This article illustrates how the expression of neurotransmitter receptors can be quantified and the pattern analyzed at synapses with identified pre and postsynaptic elements using a combination of viral transduction of optogenetic tools and the freeze-fracture replica immunolabeling technique.
במיקרוסקופ אלקטרוני Freeze-שבר כבר טכניקת מרכזי מחקר ultrastructural במשך 40 שנים. עם זאת, עדר אמצעי יעיל כדי ללמוד את ההרכב המולקולרי של ממברנות פיק ירידה משמעותית את השימוש בו. לאחרונה, חלה תחייה מרכזית הודות במיקרוסקופ אלקטרונים להקפיא שבר לפיתוח דרכים יעילות כדי לחשוף חלבונים בממברנה נפרדים על ידי תיוג immunogold. אחת השיטות הללו שמכונה immunolabeling Replica Freeze-שבר דטרגנט-solubilized (FRIL).
השילוב של טכניקה FRIL עם optogenetics מאפשר ניתוח בקורלציה של נכסים מבניים ותפקודיים של סינפסות המרכזית. בגישה זו ניתן לזהות ולאפיין הוא נוירונים טרום postsynaptic על ידי הביטוי של כל אחד מהם של channelrhodopsin מתויג סמנים מולקולריים ספציפיים. המראה הייחודי של התמחות הממברנה הפוסט-סינפטי של glutamatergic הסינפסות נוסף מאפשר בעת תיוג של קולטני גלוטמט ionotropic, לכמת ולנתח את חלוקת intrasynaptic של קולטנים אלה. הנה, אנחנו נותנים צעד-אחר-צעד תיאור של ההליכים הנדרשים כדי להכין העתקים מותאמים ועל איך immunolabel אותם. נדונו גם האזהרות והמגבלות של טכניקת FRIL, במיוחד אלה הקשורים הטיות דגימה פוטנציאליות. השחזור הצדדי הגבוהים של טכניקת FRIL, בשילוב עם optogenetics, מציע גישה חזקה מאוד לאפיון של היבטים שונים של העברה סינפטית ב שבבים עצביים מזוהים במוח.
כאן, אנו מספקים דוגמא כיצד גישה זו שמשה להשיג תובנות יחסי מבנה-תפקוד של סינפסות מעוררות ב נוירונים של המוני תא intercalated של האמיגדלה העכבר. בפרט, אנו חקרנו את הביטוי של קולטני גלוטמט ionotropic ב תשומות מזוהות אוiginated מן intralaminar האחורי התלמוס וגרעיני ברך המדיאלי. סינפסות אלו הוצגו להעביר מידע חושי רלוונטי ללמידה פחד לעבור שינויי פלסטיק על מיזוג פחד.
ההגדרה של אדריכלות פונקציונלית של בביו-ממברנות בקנה מידה ננומטרי כבר לערער בשנים האחרונות על ידי פיתוח של מספר טכניקות immunolabeling מתאים במיקרוסקופ אלקטרונים הילוכים. עם זאת, טכניקות אלה, למשל, לפני ואחרי הטמעת immunogold, יש מספר מגבלות חשובות, הכוללים איתור העניים של אנטיגנים ו / או הערכה כמותית מוגבלת של חלבונים קרום הנכנס. מגבלות אלה הופכים להיות קריטיות במיוחד בחקירה של המבנה העדין של מערכת העצבים, מאופיינת ברמה גבוהה של גיוון תא ההטרוגניות סינפסה. ההטרוגניות הזאת תוצאות משתי מגוון מבני ותפקודי מוכתב על ידי האלמנטים טרום postsynaptic ועל ידי ביטוי דיפרנציאלי, העשרה, או אינטראקציה של איתות חלבונים, כגון קולטנים, מובילים, ומולקולות מפעיל.
