Este artigo descreve um método para a visualização de artérias cerebrais de rato através de uma janela craniana via craniectomia temporal, a fim de visualizar partes proximais da artéria cerebral média (<strong> Figura 1</strong>). Este método versátil, pode ser combinada com várias técnicas de administração de fármacos para medir a reactividade da artéria cerebral<em> In vivo</em>.
Criação de uma janela craniana é um método que permite a visualização directa das estruturas sobre a superfície cortical do cérebro 1-3. Esta técnica pode ser realizada em diversos locais do cérebro de rato que se sobrepõem, mas é mais facilmente realizado através da criação de uma craniectomia sobre os ossos de fácil acesso frontal ou parietal. Mais frequentemente, temos usado esta técnica, em combinação com o modelo de oclusão endotelina-1 na artéria cerebral média de AVC isquémico para quantificar as alterações no diâmetro dos vasos da artéria cerebral média, que ocorrem com a injecção de endotelina-1 para o parênquima cerebral adjacente ao MCA proximal 4, 5. A fim de visualizar a porção proximal da MCA, durante endotelina -1 induzida MCAO, usamos uma técnica para criar uma janela craniana no osso temporal na face lateral do crânio de rato (Figura 1). Artérias cerebrais pode ser visualizada quer com a dura intacta ou com a dura-máter e incisa RetraCTED. Mais comumente, deixamos a dura intacta durante a visualização desde a endotelina-1 induzida por MCAO envolve a entrega do péptido vasoconstritor para o parênquima cerebral. Isto evita a necessidade de incisão na dura directamente sobre os vasos visualizado para a entrega da droga. Este protocolo irá descrever como criar uma janela craniana para visualizar artérias cerebrais de uma forma faseada, bem como a forma de evitar muitas das armadilhas potenciais referentes a este método.
Em resumo, esta técnica de preparação de janela craniana é muito versátil uma vez que podem ser alterados para satisfazer as necessidades das várias experiências com pequenas modificações, 4, 5. Por exemplo, conseguimos monitorado o fluxo sanguíneo cerebral em ramos específicos MCA usando a dopplerfluxometria a laser para se concentrar diretamente em uma artéria cerebral visualizado através de uma janela de crânio (Meca AP 2009 e 2011). Além disso, uma preparação semelhante com a incisão dur…
The authors have nothing to disclose.
Este trabalho foi financiado por doações do American Heart Association Maior filial Sudeste (09GRNT2060421), a Associação Médica Americana, e da Universidade da Flórida Clínica e Translacional Science Institute. Adam Meca é um NIH / NINDS, companheiro NRSA predoctoral (F30 NS-060335). Robert Regenhardt recebeu apoio comunhão predoctoral da Universidade da Flórida Programa de Formação Multidisciplinar em Hipertensão (T32 HL-083810).
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
Inhalation anesthesia system | VetEquip Inc., Pleasanton, CA, USA | 901806 | |
Isoflurane anesthetic | Baxter Pharmaceutics, Deerfield, IL, USA | 1001936060 | |
Small animal stereotaxic system | David Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA | 900 | |
Non-rupture ear bars, rat | David Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA | 957 | |
Rat gas anesthesia head holder | David Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA | 1929 | |
BAT-12 microprobe thermometer | World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA | BAT-12 | |
T/PUMP, Thermal blanket | Gaymar Industries, Inc., Orchard Park, NY, USA | T/PUMP, TP600 | |
Metzenbaum Scissors | World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA | 501254 | |
Iris forceps | World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA | 15915 | |
Bulldog clamp retractors | World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA | 14119-G | |
10 μl syringe 26-gaugue | World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA | SGE010RNS | |
Bovie, high temperature cautery kit | World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA | 500392 | |
Rat tooth forceps 0.12 | Stotz | E1811 | |
Micromotor drill | Stoelting, Wood Dale, IL, USA | 51449 | |
0.8 mm round drill bur | Roboz Surgical Instrument Co., Inc., Gaithersburg, MD, USA | RS-6280C-1 | |
STORZ Bonn suturing forceps | Bausch and Lomb, Inc., Rochester, NY, USA | ||
Nylon Suture, size 3.0 | Oasis, Mettawa, IL, USA | MV-663 | |
Cotton swabs | Fisher Scientific, Pittsburg, PA, USA | 22-029-488 | |
Puralube eye ointment | Fisher Scientific, Pittsburg, PA, USA | NC0138063 | |
Electric hair clippers | Oster, Providence, RI, USA | 78005-301 | |
ET-1 diluted to 80 μM concentration in PBS | American Peptide, Sunnyvale, CA, USA | 88-1-10A | |
Chlorhexidine, 2% | Agrilabs, St. Joseph, MO, USA | 1040, Rev. 6-06, NAC No.: 10580322 | |
Surgical microscope | Seiler Instrument and Manufacturing, St. Louis, MO, USA | Evolution xR6 | |
Sony Handycam | Sony, Minato, Tokyo, Japan | HDR-SR12 | |
Fiber optic illuminator | TechniQuip Corp., Livermore, CA, USA | FO1–150 | |
VLC media Player | (Paris, France) | ||
Image J software | U.S. National Institutes of Health, Bethesda, MA, USA |