The authors present a protocol to collect swine nasal wipes to detect and isolate influenza A viruses.
Surveillance voor influenza A-virussen in varkens is van cruciaal belang voor de gezondheid van mens en dier, omdat influenza A-virus zich snel ontwikkelt in varkens bevolking en nieuwe stammen zijn voortdurend in opkomst. Varkens kunnen worden geïnfecteerd door diverse lineages van influenza A virus waardoor ze belangrijke systemen voor het ontstaan en het onderhoud van nieuwe influenza A virusstammen. Sampling varkens in diverse instellingen zoals commerciële varkens landbouwbedrijven, beurzen en levende dieren markten van belang om een volledig beeld van de momenteel circulerende stammen IAV verschaffen. De huidige gouden standaard ante mortem sampling techniek (dwz collectie neusuitstrijkjes) is arbeidsintensief, omdat het fysieke terughoudendheid van de varkens vereist. Nasale doekjes betrekken wrijven een stuk stof over de snuit van het varken met minimale tot geen terughoudendheid van het dier. De nasale veeg procedure is eenvoudig uit te voeren en geen personeel met professionele veterinaire of dierlijke handling training nodig. While iets minder gevoelig dan neusuitstrijkjes, virusdetectie en isolatie tarieven voldoende zijn om de neus veegt een levensvatbaar alternatief voor het bemonsteren van individuele varkens wanneer lage spanning bemonstering methoden nodig zijn. De procedure protocol beschrijft de stappen die nodig zijn om een levensvatbare nasale verzamelen veeg uit een individueel varken.
Influenza A virussen (IAV) veroorzaken respiratoire aandoeningen in vele soorten, waaronder gedomesticeerde vogels, varkens en mensen. Vanwege herschikking van de gesegmenteerde IAV genoom snelle virale evolutie kan optreden en nieuwe IAV stammen vaak ontstaan. Varkens zijn een soort die kan dienen als een mengvat voor de herschikking van IAVS van meerdere host-soorten. 1 Er zijn momenteel drie belangrijke subtypen van IAV vaak circuleren onder de Noord-Amerikaanse varkens (H1N1, H1N2, H3N2), maar meerdere IAV introducties van de mens leidde tot uitgebreide diversiteit IAV binnen deze subtypes. 2 Snelle ontwikkeling van IAVS infecteren varkens is evident sinds 1998 als een drievoudige reassortant IAV die gensegmenten van menselijke, vogels en varkensvirussen 3 werd bekend bij varkens in de Verenigde Staten. 4 De interne gen segmenten van die triple reassortant IAV blijven veel voorkomende onder IAVS momenteel infecteren varkens. 5
"> Wereldwijd IAV is een belangrijke oorzaak van ziekte van de luchtwegen bij varkens die typische klinische symptomen zijn koorts, anorexia, lusteloosheid, hoesten, bemoeilijkte ademhaling, niezen, loopneus en een slechte gewichtstoename. IAV kan bijzonder kostbaar zijn waar reproductieve boerderijen zaaien storing door IAV geïnduceerde koorts en zwak-geboren biggen gedocumenteerd. 6,7 In de Verenigde Staten wordt IAV gewoonlijk aangetroffen in commerciële varkenskuddes en uitgebreide antigene en genetische diversiteit en continue evolutie tussen IAV varkens infecteren de controle over deze belemmerd virus. 8-11Volksgezondheid bezorgdheid over de opkomst van een pandemie IAV stam als gevolg van reassortment in varkens werden gerealiseerd in 2009, toen een Mexicaanse-lijn IAV met gensegmenten van de triple-reassortant Noord-Amerikaanse varkens geslacht en de Euraziatische aviaire-achtige varkens geslacht veroorzaakt een wereldwijde pandemie bij de mens. 12 De pandemische virus (A (H1N1) pdm09) heeft sindsdienreassorted endemische varkens IAV stammen 13,14 en sommige van deze nieuw reassorted stammen werden terug overgebracht naar de mens. 15 De frequentie van gebeurtenissen hergroepering en de opkomst van nieuwe IAV stammen met mogelijke pandemie maakt actieve bewaking van circulerende IAV virussen in varkens noodzakelijk, met name bij de varkens-human interface.
De varkens-human interface is belangrijk voor bi-directionele interspecies transmissie van IAV. Mens op varkens transmissie optreedt in commerciële varkensproductie is verantwoordelijk voor een groot aantal diversiteit IAV momenteel in varkens populatie aanwezig. Landbouwbeurzen zijn de grootste instellingen voor de mingling van mensen en varkens in de Verenigde Staten en staan bekend locaties voor de zoönotische overdracht van IAV. 15-21 In 2012, tijdens de uitbraak van een variant H3N2 IAV, 93% van de gevallen gemeld bijwonen een agrarische beurs in de dagen voorafgaand aan het begin van de ziekte. 15 Genomic analysevan virale isolaten van tentoonstelling varkens in vergelijking met menselijke isolaten bevestigd zoönotische transmissie. 21 Tentoonstelling varkens besmet met IAV vaak geen klinische symptomen van ziekte, 21-23 waaruit de behoefte aan directe diagnostische tests tonen.
