352052 | |
Formaldehyde | Polyscience | 4018 |