גישה חדשה עבור immunolabe ישירהלינג של חלבונים בממברנה נפרד או צולבים העתקים להקפיא שבר דטרגנט-solubilized (FRIL) הוצג לראשונה על ידי פוג'ימוטו לפני שני עשורים 1. שיטה מקורית זו הייתה, עם זאת, מספר מגבלות, כלומר, פיצול חמור של העתקים, אשר הקשו על קורלציות משמעותיות של מולקולות שכותרתו עם תאים ממופים בנפרד רקמות מורכבות כמו המוח. לפני כ 10 שנים, Shigemoto ו Fukazawa בהדרגה שיפר את הטכניקה 2. זה היה מקביל המאמצים מקבוצה אחרת של מדענים במעבדות Boulder של קולורדו סטייט, שגם שיפרה בצורה משמעותית את הטכניקה, בפרט לחקר צמתים הפער 3.
שיפור פרוטוקולים שבירים הקפאה ומכונות, כמו גם הכניסה של הקפאה מהירה (בלחץ גבוה), חברה מאפשרת לחוקרים כדי לייצר העתקים רצופים של דגימות של גודל גדול יחסית והיהתמונות באיכות GH של המרכיבים התאיים ביותר ללא מגבלות וממצאים היוצר על ידי קיבעונות כימיים חזקים.
טכניקת FRIL מציעה את היתרון הגדול של כמותי מאוד להציג תעודה מזהה עם באתרו של חלבונים אחד או יותר (בו זמנית) ב היסטולוגית מופתה cytologically תאים שזוהו בתוך רקמות מורכבות כמו המוח, עם היתרון הנוסף של נוף מישוריים של טרום postsynaptic גורמי העתק יחיד. לכן, טכניקת FRIL, למרות מכשולים טכניים רבים, ולפוטנציאל במשך מספר פריצות דרך מדעית מאוד משמעותיות, במיוחד עבור המתאם של נכסים מבניים ותפקודיים של סינפסות בודדות. במהלך העשורים האחרונים, הרבה מידע שהושג על המבנה מולקולרי לפצות, ותפקוד פיסיולוגי של סינפסות; עדיין סינפסות הן מורפולוגית מולקולרית מאוד מגוון תלוי הרשות מראש ו postsynapticלהשכרה נוירונים 4. רק בעבור חופן סוגי סינפסה היו מחקרי מבנה-תפקוד מושלם עד כה 5-7. זה היה בעיקר בשל אילוצים טכניים שמנעו זיהוי מדויק של מהות האלמנטים טרום postsynaptic.
ניתוח ultrastructural סיפקה תובנות קריטיות לתוך השתנות של התמחויות הממברנה הפוסט-סינפטי על פני קשרים סינפטיים ברורים הן מבחינת גודל הסינפטי ותוכן הנוירוטרנסמיטר קולטנים 6, אשר יש לו השפעה גדולה על חוזק הפלסטיות של העברה סינפטית. יתר על כן, מחקרים רבים עולים כי מספר ionotropic הקולטני גלוטמט הביע על סוגים שונים של סינפסה מוסדר בצורה afferent- ויעד תלויה 7-10.
כאן, שיטה המתואר המאפשר ניתוח של הרכב מבנה הקולטן של התמחויות הממברנה הפוסט-סינפטי עם להגדיראלמנטים ותפקוד presynaptic ד. גישה זו מנצלת ביטוי presynaptic של חלבוני אצות רגישים לאור שפותחו לאחרונה, כגון Channelrhodopsin2 (ChR2), ושל טכניקת FRIL לנתח את דפוס ביטוי postsynaptic של α-אמינו-3-הידרוקסי-5-מתיל-4-isoxazolepropionic חומצה (-R AMPA) ו-אספרטט N-methyl-D קולטני גלוטמט (-R NMDA). זו באה לידי ביטוי ב סינפסות הוקמה על ידי אקסונים שמקורם גרעינים התלמוס-מדיאלי ברך האחורי (PIN / MGN) על נוירונים של ההמונים תא intercalated של האמיגדלה (ITC). נוירונים ITC הם תאי GABAergic קוצניים קטנים מאורגנים באשכולות המקיפים את מבנה amygdaloid basolateral (BLA) 11, 12. נוירונים ITC ידועים לקבל תשומות מעוררות מתא העצב העיקרי BLA וכדי למקד את הגרעין המרכזי (CEA), ובכך לתפקד כשער מעכבות עבור זרימת המידע בין BLA ו- CEA 12-15.
