Bu subnormothermic sıcaklığında (21 ° C), insan karaciğer greft ex vivo makine perfüzyon için bir yöntem tarif eder.
There is currently a severe shortage of liver grafts available for transplantation. Novel organ preservation techniques are needed to expand the pool of donor livers. Machine perfusion of donor liver grafts is an alternative to traditional cold storage of livers and holds much promise as a modality to expand the donor organ pool. We have recently described the potential benefit of subnormothermic machine perfusion of human livers. Machine perfused livers showed improving function and restoration of tissue ATP levels. Additionally, machine perfusion of liver grafts at subnormothermic temperatures allows for objective assessment of the functionality and suitability of a liver for transplantation. In these ways a great many livers that were previously discarded due to their suboptimal quality can be rescued via the restorative effects of machine perfusion and utilized for transplantation. Here we describe this technique of subnormothermic machine perfusion in detail. Human liver grafts allocated for research are perfused via the hepatic artery and portal vein with an acellular oxygenated perfusate at 21 °C.
Karaciğer transplantasyonu onlarca son dönem karaciğer hastalığı muzdarip hastaların binlerce tek küratif tedavi yöntemidir. Başarılı bir şekilde nakletmenin, bu graft hızlı bozulmasını önlemek için gerekli olan alıcı implante zamanına kadar donörden temin edilir zaman karaciğer en iyi şekilde korunabildiği kolaylaştırmak. Karaciğer korunması için güncel standart 'statik soğuk hava "olarak adlandırılmaktadır: Karaciğer ve böylece karaciğer metabolizmasını azaltma ve iskemi zararlı etkileri yavaşlatan bir buz-soğuk muhafaza çözeltisi içinde soğutulur. Bu soğuk hava deposu tekniği başarılı transplantasyon için izin olmasına rağmen, böyle sıcak iskemi veya yağlanma gösterisi alt hasta tarafından zarar DCD organları gibi marjinal kalitede organları 1 çıktıları. Kanıt hızla genişleyen gövde alternatif koruma yöntemi olarak karaciğer greft bu ex vivo makine perfüzyon can potansiyel im varBu marjinal organların 2,3 için sonuçları kanıtlamak.
Karaciğer transplantasyonu, kendi başarısının kurbanı haline gelmiştir. Çok daha hasta mevcut karaciğerleri vardır daha nakli için sevk edilir ve her yıl binlerce ABD'de bekleme listesinde ölür. Donör karaciğer yetersizliği gerçekliği ve muhtaç alıcılar için optimal kalite karaciğer greft artan kullanımı göz önüne alındığında, yaygın implantasyon öncesi karaciğer greft ex vivo makine perfüzyon karaciğer transplantasyonu bir paradigma kayması sözünü tuttuğu tutulur. Son yıllarda 4-8 bu konuda araştırma ilgi belirgin bir artış olmuştur. Çeşitli Avrupa ve Kuzey Amerika merkezlerinde hipotermik makine perfüzyon fizyolojik sıcaklıklarda bir klinik giriş 8 ve normotermik makine perfüzyon son zamanlarda atılan insan karaciğerinin uygulanmış ve klinik kullanım yanı sıra 9 tercüme ediliyor yaptı.Sürekli optimizasyon Optimum perfüzyon 10-12 parametreleri tanımlar ise kapsamlı gelişme, çeşitli protokollerin gelişmesine yol açmıştır. Marjinal kaliteli greft kullanımı daha fazla son on 13 üzerinden 10 kat artmıştır. Karaciğer korunması için mevcut standart (statik soğuk depo) ile karşılaştırıldığında, ex vivo makine perfüzyon organı havuzu çok ihtiyaç duyulan genişleme neden ve potansiyel transplantasyon sonrası komplikasyonların insidansı azalma hepsi çok sayıda potansiyel yararları sağlar. Özellikle şu anda naklinden sonra optimal kalite karaciğer greft veba safra komplikasyonlar önemli bir konu 14-18 kalır.
