تصور من الأوعية التاجية أمر بالغ الأهمية لتعزيز فهمنا لأمراض القلب والأوعية الدموية. نحن هنا وصف طريقة لperfusing الأوعية الدموية التاجية الفئران مع ظليل للأشعة مطاط السيليكون (Microfil)، تحضيرا للالدقيقة المحسوبة التصوير (μCT) التصوير المقطعي.
تصور من الأوعية الدموية تزداد أهمية لفهم كثير من الحالات المرضية المختلفة. في حين أن العديد من التقنيات المتبعة لتصوير الأوعية الدموية، قليلة هي قادرة على تصور شبكة الأوعية الدموية ككل في حين تمتد إلى قرار يتضمن 1،2 السفن الصغيرة. بالإضافة إلى ذلك، العديد من تقنيات الصب الأوعية الدموية تدمير الأنسجة المحيطة بها، ومنع مزيد من التحليل للعينة 3-5. أسلوب واحد والتي تلتف حول هذه القضايا الصغيرة التصوير المقطعي (μCT). يمكن μCT التصوير تفحص بدقة <10 ميكرون، قادر على انتاج اعادة البناء 3D لشبكة الأوعية الدموية، ويترك الأنسجة السليمة للتحليل لاحقة (على سبيل المثال، الأنسجة وقياس الأشكال) 6-11. ومع ذلك، السفن التصوير بواسطة أساليب السابقين μCT فيفو يتطلب أن يكون ملء السفن مع مجمع ظليل للأشعة. على هذا النحو، تمثيل دقيق من الأوعية الدموية التي تنتجها التصوير μCT مرهونموثوق بها وكاملة ملء الأوعية. في هذا البروتوكول، وصفنا أسلوبا لملء الأوعية التاجية الماوس في التحضير لتصوير μCT.
وجود اثنين من التقنيات السائد لملء الأوعية الدموية في الشريان التاجي: في الجسم الحي عن طريق نضح إقناء؛ إدخال القنية ورجعية من الشريان الأبهر (أو فرع قبالة قوس الأبهر) 12-14، أو المجراة سابقا عن طريق نظام نضح Langendorff 15-17. هنا نحن تصف في الشريان الأورطي فيفو طريقة إقناء؛ إدخال القنية التي تم تصميمها خصيصا لضمان ملء جميع السفن. نستخدم ظليل للأشعة منخفضة اللزوجة مركب يسمى Microfil التي يمكن أن يروي من خلال أصغر السفن لملء جميع الشعيرات الدموية، وكذلك كلا الجانبين الشرياني والوريدي في شبكة الأوعية الدموية. وperfused السفن مع العازلة باستخدام نظام نضح الضغط، وشغل بعد ذلك مع Microfil. للتأكد من أن Microfil يملأ المراكب الصغيرة أعلى مقاومة، ونحن ligate فروع كبيرة emanatinز من الشريان الأورطي، والذي يحول Microfil في الشرايين التاجية. تعبئة مرة واحدة كاملة، لمنع طبيعة مرونة من أنسجة القلب من الضغط Microfil من بعض السفن، ونحن ligate الوصول الرئيسية مخارج الأوعية الدموية فورا بعد ملء. ولذلك، تم تحسين تقنية لدينا ملء كاملة والاحتفاظ بها إلى أقصى حد من وكيل تعبئة، مما يتيح تصور للشبكة كاملة الأوعية الدموية التاجية – الشرايين، والشعيرات الدموية، والأوردة على حد سواء.
أنسجة القلب لديه الطلب مرتفع جدا الأيضية، ولذلك يحتاج الى امدادات ثابتة من المواد المغذية والأكسجين من الدم الذي ألقاه الأوعية الدموية التاجية. يمكن أن أمراض الأوعية التاجية، والتي تقلل وظيفة القلب بسبب تضيق وانسداد الأوعية، يؤدي إلى نقص الأكسجين ونقص تروية الأنسج…
The authors have nothing to disclose.
نشكر الدكتور كيلي ستيفنز للمحاكمات الأولى للبروتوكول، والدكتور مايكل سيمونز، والدكتور Hauch كيب، وأعضاء من كل من المختبرات من أجل مناقشة عامة.
هذا العمل هو الدعم من خلال المنح والمعاهد الوطنية للصحة HL087513 HL094374 P01.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
1 ml syringes | Becton Dickinson | BD-309602 | |
1/2cc insulin syringes with permanently attached 29G ½’ needles | Becton Dickinson | BD-309306 | |
2″ x 2″ Gauze pads | Med101store.com | SKU 2208 | |
24G ¾” Angiocath IV catheter | Becton Dickinson | BD-381112 | |
26G ½”gauge needles | Becton Dickinson | BD-305111 | |
Adenosine | Sigma | A9251 | 1g/L in PBS for Vasodilation Buffer (with Papaverine) |
Angled Graefe Forceps | Fine Science Tools | 11052-10 | |
Cotton-tipped applicators: 6″ non-sterile | Cardinal Health | C15055-006 | |
Curved Surgical Scissors | Fine Science Tools | 14085-09 | |
Dissecting stereoscope and light source | Nikon | NA | NA |
Dissecting Tray, 11.5 x 7.5 inches | Cole-Parmer | YO-10915-12 | Filled with tar for pinning down the mouse |
Fine Curved Forceps | Aesculap | FD281R | Need two |
Heparin, 5000 U/ml stock | APP Pharmaceuticals LLC | NDC 63323-047-10 | 1:100 dilution in water |
KCl | Fisher | P217 | Saturated solution in H2O |
Ketamin (Ketaset), 100 mg/ml stock | Fort Dodge, Overland Park, KS, USA | NDC 0856-2013-01 | Mixed as 130 mg/kg body weight, with Xylazine in 0.9% saline |
Microfil | Flow Tech | MV-122 (yellow). Other color options are also available. | Mix 1:1 by weight, with 10% by volume of curing agent. Prepare just before injection, and vortex to ensure it is well mixed |
Non-sterile Suture: 6-0, braided silk | Harvard Apparatus | 723287 | |
Papaverine | American Regent Inc. | NDC 0517-4010-01 | 4mg/L in PBS for Vasodilation Buffer (with Adenosine) |
Paraformaldehyde | Sigma | P6148 | Prepared as 4% solution |
Perfusion Apparatus | See figure 2 | ||
Spring Scissors | Fine Science Tools | 15018-10 | |
Xylazine (Anased), 20 mg/gl stock | Lloyd Labs | NADA #139-236 | Mixed as 8.8 mg/kg body weight, with Ketamin in 0.9% saline |