性杂交和重组后代的隔离是丝状真菌的重要研究工具,<em>禾谷镰刀菌</em>,必要的技术,成功地开展这些过程。
禾谷镰刀菌已成为一个模型系统开发和丝状真菌的致病性研究。 楼菌最容易产生子实体,称为子囊壳,胡萝卜琼脂。子囊壳含有大量的组织类型,在子囊发展的特定阶段产生。这些措施包括(按出场顺序)形成子囊缩写(上升到ascogenous菌丝),外墙,侧丝(无菌菌丝占据子囊中心,直到ASCI发展),子囊和子囊在ASCI 14。这些组织的发展,相隔约24小时,并一直在性发展12,8转录研究的基础上。哈伦等人 (2007年)的发展更深入的说明,包括每个阶段的照片。在这里,我们提出的方法,产生和收获同步LY发展子囊草坪时空的基因调控,发展和生理过程的研究。虽然这些方法是专门用于与楼菌 ,该技术可以用于其他各种真菌,规定可以培养诱导出菇,并有一定的发展同步。最近,我们已经适应了这个协议研究楼性发展verticillioides。虽然个别子囊必须手工采摘,在这个物种,因为发展中国家子囊壳的草坪,不能诱导,工作过程以及研究发展(Sikhakolli和步道,未发表)。
真菌子实体的最重要的功能是分散孢子。子囊菌门(子囊生产真菌),许多物种,射门从子囊孢子,由于代膨压力范围内的子囊,驾驶弹射孢子(和epiplasmic流体)通过在子囊尖端2,7孔。发展“孢子放电法”,这是我们使用的筛选过程中的突变导致我们强行子囊孢子放电的研究。在这里,我们提出这个实验的细节。
小麦赤霉病是homothallic,从而可以在兼容的合作伙伴的情况下形成的子实体。同宗配合的优势是隧道是没有必要的,以产生特定性状的后代,促进性发展的研究方面在这个物种14,7合子。然而,异宗株已产生可用于穿越5,9。它也可能跨越homothallic株,获得1株1中的几个基因的突变。这是通过一个培养皿coinoculating 2株。沿交汇点,子囊多数将重组(父株突变不抑制杂交)。子囊壳的年龄,他们散发出子囊集体,而不是强行履行。所产生的孢子渗出物(称为一个cirrhus)位于子囊尖和恢复单个孢子可以很容易地删除。在这里,我们提出了一个协议,以方便识别重组子囊壳和重组后代恢复。
小麦赤霉病是特别适合子实体发展的研究,由于良好注释的基因组(可用性mips.helmholtz-muenchen.de/genre/proj/FGDB / 4),Affymetrix公司的可用性基于芯片6。这有助于识别能力,为子囊孢子放电7,11,3重 要的基因。这里介绍的方法将允许研究人员关注的发展阶段和功能的一组离散楼子实体的遗传分析禾谷 。方法也很容易适应相关的真菌可以诱导水果文化,可以作为一个发展中的各种其他真菌子实体类型的标准。
能力评估孢子发射型孢子小,很难看到的物种,如可以是微妙<eM> F。禾谷。一个干净的幻灯片孢子的收集有利于双方的视觉评估和定量评估,为孢子可以洗掉的幻灯片和定量分析。一些真菌物种产生一种粘液,围绕着他们的孢子,孢子不能被冲洗掉,但必须计算显微镜,他们留在幻灯片上。我们已经发现这个菌核病是真实的。
The authors have nothing to disclose.
这项工作是从国家科学基金会(断路器-0923794金融时报)的赠款支持。
Name of the reagent | Company | Catalogue number |
Fusarium graminearum strain PH-1 | Fungal Genetics Stock Center, Kansas | FGSC 9075 |
Tween 60 | Sigma-Aldrich | P1629 |
Czapek’s Dox Agar | Difco, Becton Dickinson | 233810 |
Potassium Chlorate | Sigma-Aldrich | 255572 |