בידוד של לימפוציטים מעכבר גניטלי חוברות רירית
Summary
דרך יעילה לבודד את הלימפוציטים מדרכי מין עכבר מתוארת. שיטה זו מנצלת עיכול אנזים והפרדת השיפוע Percoll לאפשר בידוד יעיל. טכניקה זו היא גם להתאמה לשימוש במינים אחרים
Abstract
משטחים ריריים, כולל בשטחים במערכת העיכול, ואברי מין, ונשימה, מספקים פורטלים של כניסה לפתוגנים, כגון וירוסים וחיידקים 1. Mucosae גם אתרים אינדוקטיביים במארח לייצר חסינות מפני פתוגנים, כגון תיקוני Peyers עובר במעי ורקמות lymphoreticular אף הקשורים בדרך הנשימה. תכונה ייחודית זו מביאה חסינות רירית כשחקן חשוב מאוד במערכת ההגנה של המארח. מחקרים רבים שהתמקדו באתרי רירית מערכת עיכול ומערכת נשימה. עם זאת, יש כבר חקירה קטנה של אתרים ריריים רבייה. אברי המין בדרכי הרירית היא אתר הזיהום העיקרי למחלות המועברות במגע מיני (STD), כולל זיהומים חיידקיים ונגיפיים. מחלות מין הן האחד האתגרים הבריאותיים הקריטיים ביותר העומד בפני עולם כיום. מרכז לבקרת מחלות ומניעתן מעריך כי יש 19,000,000 מדבקת בכל שנה חדשה בארצות הברית. STDs עולה למערכת הבריאות בארה"ב 17 מליארד דולרים בכל שנה 2, ואנשים עוד יותר בעלות השלכות בריאותיות מיידיות וחיים ארוכים. על מנת להתמודד עם אתגר זה, הבנה טובה יותר של חסינות רירית רבייה יש צורך והבידוד לימפוציטים הוא מרכיב חיוני של לימודים אלה. כאן, אנו מציגים שיטת reproducibly לבודד ימפוציטים משטחי Murine מין נשי ללימודים אימונולוגיים כי ניתן לשנות להסתגלות למינים אחרים. השיטה המתוארת להלן מבוססת על עכבר אחד.
Protocol
Discussion
בפרוטוקול זה, הוא הראה כיצד להתכונן לימפוציטים משטחי עכבר אברי מין והוא שולט בקלות. הנקודה הקריטית ביותר של תהליך זה היא לשמור על כדאיויות תא על ידי שמירה על התאים על קרח. תשואת התא משיטה זו תלויה בטכניקה, מיומנות טיפול, מצב המדבק של העכבר (נאיבי או יום אחרי הדבקה), פתוג…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
אנו רוצים להודות לNIH למימון מענקי R01-AI026328 (קאק) וR01-AI079004 (קאק).
Materials
| Name | Company | Catalogue number | |
| Collagenase | Sigma Life Sciences | C2139-1G | |
| Percoll | GE Healthcare Bio-Sciences | 17-0891-01 | |
| RPMI1640 | Gibco by Life Technologies | 11875 |
References
- M, . The impact of perinatal immune development on mucosal homeostasis and chronic inflammation. Nat. Rev Immunol. 12, 9-23 (2011).
- Centers for Disease Control and Prevention. . 2010 Sexually Transmitted Diseases Surveillance. , (2010).
- Jain, S., Patrick, A. J., Rosenthal, K. L. Multiple tandem copies of conserved gp41 epitopes incorporated in gag virus-like particles elicit systemic and mucosal antibodies in an optimized heterologous vector delivery regimen. Vaccine. 28, 7070-7080 (2010).
- Tang, V. A., Rosenthal, K. L. Intravaginal infection with herpes simplex virus type-2 (HSV-2) generates a functional effector memory T cell population that persists in the murine genital tract. J. Reprod. Immunol. 87, 39-44 (2010).
- Gillgrass, A. E., Tang, V. A., Towarnicki, K. M., Rosenthal, K. L., Kaushic, C. Protection against genital herpes infection in mice immunized under different hormonal conditions correlates with induction of vagina-associated lymphoid tissue. J. Virol. 79, 3117-3126 (2005).
- Sajic, D., Patrick, A. J., Rosenthal, K. L. Mucosal delivery of CpG oligodeoxynucleotides expands functional dendritic cells and macrophages in the vagina. Immunology. 114, 213-224 (2005).
- Jiang, J. Q., Patrick, A., Moss, R. B., Rosenthal, K. L. CD8+ T-cell-mediated cross-clade protection in the genital tract following intranasal immunization with inactivated human immunodeficiency virus antigen plus CpG oligodeoxynucleotides. J. Virol. 79, 393-400 (2005).
- Gill, N., Chenoweth, M. J., Verdu, E. F., Ashkar, A. A. NK cells require type I IFN receptor for antiviral responses during genital HSV-2 infection. Cell Immunol. 269, 29-37 (2011).
- Thatte, A., DeWitte-Orr, S. J., Lichty, B., Mossman, K. L., Ashkar, A. A. A critical role for IL-15 in TLR-mediated innate antiviral immunity against genital HSV-2 infection. Immunol. Cell Biol. 89, 663-669 (2011).
- Kwant-Mitchell, A., Ashkar, A. A., Rosenthal, K. L. Mucosal innate and adaptive immune responses against herpes simplex virus type 2 in a humanized mouse model. J. Virol. 83, 10664-10676 (2009).
- Gallichan, W. S., Rosenthal, K. L. Effects of the estrous cycle on local humoral immune responses and protection of intranasally immunized female nice against herpes simplex virus type 2 infection in the genital tract. Virology. , 224-487 (1996).