לאחרונה, הראינו כי ה- ITנוירונים C הממוקמים באשכול מדיו-הגבו בין BLA ו- CEA גם לקבל תשומות מעוררות ישירות מתכנסות מאזורי קליפת מוח התלמוס ובזמן חושי, אשר שונו על למידת פחד במהלך מיזוג פחד שמיעתי הפבלובית 16. מיזוג פחד הוא אחת הצורות להבין בצורה הטובה ביותר של למידה אסוציאטיבית מבחינת מנגנוני מוח. בשנת מיזוג פחד, גירוי מותנה ניטראלי בתחילה (CS, למשל, בטון) מזווג עם גירוי מותנה מרתיע (ארה"ב, למשל, הלם ברגל קל) וכתוצאה מכך עמותת CS-US והתנה תגובת פחד 17, 18. מעורר תשומות משני אזורים התלמוס ואת neocortical, נושאות מידע המייצג את CS וארה"ב, בהתאמה, היו ידועות להתכנס על עצב פירמידליים של הגרעין לרוחב של האמיגדלה (LA) וכדי לעבור פלסטיות 19. העבודה הקודמת שלנו גילתה כי מידע קלט חושי הוא גם במקביל העביר נוירונים ITC <sעד> 16.
כצעד ראשון לקראת ניתוח מולקולרי מכניסטית של הקלט החושי הפרט הסינפסות על נוירונים ITC, השתמשנו וירוס adeno הקשורים (AAV) להביע ChR2 מתויג עם חלבון פלואורסצנטי צהוב (YFP). AAV הוזרק מסופי PIN / MGN ואת האקסון זוהו על ידי הביטוי שלהם של ChR2-YFP. השתמשנו בשני הפניות שנוצרו על ידי טכניקת FRIL להעריך את הצפיפות של AMPA-R ו NMDA-R-סינפטי ב סינפסות הקים עם נוירונים ITC ידי מסופי האקסון PIN / MGN.
במיקרוסקופ אלקטרוני Freeze-שבר כבר טכניקת מרכזי מחקר ultrastructural במשך 40 שנים. עם זאת, עדר אמצעי יעיל כדי ללמוד את ההרכב המולקולרי של ממברנות פיק ירידה משמעותית את השימוש בו. לאחרונה, חלה תחייה גדולה במיקרוסקופ אלקטרונים להקפיא שבר עקב ההתפתחות של דרכים יעילות כדי לחשוף חלבונים בממברנה אינטגרליים ידי immunogold תיוג 1, 2, כלומר את טכניקת FRIL.
טכניקת FRIL בעל מספר יתרונות על פני שיטות ultrastructural immunogold אחרות. ראשית, חלבונים נגישים בקלות לנוגדני הגדלת הרגישות. שנית, החשיפה של חלק גדול של התמחויות קרום הפלזמה, כגון הממברנה הפוסט-סינפטי, על משטח דו-ממדי של העתק מאפשר בדיקה של התפלגות מרחבית רצף פיזי של מולקולות של עניין ללא שיקום מייגע זמן רב של סריסעיפי ultrathin al. שלישית, על זמינותו של שני החצאים של קרום הפלזמה מגדילה את מספר חלבונים שיכולים להיות מתויג עבור כל אחד מהמבנים, נוגדנים מתאימים הניתנים זמינים. עם שבירה, הפנים ההידרופובי של הממברנה פיצול מצופה פלטינה פחמן כי משריש תחומים חלבון הנותרים על פני השטח שבורה. הדבר מונע גישה של נוגדנים לאנטיגנים בתחומים אלה. למשל על P-פני העתק רק אפיטופים וצפו בשטח protoplasmic יכולים להיות מזוהים על ידי נוגדנים, ואילו על E הפנים רק אפיטופים וצפו בשטח exoplasmic יכול להיות מחויבת על ידי נוגדנים (ראה איור 2).
