이 보고서에서, 우리는 주요 타고난 및 적응 백혈구 인구를 열거하는 신선한 전체 혈액에서 수행 phenotyping 분석의 착색 및 분석 단계를 보여줍니다. 우리는 multicenter 임상 실험의 맥락에서이 절차를 수행하기위한 고려 사항을 강조.
말초 혈 백혈구의 Cryopreservation 널리 임상 실험에 면역 반응 평가를위한 세포를 보존하기 위해 사용하고 면역 평가의 용이성 및 표준화를위한 많은 장점을 제공하지만,이 과정의 해로운 효과는 같은 과립 성 백혈구와 같은 일부 세포 집합, B 세포에 관찰 된 수 있습니다 , 1-3 및 수지상 세포. 신선한 백혈구를 시금하면 세포의 생체 상태에서의보다 정확한 사진을 제공하지만, 종종 큰 임상 시험의 맥락에서 수행 할 수 어렵습니다. 신선한 세포 assays은 시간이 오래 걸릴 경우, 자신의 응용 프로그램으로 인해 실험실 직원의 필요한 노동 시간에 비현실적 일 수 자원 봉사 약속과 시간대에 의존하고. 또한, 재판이 여러 센터에서 실시하는 경우, assays을 수행하기 위해 필요한 자원과 훈련 연구소는 임상 사이트에 충분한 가까이에 위치 할 수 없습니다. 이러한 문제를 해결하기 위해, 우리는 devel이예와 같은 assays보다 더 강력한 세포 유형 특정 정보를하였으며, 표현형과 말초 혈 내의 주요 백혈구 인구를 열거, Trucount 튜브 (산호세, CA Becton 디킨슨)와 함께 사용할 수있는 11 색 항체 염색법 패널을 oped 완전한 혈액 카운트 (CBC) 또는 몇 세포 유형에 얼룩 Trucount 관을위한 상용 가능한 패널 assays. 착색 절차는 간단합니다, 신선한 전체 혈액의 약 100 μl가 필요하고 가능한 표준 혈액 처리 연구소가 수행 할 수있게 약 45 분 정도 소요됩니다. 그것은 BD Trucount 튜브 기술 데이터 시트 (에서 적응 버전 2,010분의 8 ). 착색 항체 칵테일은 중앙 검정 실험실에서 대량으로 사전에 준비 사이트 처리 실험실로 배송 될 수 있습니다. 스테인드 튜브가 해결 될 수 있습니다및 다색의 유동 세포 계측법 분석을위한 중앙 분석 실험실에 배송을 위해 냉동. 이 착색 패널에서 생성 된 데이터는 개입과 관련하여 시간이 지남에 따라 백혈구 농도의 변화를 추적 할 쉽게 더 관심의 특정 세포 유형의 활성화 상태를 평가하기 위해 개발 될 수 사용할 수 있습니다. 이 보고서에서 우리는 신선한 전체 혈액 및 multicenter 임상 실험을 지원하는 중앙 검정 실험실에서 이러한 스테인드 샘플을 분석하는 단계에 착색을 수행 할 혈액 처리 연구실 기술자가 사용하는 절차를 보여줍니다. 비디오 정보는 HIV 백신 평가판 네트워크 (HVTN)에 임상 시험 혈액 추첨의 컨텍스트에서 수행되기 때문에 절차.
이 보고서에서 우리는 유동 세포 계측법에 의해 신선한 전체 혈액의 백혈구 인구를 열거위한 구슬 기반의 방법을 제시하고 중앙 샘플 분석 multicenter 임상 시험에서의 사용에 대한 매개 변수가 필요 다룹니다. 이 방법은 토대로 및 BD Trucount 프로토콜을 최적화 multicenter 임상 실험 환경에서의 신뢰성 사용할 수 있습니다. 착색 분석은 간단하다하고 가능한 혈액 처리 연구실 기술자가 수행 할 및 분석…
The authors have nothing to disclose.
우리는이 방법, 원고 및 비디오의 개발에서의 도움을 제시카 존스, 에리카 클락, 콘 스턴스 Ducar, 도나 스미스, 로이 루이스, 릴리 Apedaile, 조앤 Wiesner, 데빈 아담스, 코리 McBain와 스티븐 Voght 감사드립니다.
이 작품은 빌과 멜린다 게이츠 재단 CAVD 보조금 38,645 (MJM)와 건강 교부금의 국립 연구소 UM1 AI068618 및 AI069481 U01 (MJM)에 의해 지원되었다. EA-N. NIH 그랜트 T32 AI007140에서 지원됩니다. 우리는 그들의 관대 한 장비 기증을 위해 제임스 B. 펜들턴 자선 신탁 감사드립니다.
Reagent Name | Company | Catalogue number |
Trucount Absolute Counting Tubes | BD Biosciences | 340334 |
10X FACS Lysing Solution | BD Biosciences | 349202 |
Category B & Exempt Shipping System, Insulated | Saf-T-Pak | STP-320 |
CD45 AmCyan monoclonal antibody | BD Biosciences | 339192 |
CD3 FITC monoclonal antibody | BD Biosciences | 349201 |
CD8 PerCp-Cy 5.5 monoclonal antibody | BD Biosciences | 341051 |
CD4 Alexa Fluor 700 monoclonal antibody | BD Biosciences | 557922 |
HLA-DR ECD monoclonal antibody | Beckman Coulter | IM3636 |
CD14 v450 monoclonal antibody | BD Biosciences | 560349 |
CD19 PE monoclonal antibody | BD Biosciences | 555413 |
CD16 APC-H7 monoclonal antibody | BD Biosciences | 560195 |
CD56 PE-Cy7 monoclonal antibody | BD Biosciences | 335791 |
CD11c APC monoclonal antibody | BD Biosciences | 559877 |
CD123 PE-Cy5 monoclonal antibody | BD Biosciences | 551065 |