הקמנו טכניקה הבידוד, אפיון פנוטיפי ופונקציונלי ניתוח של תאים חיסוניים מן החניכיים בעכברים.
Immune cell networks in tissues play a vital role in mediating local immunity and maintaining tissue homeostasis, yet little is known of the resident immune cell populations in the oral mucosa and gingiva. We have established a technique for the isolation and study of immune cells from murine gingival tissues, an area of constant microbial exposure and a vulnerable site to a common inflammatory disease, periodontitis. Our protocol allows for a detailed phenotypic characterization of the immune cell populations resident in the gingiva, even at steady state. Our procedure also yields sufficient cells with high viability for use in functional studies, such as the assessment of cytokine secretion ex vivo. This combination of phenotypic and functional characterization of the gingival immune cell network should aid towards investigating the mechanisms involved in oral immunity and periodontal homeostasis, but will also advance our understanding of the mechanisms involved in local immunopathology.
רקמות חניכיימיים המקיפות את האדם השיניים בעכברים ונחשפות כל זמן אל ביופילם המורכב של שן 1. רשת תא חיסון שיטור מכשול החניכיים היא חיונית לשמירה על שלמות רקמות, הבטחת הומאוסטזיס עם חיידקי commensal מקומיים, בעת ובעונה אחת, מתן חסינות יעיל נגד אתגר פתוגניים 2. כדי להשיג הומאוסטזיס, מערכת החיסונית מותאם בקפידה לסביבת חניכיימיים יצירת רשת תא חיסון בעלי התמחות גבוהה, עדיין קצת בפירוט ידוע של אוכלוסיות תאי חיסון חניכיימיים ותפקידם בשמירת רקמה חסינה 2.
כאשר הומאוסטזיס חיסוני מופר על החניכיים, בין אם באמצעות רגישות מארחת מוגברת ו / או נוכחות של קהילות מיקרוביאלי dysbiotic, מצב דלקתי, חניכיימיים עולות 3 4. חניכיים היא מחלה דלקתית נפוצה, שמוביל לאובדן השן sמבני upporting. במקרים חמורים שלה הוא נתפס בתוך כ -10% מכלל אוכלוסיית 5. הביתור הגורמים המרכזיים המעורבים הרגישות חניכיים והתקדמות הוכיחה קשה 6. עם זאת, במודלים של בעלי החיים היו מאוד שימושיים בהבנת מנגנוני חניכת חניכיימיים והתקדמות 7. מודלים יכולים להיות מועסקים על מנת להגדיר את אוכלוסיות תאי מפתח ומתווכים מולקולריים כי הם חיוניים לשמירה על הומאוסטזיס חיסון ופיתוח כונן של מיסב שן. תובנה כזו תהפוך הבנתנו שליטת חניכיימיים הספציפיות של הומאוסטזיס חיסונית לקדם את ההבנה הנוכחית שלנו של בהיווצרות מחלה.
הטכניקה הנוכחית בהצלחה מניבה מספר רב של תאי מערכת חיסון (מתוך עכבר אחת) מתאים, לא רק לאפיון פנוטיפי, אלא גם עבור מחקרים פונקציונליים vivo לשעבר. קבוצה נוספת פרסמה בעבר פרוטוקול לבודד ולאפיין תאים בעכברי חניכיימיים חיסוניים והציגה את שווי השימוש ססגוני cytometry זרימה ?…
The authors have nothing to disclose.
Authors were funded in part by the intramural program of NIDCR (N.M.M) and supported by a Wellcome Trust Stepping Stones Fellowship (097820/Z/11/B to J.E.K) and by a Manchester Collaborative Centre for Inflammation Research grant (to J.E.K). The authors thank Teresa Wild for critically reviewing the manuscript.
Fine Scissors | Fine science tools | 14058-11 | |
Scalpel Handle #3 | Fine science tools | 10003-12 | |
Scalpel Blades #10 | Fine science tools | 10010-00 | Sterile |
Splinter Forceps | Integra Miltex | 6-304 | |
Needles with regular bevel | BD Medical | 305109 | 27G, 12.7 mm length |
Monoject syringes | Covidien | 8881513934 | Luer-lock tip, 3mL |
PBS, pH 7.4 | Life Technologies | 10010-049 | Without Calcium and Magnesium |
RPMI 1640 | Lonza | 12-167F | Without L-glutamine |
DNase I from bovine pancreas | Sigma-Aldrich | DN25-1G | |
Collagenase type IV | Gibco (by Life technologies) | 17104-019 | |
Fetal Bovine Serum | Gemini Bio-products | 100-106 | |
Gentamicin 50 mg/ml | Quality biological | 120-098-661EA | |
Pen Strep | Gibco (by Life technologies) | 15140-122 | |
L-Glutamine | Gibco (by Life technologies) | 25030-081 | |
0.5M EDTA pH 8.0 | Quality biological | 351-027-721EA | |
50 mL tubes | Corning | 352070 | Polypropylene, sterile |
70 μM Cell Strainers | Corning | 352350 | |
Petri dishes | Corning | 351029 | Sterile |
5 mL FACS tubes | Corning | 352052 | Sterile |
BD GolgiPlug | BD Biosciences | 555029 | Contains brefeldin A solution |
Phorbol 12-Myristate 13-Acetate (PMA) | Sigma-Aldrich | P8139 | |
Ionomycin Calcium Salt | Sigma-Aldrich | 13909 | |
Saponin from quillaja bark | Sigma-Aldrich | S4521 | |
LIVE/DEAD Fixable Aqua Dead Cell Stain Kit | Life Technologies | L34957 | |
Anti-Mouse CD45 Alexa Fluor 700 | eBioscience | 56-0451-82 | |
Anti-Mouse CD4 eFluor 450 | eBioscience | 48-0042-82 | |
Anti-Mouse TCR beta APC eFluor 780 | eBioscience | 47-5961-82 | |
Anti-Mouse gamma delta TCR FITC | eBioscience | 11-5711-82 | |
Anti-Mouse IL-17A APC | eBioscience | 12-7311-82 | |
Anti-Mouse IFN-γ PE | eBioscience | 11-5931-82 | |
Anti-Mouse NK1.1 PE-Cy7 | eBioscience | 25-5941-82 | |
Anti-Mouse CD90.2 APC eFluor 780 | eBioscience | 47-0902-82 | |
Anti-Mouse CD3e FITC | eBioscience | 11-0031-82 | |
Anti-Mouse CD19 FITC | eBioscience | 11-0193-82 | |
Anti-Mouse CD11b FITC | eBioscience | 11-0112-82 | |
Anti-Mouse CD11c FITC | eBioscience | 11-0114-82 | |
Anti-Mouse TCR beta FITC | eBioscience | 11-5961-82 | |
Anti-Mouse Ly-6G FITC | eBioscience | 11-5931-82 | |
Anti-Mouse Ly-6C FITC | BD Pharmingen | 553104 |