The authors present a protocol to collect swine nasal wipes to detect and isolate influenza A viruses.
Надзор за вирусов гриппа А свиней имеет решающее значение для здоровья человека и животных, потому что вирус гриппа А быстро развивается в свиней населения и новые штаммы постоянно появляются. Свиной могут быть заражены различными линий вируса гриппа A делая их важных узлов для возникновения и поддержания нового вируса гриппа штаммов. Отбор проб свиней в различных условиях, таких как коммерческие свинофермах, сельскохозяйственных ярмарок и рынков живой животных важно обеспечить полное представление о циркулирующих в настоящее время штаммов IAV. В настоящее время прижизненной техника выборки золотой стандарт (т.е. сбор носовых мазков) является трудоемким, потому что это требует физического сдержанность свиней. Носовые салфетки включают потирая кусок ткани через морде свиньи с минимальной до не ограничением животного. Носовая протрите Процедура проста для выполнения и не требует персонала с профессиональной ветеринарии или подготовки обработки животных. Втотя чуть менее чувствительны, чем носовых мазков, обнаружение вирусов и изоляции ставки являются адекватными для правильного носового салфетки жизнеспособную альтернативу для отбора проб отдельных свиней, когда методы отбора проб с низким стресс требуется. Протокол исходя излагаются шаги, необходимые для сбора жизнеспособной носовой стереть с индивидуальной свиньи.
Вирусы гриппа (IAV) вызывают респираторные заболевания у многих видов, в том числе домашних птиц, свиней и человека. Благодаря рекомбинации сегментированного генома ИФО быстрого вирусного эволюции может произойти и новых штаммов ИФО часто появляться. Свиной являются виды, которые могут служить в качестве емкости для смешивания для реассортации IAVS из нескольких видов хозяев. 1 Есть в настоящее время три основных подтипа IAV обычно циркулирующие среди североамериканских свиней (H1N1, H1N2, H3N2), но несколько введений IAV от человека имеют привело к широкому разнообразию IAV в этих подтипов. 2 Быстрое развитие IAVS поражающих свиней была очевидна с 1998 года, когда тройка реассортант ИФО, содержащий сегменты гена от человека, птиц и свиней вирусы 3 получил широкое распространение среди свиней в США. 4 Внутренний ген сегменты из этой тройной реассортантного IAV остаются весьма распространена среди IAVS настоящее время поражающих свиней. 5
"> Во всем мире, ИФО является существенной причиной респираторных заболеваний у свиней, в которой типичные клинические признаки включают лихорадку, анорексию, вялость, кашель, затрудненное дыхание, чихание, выделения из носа и плохой набор веса. ИФО может быть особенно дорого, чтобы посеять фермы, где репродуктивного недостаточность вследствие IAV индуцированной лихорадкой и слабых поросят, родившихся были задокументированы. 6,7 В Соединенных Штатах, ИФО обычно обнаруживается в коммерческих свиного стада и обширной антигенной и геномной разнообразия и непрерывной эволюции среди IAV заражения свиней препятствует контроль это Вирус 8-11.Общественные проблемы со здоровьем по поводу возникновения пандемического штамма IAV результате рекомбинации у свиней были реализованы в 2009 году, когда свинья-линия ИФО, содержащий сегменты гена от тройной реассортант Северной Америки свиного происхождения и Евразийского птичьего как свиной родословной вызвало всемирную пандемию в людях. 12 пандемический вирус (A (H1N1) pdm09) с тех порreassorted эндемическим свиней штаммов ИФО 13,14, и некоторые из этих новых штаммов reassorted были переданы обратно в человека. 15 Частота рекомбинации событий и появления новых штаммов ИФО с пандемическим потенциалом делает активное наблюдение циркулирующих вирусов IAV свиней императивного, особенно на границе свиного человеку.
Интерфейс свиного человека имеет важное значение для двунаправленной передачи межвидовой IAV. Человека к свиного передачи, происходящих в коммерческой свиноводстве несет ответственность за большого количества IAV разнообразия в настоящее время в популяции свиней. Сельскохозяйственные ярмарки являются крупнейшие настройки для comingling людей и свиней в Соединенных Штатах и, как известно, участки для передачи зоонозных IAV. 15-21 в 2012 году, во время вспышки вариант H3N2 IAV, 93% случаев сообщили посещаемость сельскохозяйственной ярмарке в дни до начала заболевания. 15 геномный анализвирусных изолятов из выставочных свиней по сравнению с человека изолятов подтвердил зоонозных передачу. 21 выставочного свиней, инфицированных IAV часто не показывают клинические признаки болезни, 21-23, указывающие на необходимость прямых диагностических тестов.
