기본 Preneoplastic 유방 상피 세포의 시간 경과 영상은 유방암의 유전자 변형 마우스 모델에서 파생
Summary
시간 경과 영상은 특정 행동 매개 변수 독특한 유전 적 병변 사이에 상관 관계가 있는지 확인하기 위해 유방암 위험 유전자 변형 마우스 모델에서 파생 된 기본 preneoplastic 유방 상피 세포의 행동을 평가하는 데 사용됩니다.
Abstract
시간 경과 영상은 유방암의 여러 유전자 변형 마우스 모델에서 파생 된 배양 주요 preneoplastic 유방 상피 세포의 행동을 비교하는 데 사용할 수 있습니다. 예를 들어, 세포 분열 (세포 수명), apoptotic 세포 번호, 형태학의 변화의 진화, 그리고 식민지 형성의 메커니즘 사이의 시간은 정량 할 수 있으며, 특정 유전 병변을 가진 세포에 비교했다. 기본 유방 상피 세포 문화가 만져서 알 수있는 종양이없는 유방 땀샘에서 생성됩니다. 분비는 신중하게 인접 근육의 명확한 분리와 resected 있으며, 림프절이 제거되며, 풍부한 유방 상피 세포의 단일 셀 중지는 효소 분해 및 여과 뒤에 날카 유방 조직에 의해 생성됩니다. 단일 셀 중지는 라이브 세포 이미징을위한 보육 챔버 내에서 도금과 현미경 바로 아래에 배치됩니다. 각 w에서 4×4 구성에서 열 여섯 650 μm X 700 μm 분야6 잘 접시의 엘자은 5 일 동안 매 15 분 이미징 있습니다. 시간 경과 이미지는 직접 처음 24 세포를 도금 시간 (집계 대 세포 증식), apoptosis의 입사 및 형태학의 변경 사항을 단계적으로 내 세포 식민지 형성의 메커니즘과 주파수를 포함 할 수있다 세포 행동을 측정하는 검사입니다. 단일 셀 추적은 개별 셀 수명과 세포 분열 패턴 조사 측정을위한 세포 운명지도를 생성하는 데 사용됩니다. 양적 데이터는 통계적으로 특정 유전 병변과 상관 행동에 상당한 차이를 평가하기 위해 분석하고 있습니다.
Introduction
유전 공학 마우스 모델은 공부하고 다른 유전자 병변이 유방암을 개발의 위험에 기여하는 방법을 이해하는 도구입니다. 예를 들어, 유전자 변형 마우스가 게재 한 광고 세 가지 요소의 조합 : 전체 길이 유방암 암 1, 초기 발병 (Brca1) 유방 상피 세포에서 유전자, 종양 단백질 p53의 (Tp53) 세균 라인 haploinsufficiency, 그리고 상피 유방의 손실 셀은 목표 상향 조절 에스트로겐 수용체 알파 Brca1 floxed (F) 11/f11/Mouse 유방 종양 바이러스 (MMTV) -Cre/p53 + / -/tetracycline-operator (의 100 %에서 유방암의 개발에 (시대) 식 결과 tet 조합) -ER/MMTV-reverse 테트라 사이클린 transactivator (Brca1 f11/f11/MMTV-Cre/p53에서보고 된 낮은 비율 + /에 비해 세 12 개월로 rtTA 쥐 – 시대없이 마우스 이상 표현 (~ 50 – 60 %)와 Tp53 haploinsuf없이 Brca1 f11/f11/MMTV-Cre 마우스ficiency (<5 %) 1.
preneoplastic 기본 유방 상피 세포의 행동의 동적 시간 경과 영상 적은 쉽게 정적 조직 섹션에 부탁드립니다 셀 동작의 차이를 보여줍니다. 증식과 분화에 변경이 인간의 BRCA1 변이 캐리어의 기본 유방 세포에서 관찰됩니다. 단일 셀 정상적인에서 기본 유방 상피 세포의 중지 및 유전 공학 마우스의 2 제작이 resected 유선 조직의 효소 disassociation을 통해 생성됩니다. 3 시간 경과 이미지는 셀 식민지의 모양과 상피 – 중간 엽 전이 (EMT) 및 apoptosis를 포함한 세포의 형태학의 변화의 입사 메커니즘 및 타이밍을 평가하기 위해 볼 수 있습니다. 세포 운명지도의 생성은 세포 분열 (세포 수명) 및 세포 분열의 패턴 결정 사이의 시간 길이의 정량화는 단일 셀 추적의 사용에 의해 촉진된다. Timm의 추적 도구 (TTT)는 단일 셀의 운명지도를 생성하는 데 사용 공개적으로 사용 가능한 소프트웨어입니다. 세포 운명의 메커니즘을 elucidating에서의 유틸리티는 정상적인 조혈 줄기 세포 개발 6-9 뉴런의 생성을 조사 4,5 설립되었습니다. 10
Protocol
Representative Results
Discussion
중요 단계
그것은 유방 땀샘은 유방 상피 세포의 행동에 연령 관련 변화에 대한 제어 할 수있는 같은 시대의 마우스에서 수확되어 있는지 확인하는 것이 중요합니다. 세포를 도금 할 때, 셀의 동일한 번호가 모든 실험에 대한 각각의 우물에 도금해야합니다. 문화가 가능한 직렬 이미지를 통해 여러 개별 셀을 따르도록하고 너무 빨리 합류가되지 않도록 도금 할 때 세포는 상대?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
저자는 라이브 셀 이미징에 자신의 소개를 위해 기술 지원 및 마이클 Rieger에 Bofan 우와 기독교 Raithel 감사하고 싶습니다. NCI, NIH RO1CA112176 (PAF), NCI, NIH의 지원. R01CA89041-10S1 (PAF), Deutscher Akademischer Austaush Dienst EV A/09/72227 참조. 316 (REN), 국방부 W81XWH-11-1-0074 (REN), 교육 과학 기술부 (R31-10069)의 지원을받는 한국의 국립 연구 재단을 통해 WCU (세계 클래스 대학) 프로그램 (PAF ), NIH IG20 RR025828-01 (설치류 장벽 시설 장비), 그리고 NIH NCI 5P30CA051008 (현미경 및 이미징 및 동물 공유 자원).
Materials
| Name of Reagent | Company | Catalog Number | Comments |
| EpiCult-B Basal Medium Mouse | StemCell Technologies | 05610 | |
| EpiCult-B Proliferation Supplements Mouse | StemCell Technologies | 05612 | |
| recombinant human Epidermal Growth Factor (rhEGF) | StemCell Technologies | 02633 | |
| Collagenase/Hyaluronidase | StemCell Technologies | 07912 | |
| Disposable Scapels | Feather | 2975#10 | |
| Hanks’ Balanced Salt Solution | StemCell Technologies | 37150 | |
| Ammonium Chloride | StemCell Technologies | 07800 | |
| Tryspin-EDTA | StemCell Technologies | 07901 | |
| Dispase | StemCell Technologies | 07913 | |
| DNase I | StemCell Technologies | 07900 | |
| 40 μm cell strainer | StemCell Technologies | 27305 | |
| FBS | StemCell Technologies | 06100 | |
| PenStrep | Gibco | 15140 |
References
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