Атеросклероз является хроническим воспалительным процессом. Эта рукопись иллюстрирует простой в использовании Экс Vivo модель для изучения свежий сонной или бляшки коронарных артерий. Экс естественных модель позволяет для исследования потенциальных веществ на воспалительной среде в атеросклеротических поражений и результатов человека могут быть проанализированы с помощью различных методов.
Атеросклероз является хроническим воспалительным заболеванием сосудистой. Существуют различные методы для изучения воспалительный соединение в атеросклеротических поражений. Мышиные модели являются важным инструментом для расследования воспалительные процессы в атерогенеза, но эти модели страдают от фенотипических и функциональных различий между мышиных и иммунной системы человека. Экстракорпоральное сотовые эксперименты используются для специально оценить, зависящего от типа изменения в клетках, вызванные веществом интерес, но культура зависит от вариации и неспособность анализировать влияние специфических молекул в контексте воспалительного соединения в атеросклеротических поражений ограничить влияние результатов. Кроме того, измерения уровней интерес молекулы в крови человека помогает для дальнейшего расследования его клиническое значение, но это представляет системную, а не местное воспаление. Таким образом, мы здесь описываем модель доска культуры для изучения человеческого атеросклеротического поражения биологиюэкс естественных. Короче говоря, свежие бляшки получаются из пациентов, перенесших эндартерэктомия или аортокоронарное шунтирование и хранится в RPMI среде на льду до использования. Образцы нарезают на мелкие кусочки, после чего случайным распределением в 48-луночный планшет, содержащий среду RPMI в дополнение к интерес вещества, такие как цитокины или хемокины отдельности или в комбинации для определенных периодов времени. После инкубации налета части могут быть заморожены шок для выделения мРНК, заливали в парафин или октября для окрашивания иммуногистохимии или разбили и лизируют для вестерн-блоттинга. Кроме того, клетки могут быть выделены из бляшки для анализа проточной цитометрии. Кроме того, супернатанты могут быть собраны для измерения белка по ELISA. В заключение представлены экс естественных модель открывает возможность для дальнейшего изучения воспалительный поврежденной биологии, которая может привести к идентификации механизмов роман заболеваний и терапевтических целей.
Атеросклероз как хроническое воспалительное заболевание является одним из основных причин смерти в промышленно развитых странах 1-2. Осложнения атеросклероза, особенно острых коронарных синдромов, были связаны с разрывом уязвимых поражений, в результате чего Атеротромбоз и окклюзии сосудов 3. Врожденного и адаптивного иммунитета видимому, участвуют во всех этапах атерогенеза 2,4-5. Несмотря на значительный прогресс был достигнут в лечении инфаркта миокарда, эффективной профилактики атеросклероза и неблагоприятных сердечно-сосудистых событий по-прежнему нерешенными. Таким образом, изучение поврежденной биологию имеет важное значение для увеличения нашего знания о патофизиологии атеросклероза и позволить идентификацию новых терапевтических целей и разработке новых видов лечения.
Во многих случаях, мышиные модели используются для изучения патофизиологии конкретных заболеваний. Однако, изучая атеросклероза с помощью модели мыши является АККОmpanied несколькими ограничениями: (1) Как правило, атеросклеротические мыши получают с высоким содержанием холестерина. Уровни холестерина в этих моделях не может сравниться с теми, у пациентов с повышенным уровнем холестерина в сыворотке крови 6. (2) Есть существенные различия между мышиных и иммунной системы человека; Таким образом, Foxp3 является специфическим маркером мышиных регуляторных Т-клеток, тогда как человеческий Foxp3 выражение в человеческих Т-клеток не обязательно придавать фенотип регулирующую 7. Кроме того, парадигма Th1/Th2, как это определено в организме человека не полностью перенести в мышиных Т-клеток. (3) количество маркеров, которые используются для идентификации мышиных моноцитов и макрофагов, такие как F4/80 и маркеров классической (M1) по сравнению с альтернативной (M2) картины активации не существует в миелоидных клетках человека 8. (4) экспрессии генов мышиных и человеческих моноцитов периферической крови было обнаружено, что существенно отличается 9.
Таким образом, в целях повышения нашего пониманияхронические воспалительные процессы в человеческом атеросклероза, мы должны сделать использование моделей, работающих с тканями человека, крови или клеток. Здесь мы описываем модель человеческой культуре доска ткани, что позволяет расследование потенциальных новых веществ в концепции человеческого воспалительного поврежденной биологии.
Здесь мы представим Экс Vivo модель культуры бляшек исследовать влияние потенциально соответствующих веществ на атеросклеротического поражения биологии. Основным преимуществом этого экс виво способа является возможность оценить влияние указанных веществ на воспалительных…
The authors have nothing to disclose.
Мы благодарим Надин Wambsganss за отличную техническую помощь. Эта работа была поддержана Немецкого исследовательского фонда (DFG) ER 682/2-1 и исследовательской стипендии от немецкого общества кардиологов к С. Эрбель, а также научно-исследовательской стипендии от Германской службы академических Гейдельберге к Л. Чжао.
Name of Reagent/Material | Company | Catalog Number | Comments |
RPMI medium | Gibco | 21875-091 | n/a |
FCS | Gibco | 10270-106 | n/a |
Penicillin-streptomycin | Sigma | P-4458 | n/a |
15 ml tube | Sarstedt | 62,554,502 | n/a |
culture dish (60mm) | Orange Scientific | 5550200 | n/a |
LPS | Sigma | L4516 | n/a |
Cell Culture Plates 48-well | Greiner | 677102 | n/a |
Scalpel – single use | Feather | FEA200130011 | n/a |
TissueLyser | Precellys 24 Dual | Cat. No. EQ03119.200.RD010.0 | n/a |
RNeasy (Mini) Kit | Qiagen | Cat. No. 74104 | n/a |
Boehringer cDNA kit | Roche Diagnostics | Cat. No. 11483188001 | n/a |
Nanodrop Spectrophotometer | Thermo Fisher Scientific | n/a |