Отбор больных заметно свиней в одиночку не будет успешно идентифицировать распространенность ИФО в свиней и не могут полагаться на выявление новых штаммов IAV возникающих среди свиней. Активное наблюдение является абсолютно необходимым для выявления возникающих деформаций IAV в свиней, и оценки их опасности для обоих свиней и общественного здоровья. Большинство мероприятий по надзору IAV являются добровольными и поэтому минимально разрушительные методы необходимы. Три основные процедуры сбора пробы до наступления смерти для ИФО заражения свиней являются: носовые тампоны, оральные жидкости и носовые салфетки. Текущие рекомендации для отбора проб индивидуальный свиней, чтобы обнаружить списку ИФО вставку синтетического волокна тампоны в ноздри, как предпочтительного методасобрать выделения из носа и эпителиальные клетки. 24,25 Поскольку свиньи могут попытаться избежать этой процедуры, команда обученного персонала должны сдерживать свиней либо вручную, либо с сетью в зависимости от размера животного. 26 Процесс сдержанность является трудоемким для персонал, и стресс для свиней. Кроме того, выставка свиней часто участвуют в различных соревнованиях на ярмарке, так что восприятие добавленного напряжения на конкурсной животного может сделать владельцы устойчивы к усилиям наблюдения.
С вероятностью обнаружения IAV, начиная от 80-100% в IAV зараженные стада, устные жидкости стали популярной альтернативой носовой мазки для молекулярной обнаружения IAV в популяциях свиней. 27,28 Кроме того, оральные жидкости могут обеспечить более широкий окно Обнаружение ИФО, чем носовых мазков после заражения. Тем не менее, изоляция ИФО из устных жидкостей было проблематичным с только 50% попыток выделения вируса в результате И.А.В восстановление. 29
Использование носовые салфетки вместо носовых мазков во время IAV надзора в свиней преодолевает ограничения, описанные выше. Носовые салфетки не требуют использования удерживающего петлю и могут быть выполнены, не подчеркивая животных или свидетелей в порядке. Минимальная техническая подготовка нужна, чтобы собрать носовые салфетки, что позволяет без ветеринарных специалистов, в том числе владельцев свиней, чтобы собрать образцы наблюдения. Носовые салфетки ранее сравнению с носовых мазков для обнаружения и выделения вируса гриппа А 30 и Подробный протокол этого неинвазивного способа дискретизации описано ниже.
Сбор образцов из свиней с использованием полиэфирных наконечником носовые тампоны оказался полезным в проведении ИФО наблюдение; Однако, использование процедуры носовой тампон препятствует усилиям наблюдения из-за необходимости использования сети для пресечения. Носовые салфетки ?…
The authors have nothing to disclose.
This work has been funded in part with federal funds from the Centers of Excellence for Influenza Research and Surveillance (CEIRS), National Institute of Allergy and Infectious Diseases, National Institutes of Health, Department of Health and Human Services, under Contract No. HHSN272201400006C.
BBL Brain Heart Infusion | Becton, Dickinson and Company | 211059 | |
Penicillin G Sodium Salt | MP Biomedicals, LLC | 021194537 | 1500 u/mg |
Streptomycin Sulfate | AMRESCO LLC | 0382 | |
Gentamicin Solution | Mediatech, Inc. | 30-005-CR | 50 mg/ml |
Amphotericin B Solution | Fisher | S 24 25 | 250 ug/ml |
Kanamycin Sulfate | Teknova | K2105 | 5000 ug/ml |
TPP Rapid Filtermax System | TPP Techno Plastic Products AG | 99150 | |
Nalgen Diagnostic Bottles | Thermo Scientific | 342002-9025 | HDPE with white PP closure |
Dermacea Gauze Sponge, 8 ply | Covidien | 441211 | 5.08 cm × 5.08 cm (2 in. × 2 in) |
Nitrile Exam Gloves | Saftey Choice | 19-170-010 (A-D) |