نحن هنا وصف رواية عالية المحتوى فحص الالتهاب الناجم كيميائيا يهدف إلى التعرف على المناعة تغييري bioactives. لقد نجحنا في الجمع بين المجهر الآلي مع العرف مخطوطات البرمجيات المتقدمة تمكين الكمي الآلي للاستجابة التهابية، فضلا عن مزيد من معالجة البيانات وتحليلها، والتعدين، والتخزين.
الزرد اليرقات قابلة خاصة إلى كل الحيوانات الصغيرة 1،2 شاشات جزيء نظرا لصغر حجمها والسهولة النسبية للتلاعب والمراقبة، فضلا عن حقيقة أن مركبات ببساطة أن تضاف إلى مياه الاستحمام ويمتص بسهولة عندما تدار في <حل DMSO 1٪. يرجع ذلك إلى وضوح بصري اليرقات الزرد، ومدى توافر خطوط المعدلة وراثيا التعبير عن البروتينات الفلورية في الكريات البيض، الزرد توفر ميزة فريدة من نوعها لرصد رد فعل حاد للالتهابات في الجسم الحي. وبناء على ذلك، والاستفادة من الزرد لارتفاع محتوى شاشات جزيء صغير يهدف إلى التعرف على المركبات المناعية تغييري مع إنتاجية عالية وقد اقترح 3-6، مما يشير إلى سيناريوهات الحث على سبيل المثال التهاب النكات المترجمة في الأنسجة الزعانف، والضرر ليزر موجهة إلى السطح من صفار البيض الأجنة (7) أو tailfin بتر 3،5،6. العيب الرئيسي من هذه الأساليب ولكن كانشرط تلاعب يرقة دليل للحث على جرح، وبالتالي منع الفرز الفائق الإنتاجية. القضاء مقدمة من الالتهاب الناجم كيميائيا (الذقن) 8 فحص هذه العقبات. منذ يلحق اصابة كيميائيا عدد الأجنة التي يمكن معالجتها في وقت واحد تكاد تكون غير محدودة. علاج مؤقت من يرقات اسماك الزرد مع كبريتات النحاس يستحث موت الخلايا بشكل انتقائي في خلايا الشعر لنظام الخط الجانبي والنتائج في تجنيد المحببة السريع إلى neuromasts الجرحى. يمكن اتباعها لاستجابة التهابية في الوقت الحقيقي باستخدام مركب المعدلة وراثيا cldnB :: GFP / lysC :: DsRED2 يرقات اسماك الزرد 6،9 تعبر عن ببروتين أخضر في الخلايا neuromast، فضلا عن وضع العلامات الحمراء بروتين فلوري المحببة.
من أجل وضع استراتيجية الفرز من شأنها أن تسمح على حد سواء تحليل محتوى عالية وعالية الإنتاجية، وعرض علينا التعامل مع السائل الروبوتية وميكر الآلية المشتركةoscopy مع برنامج نصي مخصص البرمجيات المتقدمة. هذا السيناريو يمكن القياس الكمي الآلي للاستجابة التهابية بتسجيله المنطقة التي تحتلها في المئة الكريات البيض فلوري الحمراء ضمن المنطقة المحددة تجريبيا المحيطة المصابين neuromasts الفلورية الخضراء. وعلاوة على ذلك، ونحن الآلي ومعالجة البيانات، والمناولة، والتصور، وتخزين تقوم على العرف وضعت جميع MATLAB والبرامج النصية بيثون.
وباختصار، نحن نقدم الآلي HC / HT الشاشة التي تسمح اختبار المركبات الكيميائية من حيث تأثيرها على التقدم، وبدء أو قرار من استجابة التهابية المحببات. هذا البروتوكول يخدم نقطة انطلاق جيدة لمزيد من التحليل المتعمق لآليات المخدرات وطرق المشاركة في تزامن من استجابة المناعة الفطرية. في المستقبل، قد يساعد تحديد الآثار السامة لا يطاق أو بعيدا عن المرمى، في المراحل السابقة من اكتشاف المخدرات وبالتالي الحد من المخاطر والتكاليف الإجرائية لتطوير الأدوية.
The authors have nothing to disclose.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
Dimethyl sulphoxide | Carl Roth GmbH & Co KG | A994.2 | |
Copper(II) sulphate anhydrous | Carl Roth GmbH & Co KG | PO23.1 | |
FDA approved drug library | Enzo Life Sciences | BML-2841-0100 | |
384 microwell plate Non-binding, μClear | Greiner | 781906 | black |
Olympus scan^R | Olympus | ||
Zephyr Compact Liquid Handling Workstation | Caliper |