В этом видео мы покажем, как для записи электрической активности отдельных нейронов определены в целом подготовка мозга, который сохраняет сложные нейронные цепи. Мы используем трансгенных рыб, в котором гонадотропин-рилизинг-гормона (ГнРГ) нейронов генетически помечены флуоресцентным белком для идентификации в неповрежденной подготовки мозга.
Понимание физиологии клеток нейронных цепей, которые регулируют сложные поведения значительно повышается при использовании модели системы, в которых эта работа может быть выполнена в интактной подготовка мозга, где нервной системы ЦНС остается неизменным. Мы используем трансгенных рыб, в котором гонадотропин-рилизинг-гормона (ГнРГ) нейронов генетически помечены зеленым флуоресцентным белком для идентификации в неповрежденном мозге. Рыбы имеют несколько популяций ГнРГ нейронов, и их функции зависят от их расположения в мозге и ГнРГ ген, который они выражают 1. Мы сосредоточили наши демонстрации на GnRH3 нейронов, расположенных в терминале нервов (TN), связанные с использованием обонятельных луковиц интактном мозге трансгенных рыб оризии (рис. 1В и С). Исследования показывают, что оризии TN-GnRH3 нейроны нейромодуляторных, действующего в качестве передатчика информации из внешней среды в центральной нервной системе; тЭй, не играют непосредственную роль в регуляции гипофизарно-половая функция, как это делают известные нейронов гипоталамуса GnRH1 2, 3. тоником модель спонтанной стрельбы потенциал действия TN-GnRH3 нейронов является внутренним свойством 4-6, частота которой модулируется визуальные сигналы от сородичей 2 и нейропептид kisspeptin 1 5. В этом видео, мы используем устойчивую линию трансгенных оризии в которых TN-GnRH3 нейроны экспрессируют трансген, содержащий промотор области Gnrh3 связана с расширенной зеленого флуоресцентного белка 7, чтобы показать вам, как определить нейроны и следить за их электрической активности всего головного мозга подготовка 6.
ГнРГ 3: GFP трансгенные рыбы обеспечивают уникальные модели для изучения нейрофизиологических механизмов, лежащих в основе нейронных интеграции и регулирования в центральный контроль поведения, которые прямо или косвенно участвуют в 3 воспроизводства, 8-10. Одним из существен?…
The authors have nothing to disclose.
Мы благодарим доктора Мэн-Чин Лин и г-жа Юань Дун за техническую помощь. Эта работа была поддержана грантом Национального института здоровья HD053767 (предоставление субконтрактов NLW), а также за счет средств кафедры физиологии и канцелярии вице-канцлера по научной работе Калифорнийского университета в Лос-Анджелесе (NLW).
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Microscope | Olympus | BX50W (Upright) | |
Amplifier | Axon Instruments | Axoclamp 200B | |
A-D converter | Computer Interference Corp. | Digidata ITC-18 | |
Cooled CCD camera | PCO Computer Optics | Sensicam | |
Xenon lamp | Sutter Instruments Co. | ||
GFP filter set | Chroma Technologies | ||
Imaging Software | Intelligent Imaging Innovations | Slidebook software | |
Electrophysiology Data Acquisition Software | Axon Instruments | Axograph software | |
Electrophysiology Data Acquisition Software | AD Instruments Inc. | PowerLab | |
Headstage for electrophysiology | Axon Instruments | CV 203BU | |
Micromanipulator | Sutter Instrument Co | MP-285 | |
Recording Chamber Platform | Warner Instrument Corp. | P1 | |
Recording Chamber | Warner Instrument Corp. | RC-26G | |
Electrode Puller | Sutter instruments | P87 | |
Filament for electrode puller | Sutter Instruments | FB330B | 3.0 mm wide trough filament |
1.5 mm glass capillaries | World Precision Instruments | 1B150-4 | Microelectrode for recording |
Syringe | Becton Dickinson | 309586 | 3 ml |
MS-222 | Sigma | E10521-10G | Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate salt |
Fish saline | mM: 134 NaCl; 2.9 KCl; 2.1 CaCl2; 1.2 MgCl2; 10 HEPES | ||
Electrode solution (loose-patch) | mM: 150 NaCl; 3.5 KCl; 2.5 CaCl2; 1.3 MgCl2; 10 HEPES; 10 glucose | ||
Electrode solution (whole-cell patch) | mM: 112.5 K-gluconate; NaCl; 17.5 KCl; 0.5 CaCl2; 1 MgCl2; 5 MgATP; 1 EGTA; 10 HEPES; 1 GTP; 0.1 leupeptin;10 phospho-creatine |