Subnormothermic koşullarda Makine perfüzyon bir zaman penceresi nakli 19 uygunluğuyla objektif greft fonksiyonunu değerlendirmek için sağlar. Karaciğer, bir ex vivo devrede perfüze edilirken hem perfüzyon birnd perfüzyon sırasında üretilen safra, organ fonksiyon belirteçlerinin ölçümü için numune alınabilir. Bu şekilde mevcut kriterler altında nakli için atılır karaciğerleri objektif nakli için uygunluk olarak değerlendirilebilir 'ciddi tehlikeye'. Bu birçok organı transplantasyon için kullanılması için Canlılık değerlendirme potansiyel sağlar. Makine perfüzyon bir eşit güçlü yarar onarım ve sıcak / soğuk iskemi zarar görmüş karaciğer gelişmedir. ATP sıcak ve soğuk iskemi sonrasında sırasında çok hızlı tükendiği ve önceki karaciğer 20 implantasyonu makine perfüzyon bir dönemde repleted edilebilir. Karaciğer, enerji mağazaları ve metabolik devlet doldurulan, ön şartlandırılmış ve alıcı implantasyon sonrası reperfüzyon hasarı zararlı etkileri daha hazırlıklı.
Bu çalışma, insan karaciğer graf ex vivo makine perfüzyon için bir yöntem tarif ederteknik ve ex vivo makine perfüzyon yararlı etkileri hem çalışmak isteyen araştırmacılar için faydalı olacaktır laboratuvarda, ts. Biz transplantasyon için reddedildi ve ardından araştırma amaçlı tahsis insan donör karaciğerinin faydalanmak.
Standart karaciğer tedarik tekniği beyin ölü donörlerden (DBD) veya başka bir yerde 20 daha detaylı olarak tarif dolaşım ölüm vericilerden (DCD), dolaşım tutuklanmasından sonra aort kros-klemp aşağıdaki karaciğer in situ arteriyel floş de içerir. Ayrıca, karaciğer buz vericinin karın boşluğunu doldurarak tedarik sırasında soğutulur. Gömme çözüm tercihleri Wisconsin veya Histidin-triptofan-ketoglutarat (HTK) çözeltisi Üniversitesi kullanarak alımlarda çoğunluğu ile, bölgeler arasında değişir. Portal ven bir ek arka-tablo floş artık kan arınma geliştirir. Karaciğerleri genellikle aort segmenti sur bırakarak tedarik edilirÇölyak gövde yuvarlama. safra kesesi safra aspire edilir, kazıma ve safra kanalı temizlendi. karaciğer buz soğuk koruma solüsyonu içeren steril torbalarda paketlenmiş ve belirlenen kutu veya soğutucularda taşınmaktadır. Temsilcisi sonuçları için sıcak ve soğuk iskemi süresi sırasıyla 60 dakika ve 12 saat, sınırlı olmalıdır. İnsan organları teslim sırasında bulaşıcı patojenler için rutin serolojik tarama rağmen, standart önlemler, insan organlarının elde edilen numuneler, ve herhangi bir atık ürünler alınmalıdır.
Protokol burada bir ticari olarak temin edilebilir karaciğer perfüzyon cihazı kullanılarak subnormothermic makine perfüzyon tarif etmektedir. Böyle bir cihazın kullanılması klinik ortamda ve araştırma grupları ve transplant merkezleri arasında farklı protokoller ve cihaz ayarları çapraz-doğrulama daha hızlı çeviri için izin verir.
Iskemi sırasında yaralanan ciğeri kurtarmak için bir girişim soğuk depolama bir süre sonra kullanılabilir bir SNMP sistemi geliştirdi. Subnormothermic makine perfüzyon geleneksel soğuk depolama, yanı sıra hipotermik ve normotermik makine perfüzyon yöntemlerine bir alternatif sunuyor. Çeşitli farklı sistemler var; tüm farklı avantaj ve dezavantajları 3,9,20 sunuyoruz. SNMP 21 metabolik oksijen gerektirdiği gibi, bir oksijen taşıyıcı olmadan perfüzyon sağlar ° C Perfüzat aktif oksijenasyonu tarafından karşılanmaktadır.
Subnormothermic koşullarda düşmesine karşın, metabolizma önemli ve besin açısından zengin perfüzyon solüsyonu desteği gerektirir. Bu tür Belzer makine perfüzyon çözeltisi gibi geleneksel perfüzyon için solüsyonlar, bileşim içinde, genel olarak en az ve Soğuk perfüzyon için tasarlanmıştır. Williams Orta E yıllardır bir hepatosit kültür ortamı olarak kullanılabilir, ve c içermemektedirSıcak ex vivo koşullar altında, özellikle de hücre fonksiyonunu desteklemek için evrensel omponents.