Bemonstering van zichtbaar zieke varkens alleen zal niet succesvol IAV prevalentie identificeren varkens en kan niet worden ingeroepen om nieuwe stammen van IAV opkomende onder varkens te identificeren. Actieve bewaking is absoluut noodzakelijk voor de detectie van nieuwe stammen van IAV bij varkens en hun bedreiging voor zowel de varkens en de volksgezondheid te beoordelen. De meeste IAV bewakingsactiviteiten zijn vrijwillig en daarom minimaal ontwrichtend methoden nodig zijn. De drie belangrijkste ante mortem monstername procedures voor IAV infecteren varkens zijn: neusuitstrijkjes, orale vloeistoffen, en nasale doekjes. De huidige aanbevelingen voor het bemonsteren van individuele varkens te IAV lijst detecteren de insertie van synthetische vezel getipt doekjes in de neusgaten als de voorkeursmethodenasale secreties en epitheelcellen verzamelen. 24,25 Aangezien varkens kunnen proberen deze procedure een team van geschoold personeel moet handmatig of met een strik afhankelijk van de grootte van het dier te beperken varkens te voorkomen. 26 De beperking werkwijze is omslachtig voor personeel en belastend voor de varkens. Daarnaast zijn tentoonstelling varkens vaak betrokken bij meerdere wedstrijden op een beurs, zodat de waarneming van extra stress op een wedstrijd dierhouders bestand tegen de surveillance inspanningen kunnen maken.
Met waarschijnlijkheid van detectie IAV variërend 80-100% in iav besmette beslagen, orale vloeistoffen tot een populair alternatief voor nasale uitstrijkjes voor de moleculaire detectie van IAS op populaties van varkens. 27,28 Bovendien kan orale vloeistoffen een groter raam van verstrekken IAV detectie dan neusuitstrijkjes na eerste infectie. Echter IAV isolatie orale vloeistoffen problematisch slechts 50% van virusisolatie pogingen gevolg IAV-herstel. 29
Met behulp van nasale doekjes in plaats van neusuitstrijkjes tijdens IAV toezicht bij varkens overwint de hierboven beschreven beperkingen. Nasale doekjes niet het gebruik van een remmende strik en kan worden uitgevoerd zonder nadruk dieren of getuigen van de procedure. Minimale technische opleiding is nodig om de neus doekjes, die niet-veterinaire professionals, waaronder de Mexicaanse eigenaars toestaat te verzamelen, om het toezicht op de monsters te verzamelen. Nasale doekjes werden vroeger vergeleken neusswabs voor de detectie en isolatie van influenza A virus 30 en gedetailleerd protocol voor deze niet-invasieve bemonsteringsmethode wordt hieronder beschreven.
Verzamelen van monsters van varkens met behulp van polyester getipt neusuitstrijkjes is nuttig gebleken bij het uitvoeren van IAV surveillance; Het gebruik van de neuswat procedure belemmert surveillance inspanningen vanwege het vereiste gebruik van een strik beperking. Nasale doekjes vertegenwoordigen een verfijning van de huidige varkens bemonstering technieken om stress op mensen en varkens te minimaliseren tijdens de monstername. Hoewel de methode ontwikkeld en gevalideerd voor tentoonstelling varkens instellingen, …
The authors have nothing to disclose.
This work has been funded in part with federal funds from the Centers of Excellence for Influenza Research and Surveillance (CEIRS), National Institute of Allergy and Infectious Diseases, National Institutes of Health, Department of Health and Human Services, under Contract No. HHSN272201400006C.
BBL Brain Heart Infusion | Becton, Dickinson and Company | 211059 | |
Penicillin G Sodium Salt | MP Biomedicals, LLC | 021194537 | 1500 u/mg |
Streptomycin Sulfate | AMRESCO LLC | 0382 | |
Gentamicin Solution | Mediatech, Inc. | 30-005-CR | 50 mg/ml |
Amphotericin B Solution | Fisher | S 24 25 | 250 ug/ml |
Kanamycin Sulfate | Teknova | K2105 | 5000 ug/ml |
TPP Rapid Filtermax System | TPP Techno Plastic Products AG | 99150 | |
Nalgen Diagnostic Bottles | Thermo Scientific | 342002-9025 | HDPE with white PP closure |
Dermacea Gauze Sponge, 8 ply | Covidien | 441211 | 5.08 cm × 5.08 cm (2 in. × 2 in) |
Nitrile Exam Gloves | Saftey Choice | 19-170-010 (A-D) |