Summary

Преодоление невосприимчивости в экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит (ЭАЭ) штаммов мыши по усыновлению и передачи Антигенная вызов

Published: April 09, 2012
doi:

Summary

Некоторые штаммы мыши способны противостоять индукции экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит (ЭАЭ) с белком миелина основной. Описанный здесь простой протокол иммунизации, что меняет и вызывает невосприимчивость паралитического заболевания в нескольких типичных EAE стойкие загрязнения мыши.

Abstract

Экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит (ЭАЭ) представляет собой воспалительное заболевание центральной нервной системы (ЦНС) и был использован в качестве животной модели для изучения человеческих болезней демиелинизирующей, рассеянный склероз (РС). EAE характеризуется патологической инфильтрации мононуклеарных клеток в центральной нервной системе и клиническими проявлениями паралитического заболевания. Как и в MS, EAE также находится под генетическим контролем в том, что некоторые штаммы мыши восприимчивы к болезни индукции, а другие являются устойчивыми. Как правило, C57BL / 6 (H-2, б) мышей, иммунизированных белком миелина основной (МБП) не развиваются паралитические знаков. Это отсутствие реакции, конечно, не из-за дефектов в обработке антигена или антигенов в MBP, как экспериментальный протокол, описанный здесь был использован, чтобы вызвать серьезный EAE в C57BL / 6, а также других известных штаммов мыши. Кроме того, encephalitogenic Т-клеток клонов из C57BL / 6 и BALB / C мышей реагирует на MBP был успехполностью изолирован и распространяются.

Экспериментальный протокол предполагает использование сотовой приемной системы денежных переводов, в которых MBP-загрунтовать (200 мкг / мышь) C57BL / 6 донорских клеток лимфатических узлов выделяют и культивируют в течение пяти дней с антигеном расширить пул MBP конкретных Т-клеток. В конце периода культивирования, 50 млн. жизнеспособных клеток передаются в наивных сингенных получателям через хвостовую вену. Получатель мышей таким образом рассматриваться как правило, не развиваются EAE, тем самым подтвердив их устойчивый статус, и они могут оставаться нормальной на неопределенный срок. Через десять дней после передачи ячейки, получатель мышей заражали Фрейнда адъювантной (CFA), эмульгированных MBP в четырех местах в бока. Тяжелые EAE начинает развиваться у этих мышей от десяти до четырнадцати дней после заражения. Результаты показали, что индукция болезнь антигенной конкретные задачи, как, не относящимися к антигенам не вызывает клинических проявлений болезни. Примечательно, что титрования дозы антигена используется длявызов получателя мышах показали, что это может быть как 5 мкг / мышь. Кроме того, кинетические исследования о сроках антигенной проблемы показал, что задача, чтобы вызвать заболевание было эффективным, как уже 5 дней после заражения и антигенные тех пор, пока на 445 дней после антигенной проблемы. Эти данные убедительно указывают на участие "долгоживущих" Т клеточной популяции в поддержании невосприимчивость. Участие регуляторных Т-клеток (Tregs) в этой системе не определен.

Protocol

1. Подготовка CFA-эмульгированных антигена Растворите морскую свинку MBP (подготовлен в соответствии с методом Swanborg1 и хранится в лиофилизированной форме при 4 ° С) в фосфатный буферный раствор (PBS) в концентрации 2 мг / мл. Если синтезированных пептидов MBP (MBP 60-80, SHHAARTTHYGSLPQKSQR) 2…

Discussion

Исследования EAE у мышей часто используют neuroantigens, основного белка миелина (ОБМ), proteolipid белок (ПЛП) или миелин олигодендроцитов белка (МНГ). Более ранние исследования в основном используется MBP. ПЛП стимулирует сильные и последовательные ответы SJL мышей. Совсем недавно, MOG является общим neur…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

При частичной поддержке грантов от Национального института здоровья (R01 NS37253 и N01 NS055167) и Национальное общество рассеянного склероза (RG 3288-A6).