מצד שני, את הטכניקה FRIL סובל גם ממגבלות מסוימות 2. כמו שברים להתרחש באופן אקראי, זה עלול להיות קשה למקד תאים או מבנים ספציפיים. זה גם יכול להוביל הטית דגימה, למשל, באוסף סינפסה, כתוצאה מההסתברות השונה של fracturing לאורך הממברנה של מבנים עם עקמומיות שונה (למשל, עמוד השדרה לעומת פירים). יתר על כן, הקצאת חלבונים בממברנה לאחד שני הפרצופים הוא בלתי צפויה. לפיכך, פיזורו של חלבון אל P-פנים או E-הפנים, בייחוד עבור מחקרים כמותיים, צריך להיות בזהירות בחן באמצעות נוגדנים תגובתי תחומים תאיים תאיים. לבסוף, זיהוי של העתק של מבנים מסוימים, כגון מסופי האקסון presynaptic, יכול להיות קשה כאשר רק על סמך תכונות מורפולוגיות. עם זאת, השימוש של נוגדנים ספציפיים עבור חלבוני סמן או התמרה של חלבונים בממברנה נפרדים מתויגים או ערוצים באמצעות וקטורים ויראליים מציע כלים נוספים כדי להקל על זיהוי של ממברנות השבורות. לדוגמה, במחקר זה ניצל התמרה של ChR2-YFP בנוירונים התלמוס לזהות efferents axonal שלהם באמיגדלה או תיוג לקולטני μ-אופיואידים לחשוף אותי postsynapticmbranes של נוירונים ITC.
על מנת לבצע את טכניקת FRIL בהצלחה, טיפול בפרט צריך לנקוט בנוגע קיבעון רקמות. קיבעון רקמות חזק (> 2% paraformaldehyde) יכול לגרום שיעור גבוה של שברי צלב וירידה ברגישות תיוג. מצד השני, קיבעונות חלשים להפוך את הטיפול ברקמה (למשל, חיתוך סעיפים) קשה. כמו כן, חשוב לשלוט כי העובי של אובניים הגזוז תואם את העובי של הקלטת דו צדדית. אם העובי של הדגימה נמוך מזה של הקלטת, המשטחים של הרקמה אולי לא לצרף אל פני השטח של שני נישאי המתכת, וכתוצאה מכך הדגימה קפואה אינה שבר. אם הרקמה עבה, זה יהיה דחוס עם עיוותים מבניות בלתי נמנעות כאשר הכריך של שתי הנושאות נחושת הוא עשה. הטמפרטורה שבה הדגימה הוא שבר (בפרוטוקול זה, -115 ° C) משחק גם תפקיד חשובעל המבנה של ההעתק. טמפרטורות גבוהות עשויות להניב שיעור גבוה יותר של חפצים כגון התעבות של אדי מים על פני השטח של הרקמה לפני או במהלך אידוי. בטמפרטורות נמוכות יותר (<-125 ° C) עלול להגביר את הסיכון של פיצול של החומר במהלך שבירה. חומר זה עלול ליפול על פני השטח של הדגימה או להישאר מחובר אליו. פתיתים אלה של חומרים הם גם מצופים בניגוד לייצר כתמים כהים בתמונה. שבירה בטמפרטורות נמוכות יכולה להשפיע גם על התדר של שברים צלבו במיוחד עבור מבני קנס קטנים כגון קוצים הדנדריטים. שלב קריטי נוסף בהכנת ההעתקים הוא עיכול חומר הניקוי. אם העיכול אינו שלם, הרקמה המעוכלת מופיעה כתמים כהים כמו על ההעתק, ערבבה בין הניתוח של המבנה על TEM. יתר על כן, הרקמה המעוכלת יכולה נוגדנים מלכודת או לאגד הלא ספציפית, הגדלת תיוג הרקע. מצד השני, השימוש של חומר ניקויים לעיכול רקמת יכול לפגל מולקולות השייכת לאוניברסיטה העתק שינוי מבני שניוני ושלישוני שלהם. לכן, עבור אנטיגנים מסוימים ייתכן שיהיה צורך בהדרגה לדלל את הריכוז של SDS עם צעדי כביסה נוספים.