Makine perfüzyon sırasında yapılan ölçümler organ fonksiyonu olarak yansıtıcı olmaktadırlar. Böyle safra üretimi ve oksijen alımı gibi doğrudan gözlemlenebilir parametreler karaciğer nakli öncesi değerlendirmek için kullanılabilecek gerçek zamanlı ölçümleri vardır. Benzer şekilde, hücresel yaralanma ve iskemi (K +, laktat sürüm) belirteçleri perfüzyon çözeltisi doğrudan ölçülebilir ve organ fonksiyonları 20 göstergesi olabilir. Makine perfüzyon tekniği daha geliştirir ve daha yaygın klinik uygulama elde gibi, ex vivo fonksiyon ve klinik sonuç arasında doğru ilişki yapılabilir ve perfüzyon parametreleri nakli veya marjinal kaliteli ciğeri reddetmek için kararlar yardım yararlı olacaktır. Ayrıca, bakım analitik araçlar peşin noktası olarak, daha sofistike analizler doğrudan perfu makine boyunca kullanılabilir olacaksion 21.
Bu çalışmada biz karaciğerleri histoloji ve ALT salınımı ile yansıyan, karaciğer minimal yaralanma ile SNMP sisteminde desteklenen edilebileceğini göstermektedir. Karaciğerin fonksiyonel iyileşme en iyi karaciğer canlılığı için ilişkili olduğu gösterilmiştir ve hayvan modellerinde nakli başarı kuvvetle düşündüren olan ATP tarafından yansıtılır 22. Ex vivo ve karaciğer greftlerinin nakil öncesi kurtarma donör önemli bir genişleme sağlayacak Karaciğer havuzu, arz ve nakli donör karaciğerinin talep arasındaki farkı düzeltme.
The authors have nothing to disclose.
ABD Ulusal Sağlık Enstitüleri Finansman, CIMIT Projesi No. 12-1732 ve minnetle kabul edilmektedir Çocuklar için Shriners Hastaneler (R01EB008678, R01DK096075, R01DK084053, R00DK088962 ve F32 DK103500 verir). Biz minnetle bu işi desteklemek için New England Organ Bankası kabul etmek istiyorum.
Liver Assist perfusion device | Organ Assist B.V. | Liver Assist | |
Liver Assist disposable set | Organ Assist B.V. | Liver Assist disposable | |
Williams’ Medium E | Sigma | W1878–6x500ml | |
Insulin | Eli Lilly & Co | Humulin R U-100 | |
Penicillin/Streptomycin 5,000 U/ml | Life Technologies | 15070-063 | |
L-glutamine | Invitrogen | 25030-156 | |
Hydrocortisone | MGH pharmacy | 7750500 | |
Carbogen gas tank 95% O2/5% CO2 | Airgas | ZO2OX9522000043 | |
Specialty gas regulator | Airgas | Y11244D580 | |
Lactated Ringer’s solution | Baxter | 2B2324X | |
10% neutral buffered formalin | Fischer Scientific | 316-155 | |
Toothed Adson forceps | Roboz | RS-5234 | |
Debakey tissue forceps, 7.75”, 2.25 mm | Roboz | RS-7562 | |
Metzenbaum Scissors 7" Curved SureCut Tungsten | Roboz | RS-6965SC | |
Castroviejo Needle holder 5.5–7” | Fine Science Tools | 12565-14 | |
0 blackbraided silk sutures | Ethicon | SA66G | |
4-0 nylon suture, Nurolon RB1 | Ethicon | C554D | |
Blood gas analysis machine | Siemens | RapidPoint 500 | |
Balance scale | Cole Parmer | EW-10000-12 | |
Pressure display box | Medtronic | 66000 | |
Disposable pressure display sets | Medtronic | 61000 | |
Handheld thermocouple thermometer and probe | Cole Parmer | EW-91500-04 and EW-08516-55 | |
Acorn-tipped vessel cannula, 4 mm | Medtronic | 30005 | |
Irrigation set flush tubing | Hospira | 06543-01 | |
Mixing bowl, 4L | Cole Parmer | EW-07300-40 |