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number Comments
Guinea pig spinal cords Rockland Immuno-chemicals, Inc.
Gilbertsville, PA 19525
www.rockland-inc.com
GP-T065 frozen
Freund’s Adjuvant, complete H37Ra Difco Laboratories
Detroit, MI
231131
Multifit interchange-able syringe B-D
www.bd.com/us
512133
RPMI 1640 Mediatech Inc.
Manassas, VA
www.cellgro.com
10-040-CM
OVA Sigma-Aldrich
www.sigmaaldrich.com
A5503
Mice Jackson Laboratory
Bar Harbor, Maine
B6 mice: 0000664

References

  1. Swanborg, R. H., Sabato, G. D. Experimental allergic encephalomyelitis. Methods in Enzymology. 162, 413-421 (1988).
  2. Shaw, M. K., Kim, C., Hao, H. W., Chen, F., Tse, H. Y. Induction of myelin basic protein-specific experimental autoimmune encephalomyelitis in C57BL/6 mice: Mapping of T cell epitopes and T cell Vb gene segment usage. J. Neuroscience Research. 45, 690-699 (1996).
  3. McCarron, R., McFarlin, D. E. Adoptively transferred experimental autoimmune encephalomyelitis in SJL/J, PL/J, and (SJL/J x PL/J)F1 mice. Influence of I-A haplotypes on encephalitogenic epitope of myelin basic protein. J. Immunol. 141, 1143-1149 (1988).
  4. Shaw, M. K., Kim, C., Ho, K. -. L., Lisak, R. P., Tse, H. Y. A combination of adoptive transfer and antigenic challenge induces consistent murine experimental autoimmune encephalomyelitis in C57BL/6 mice and other reputed resistant strains. J. Neuroimmunol. 39, 139-150 (1993).
  5. Krishnamoorthy, G., Saxena, A., Mars, L. T., Domingues, H. S., Mentele, R., Ben-Nun, A., Lassmann, H., Dornmair, K., Kurschus, F. C., Liblau, R. S., Wekerle, H. Myelin-specific T cells also recognize neuronal autoantigen in a transgenic mouse model of multiple sclerosis. Nat. Med. 15, 626-632 (2009).
  6. Anderson, A. C., Reddy, J., Nazareno, R., Sobel, R. A., Nicholson, L. B., Kuchroo, V. K. IL-10 plays an important role in the homeostatic regulation of the autoreactive reperteroire in naïve mice. J. Immunol. 173, 828-834 (2004).
  7. Anderton, S. M. Treg and T-effector cells in autoimmune CNS inflammation: a delicate balance easily disturbed. Eur. J. Immunol. 40, 332-334 (2010).
  8. Arnon, R. Experimental allergic encephalomyelitis – susceptibility and suppression. Immunol. Rev. 55, 5 (1981).
  9. Billiau, A., Heremans, H., Vandekerckhove, F., Dijkmans, R., Sobis, H., Meulepas, E., Carton, H. Enhancement of experimental allergic encephalomyelitis in mice by antibodies against IFN-g. J. Immunol. 140, 1506-1510 (1988).
  10. Arbomson-Leeman, S., Alexander, J., Bronson, R., Corroll, J., Southwood, S., Dorf, M. Experimental autoimmune encephalomyelitis-resistant mice have highly encephalitogenic myelin basic protein (MBP)-specific T cell clones that recognize a MBP peptide with high affinity for MHC class II. J. Immunol. 154, 388-398 (1995).
  11. Reddy, J., Illes, Z., Zhang, X., Encinas, J., Nicholson, L., Sobel, R. A., Wucherpfennig, K. W., Kuchroo, V. K. Myelin proteolipid protein-specific CD4+CD25+ regulatory cells mediate genetic resistance to experimental autoimmune encephalomyelitis. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101, 15434-15439 (2004).
  12. Korn, T., Reddy, J., Gao, W., Bettelli, E., Awasthi, A., Petersen, T. R., Backstrom, B. T. Myelin- specific regulatory T cells accumulate in the CNS but fail to control autoimmune inflammation. Nature Med. 13, 423-431 (2007).
  13. Shaw, M. K., Li, J., Ho, P. P., Hao, H., Lisak, R. P., Tse, H. Y., Broglie, P. V. Induction of myelin basic protein-specific adoptive experimental autoimmune encephalomyelitis in C57BL/6 mice. Longevity of donor T cells and lack of disease relapses. Neuroimmunology Research Focus. , 175-191 (2007).

Play Video

Cite This Article
Shaw, M. K., Zhao, X., Tse, H. Y. Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge. J. Vis. Exp. (62), e3778, doi:10.3791/3778 (2012).

View Video