לקבלת immunolabeling, הזמינות של גדלים שונים של חלקיקי זהב מצומדות כדי נוגדנים משני מאפשרת לזהות בעת ובעונה האחת, אבל רק מבחינה איכותית, חלבונים מרובים, אפילו microdomains הספציפי של קרום הפלזמה, כגון התמחות הפוסט-סינפטי. עם זאת, בשל הפרעה סטרית, מחקרים כמותיים מוגבלים בדרך כלל זיהוי של מולקולה אחת בלבד. הגודל של חלקיקי זהב יכול גם להשפיע על יעילות התיוג.
על הפרשנות של התיוג FRIL, זה צריך להישמר לזכור כי חלקיק immunogold יכול להיות ממוקם בכל מקום בתוך אונה עם רדיוס של 20-25 ננומטר מן אנטיגן בשל הצורה המורכבת הגמישהed ידי נוגדן ראשוני ומשני 26. למידע נוסף על התיאוריה והפרקטיקה של FRIL וטכנולוגיות רלוונטיות, אנו מפנים את הקורא גם למאמרים מתודולוגיות אחרות 27, 28.
טכניקת FRIL לאחרונה נעשתה שימוש עבור ניתוחים כמותיים ברזולוציה גבוהה של לוקליזציה קולטן הגלוטמט באוכלוסיות סינפסה מגוונות 29, 30. יתר על כן, את רגישות זיהוי של טכניקת FRIL עבור AMPA-R נאמדת גבוה ככל חלקיקי immunogold אחד לכל AMPA אחד הפונקציונלי -R ערוץ 29. לכן, גישה זו היא בסיכומו מאוד שימושי לכמת ולנתח את דפוס הביטוי postsynaptic של AMPA-R ו NMDA-R ב סינפסות המרכזי. הנה, הראינו את תחולתו ב סינפסות PIN / MGN-ITC, אתר והחשוב סביר להעברת ארה"ב מידע במהלך מיזוג פחד. באמצעות נוגדן העלה כנגד שאריות חומצת אמינו התאיות השמורות ביותר של היחידות משנה קולטן AMPA GluA1-GluA4, מצאנו חלוקה שווה של חלקיקי זהב בתוך האשכולות IMP המתאים התמחויות הממברנה הפוסט-סינפטי. הצפיפות-R AMPA ב קוצי ITC הייתה גבוהה באופן משמעותי לעומת סינפסות פירים כוונת של afferents התלמוס PIN / MGN. בשני סינפסות השדרה פיר, מתאם חיובי בין תיוג עבור AMPA-R ואזור postsynaptic זוהה, תכונה משותפת סינפסות glutamatergic אחרים 25. השונות הנמוכות בצפיפות של AMPA-R סינפסות PIN / MGN-ITC מראות התפלגות הומוגנית דומה סינפסות אחרים נוצרו על ידי efferents התלמוס 7, אבל שונה סינפסות קליפת מוח 25. לעומת זאת, צפיפות-R NMDA היה יותר משתנה ולא שונה בין הסינפסות השדרה פיר דבר המצביע על רגולציה שונה AMPA-R. בעתיד, השחזור הגבוה של טכניקת FRIL לא יאפשר רק להעריך את ההרכב המולקולרי הבסיסי של סינפסות מרכזית אך עשוי להקל זיהוי של גhanges במספרי קולטן ionotropic גלוטמט והפצת subsynaptic לאחר למידת פחד, המשלים הקלטות-vivo לשעבר של נכסים טרום postsynaptic של תשומות אלה.
לסיכום, גישה זו יכולה להיות בשימוש על ידי חוקרים אחרים כדי להשיג תובנות יחסי פונקציה-מבנה של סינפסות מעוררות ספציפי קלט רב מעגלים עצביים אחרים בם מתירים את מקורם של התשומות וכן אופי רכב אלמנטי postsynaptic הוא חיוני אך בעייתי .
The authors have nothing to disclose.
Funding was provided by the Austrian Science Fund FWF grant No. P-22969-B11 to F. Ferraguti, and by the Charitable Hertie Foundation and the Werner Reichardt Centre for Integrative Neuroscience and by the DFG (CIN-Exc. 307) to I. Ehrlich.
Surgery | |||
Stereotactic frame | Stoelting, USA | 51670 | can be replaced by other stereotactic frame for mice |
Steretoxic frame mouse adaptor | Stoelting, USA | 51625 | |
Gas anesthesia mask for mice | Stoelting, USA | 50264 | no longer available, replaced by item no. 51609M |
Pressure injection device, Toohey Spritzer | Toohey Company, USA | T25-2-900 | other pressure injection devices (e.g. Picospritzer) can be used |
Kwik Fill glass capillaries | World Precision Instruments, Germany | 1B150F-4 | |
Anesthesia machine, IsoFlo | Eickemeyer, Germany | 213261 | |
DC Temperature Controler and heating pad | FHC, USA | 40-90-8D | |
Horizontal Micropipette Puller Model P-1000 | Sutter Instruments, USA | P-1000 | |
Surgical tool sterilizer, Sterilizator 75 | Melag, Germany | 08754200 | |
rAAV-hSyn-ChR2(H134R)-eYFP (serotype 2/9) | Penn Vector Core, USA | AV-9-26973P | |
fast green | Roth, Germany | 0301.1 | |
Isoflurane Anesthetic, Isofuran CP (1ml/ml) | CP Pharma, Germany | ||
Antiseptic, Betadine (providone-iodine) | Purdure Products, USA | BSOL32 | can be replaced by other disinfectants |
Analgesic, Metacam Solution (5mg/ml meloxicam) | Boehringer Ingelheim, Germany | can be replaced by other analgesics | |
Bepanthen eye ointment | Bayer, Germany | 0191 | can be replaced by other eye ointments |
Drill NM3000 (SNKG1341 and SNIH1681) | Nouvag, Switzerland | ||
Sutranox Suture Needle | Fine Science Tools, Germany | 12050-01 | |
Braided Silk Suture | Fine Science Tools, Germany | 18020-60 | |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Tissue preparation | |||
Paraformaldehyde EM grade | Agar Scientific Ltd., United Kingdom | AGR1018 | |
Saturated picric acid solution | Sigma-Aldrich, USA | P6744-1GA | |
Na2HPO4-2H20 | Merck Millipore, Germany | 1065860500 | |
NaH2PO4-2H2O | Merck Millipore, Germany | 1063451000 | |
NaCl | Merck Millipore, Germany | 1064041000 | |
4N NaOH | Carl Roth, Germany | T198.1 | |
Thiopental | Sandoz, Austria | 5,133 | |
Glycerol | Sigma-Aldrich, USA | G5516-500ML | |
GenPure ultrapure water system | Thermo Fisher Scientific, USA | 50131235 | |
Peristaltic pump | ISMATEC, Germany | ISM 930C | |
Filter Paper | MACHEREY-NAGEL, Germany | MN 615 1/4 | |
Vibroslicer, VT1000S | Leica Microsystems, Austria | ||
Ophthalmic scalpel | Alcon Laboratories, USA | can be replaced by other ophthalmic scalpels | |
Perfusion cannula | Vieweg, Germany | F560088-1 | can be replaced by similar items from other companies |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
High-pressure Freezing | |||
Copper carriers | Engineering Office M. Wohlwend, CH | 528 | |
Sidol Polish | Henkel, Germany | can be replaced by same item from other companies | |
Chamois skin | Household supply store | ||
Hole punch, 1,5mm | Stubai, Austria | can be replaced by same item from other companies | |
Denatured ethanol | Donauchem, Austria | can be replaced by same item from other companies | |
Aceton | Roth, Germany | 9372.5 | CAUTION! |
High Pressure Freezing Machine HPM 010 | BalTec, CH; now Leica Microsystems | HPM010 | not produced any more, substituted by LeicaEM HPM100 |
Stereo-microscope | Olympus, Japan | SZX10 | |
Liquid nitrogen | CAUTION! | ||
Cryo-vials | Roth, Germany | E309.1 | can be replaced by same item from other companies |
CryoCane | Nalge Nunc International,USA | 5015-0001 | can be replaced by same item from other companies |
CryoSleeve | Nalge Nunc International,USA | 5016-0001 | can be replaced by same item from other companies |
Liquid nitrogen storage vessel | Cryopal, France | GT38 | can be replaced by same item from other companies |
Non-ionic detergent (Lavocid) | Werner & Mertz Professional, Germany | ||
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Freeze-fracture and Replication | |||
Sandblaster, Mikromat 200-1 | JOKE Joisten & Kettenbaum, Germany | SANDURET 2-K | can be replaced by same item from other companies |
Siliciumcarbid SIC 360, grain size 25 – 21µ | JOKE Joisten & Kettenbaum, Germany | 955932 | |
Freeze Fracture System BAF 060 | BalTec, CH; now Leica Microsystems | BAF060 | |
Ceramic 12 well plate | Gröpel, Austria | 14511 | can be replaced by same item from other companies |
Trizma base | SIGMA, USA | T1503 | can be replaced by same item from other companies |
Trizma hydrochloride | SIGMA, USA | T3253 | can be replaced by same item from other companies |
Sodium chloride | Merck, Germany | 1,064,041,000 | can be replaced by same item from other companies |
SDS, Sodium lauryl sulfate | Roth, Germany | 5136.1 | CAUTION! ; can be replaced by same item from other companies |
Sucrose | Merck, Germany | 1,076,871,000 | can be replaced by same item from other companies |
TRIS | Roth, Germany | 5429.3 | can be replaced by same item from other companies |
Universal Hybridization Oven | Binder, Germany | 7001-0050 | can be replaced by same item from other companies |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Immunolabelling | |||
BSA | SIGMA, USA | A9647 | can be replaced by same item from other companies |
Anti-GFP Antibody | Molecular Probes, USA | A11122 | |
Anti-pan-AMPAR Antibody | Frontier Institute, Japan | pan AMPAR-GP-Af580-1 | |
Anti-NMDAR1 Antibody, clone 54.1 | Merck Millipore, Germany | MAB363 | |
Opioid Receptor-Mu (MOR) Antibody | ImmunoStar, USA | 24216 | |
EM goat anti-guinea pig, 5nm; secondary antibody | BBInternational, | EM.GAG5 | |
EM goat anti-rabbit, 15nm; secondary antibody | BBInternational, | EM.GAR15 | |
Donkey anti-rabbit, 10nm, secondary antibody | AURION, Netherlands | DAR 10nm | |
Copper grids, 100 Parallel Bar | Agar scientific, UK | G2012C | |
Incubator | Major Science, USA | MO-RC | can be replaced by same item from other companies |
Pioloform Powder | Agar scientific, UK | R1275 | |
Chloroform | Roth, Germany | 3313.1 | CAUTION! ; can be replaced by same item from other companies |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
EM analysis | |||
Philips CM120 TEM | Philips/FEI | ||
Morada CCD camera | Soft Imaging Systems, Germany | ||
iTEM Ver. 5.2, imaging software | Soft Imaging Systems, Germany |