La investigación de la inflamación intestinal inducida por DSS en el modelo de la EII
Summary
Los modelos experimentales de enfermedad inflamatoria intestinal, nos han permitido examinar las respuestas del complejo inmune innata y adaptativa asociada con la patogénesis. El uso de puntuación histológico, la cuantificación de citoquinas pro-inflamatorias y la actividad mieloperoxidasa, se puede comenzar a evaluar las respuestas observadas en la enfermedad inflamatoria intestinal.
Abstract
La enfermedad inflamatoria intestinal (EII) engloba una serie de patologías intestinales, la más común de lo que son la colitis ulcerosa (CU) y enfermedad de Crohn (CD). UC y CD, cuando están presentes en el colon, generar un perfil similar de los síntomas que pueden incluir diarrea, sangrado rectal, dolor abdominal y pérdida de peso. 1 Aunque la patogenia de la EII aún se desconoce, se describe como una enfermedad multifactorial que involucra tanto componentes genéticos y ambientales. 2
Existen numerosos modelos animales y variables de inflamación del colon que se asemejan a varias características de la EII. Los modelos animales de colitis rango de las que surgen de forma espontánea en cepas susceptibles de ciertas especies a las que requiere la administración de concentraciones específicas de productos químicos que inducen a la colitis, tales como el dextrano sulfato sódico (DSS). Química inducida por los modelos de la inflamación intestinal son los modelos más utilizados y mejor descrito de la EII. Adminidemostración de DSS en el agua potable produce colitis aguda o crónica, dependiendo del protocolo de administración. 3 animales que recibieron la pérdida de peso DSS exposiciones y muestras de heces sueltas o diarrea, a veces con evidencia de sangrado rectal 4,5. A continuación, se describen los métodos por los cuales el desarrollo de la colitis y la respuesta inflamatoria resultante puede ser caracterizada tras la administración de DSS. Estos métodos incluyen el análisis histológico de hematoxilina / eosina secciones de colon teñido, la medición de citoquinas pro-inflamatorias, y la determinación de mieloperoxidasa (MPO) de actividad, que puede ser utilizado como un marcador de la inflamación 6.
En la medida de la respuesta inflamatoria en el estado de la enfermedad puede ser evaluada por la presencia de síntomas clínicos o por la alteración de la histología en el tejido mucoso. Daño histológico del colon se evalúa mediante el uso de un sistema de puntuación que considera la pérdida de la arquitectura de las criptas, infiltración de células inflamatorias, musculares tabsceso hickening, el agotamiento de las células caliciformes, y la cripta. 7 cuantitativamente, los niveles de citoquinas pro-inflamatorias con propiedades inflamatorias agudas, como la interleucina (IL)-1β, IL-6 y factor de necrosis tumoral (TNF)-α, se puede determinar mediante los métodos convencionales de ELISA. Además, la actividad de MPO se puede medir mediante un ensayo colorimétrico y se utiliza como un índice de inflamación. 8
En la colitis experimental, gravedad de la enfermedad a menudo se correlaciona con un aumento en la actividad de MPO y mayores niveles de citoquinas pro-inflamatorias. La gravedad de la colitis y la inflamación asociada con el daño puede ser evaluada mediante el examen de consistencia de las heces y sangre, además de evaluar el estado histopatológico del intestino mediante hematoxilina / eosina secciones de tejido teñido de colon. Fragmentos de tejido del colon se puede utilizar para determinar la actividad de MPO y la producción de citoquinas. En conjunto, estas medidas se pueden utilizar para evaluar la respuesta inflamatoria intestinal enmodelos animales de colitis experimental.
Protocol
Discussion
DSS colitis es un modelo ampliamente utilizado químicamente inducida por la inflamación intestinal. En este modelo, los ratones se les da agua potable complementado con el DSS, el cual se cree que es tóxico para las células epiteliales del intestino y alterar la integridad de la barrera mucosa. 10 La administración de DSS induce una colitis aguda que se caracteriza por deposiciones sueltas, sangrado en heces, y la infiltración de granulocitos. 10 Durante la administración de DSS, colitis se …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabajo es apoyado por becas de los Institutos Canadienses de Investigación en Salud (CIHR) y enfermedad de Crohn y Colitis Foundation of Canada (CCFC).
Materials
| Name of reagent/equipment: | Company | Catalogue number | Comments |
| Eppendorf Safe-Lock Microcentrifuge Tube (2mL) | eppendorf | 0030 120.094 | |
| Biotek EL808 Absorbance plate reader | Biotek | EL808 | |
| Dextran sulphate sodium salt reagent grade (molecular weight 36,000-50,000 Da) | MP Biomedicals | 160110 | |
| Gen5 (software) | Biotek | Version 1.10.8 | |
| Hexadecyltrimethylammonium bromide (HTAB) | Sigma-Aldrich | H5882-100G | |
| Hydrogen peroxide, 30 wt.% solution in water | Sigma-Aldrich | 216763 | Store at 2-8°C |
| Microtest plate 96-well flat bottom | Sarstedt | 82.1581 | For single use only |
| o-Dianisidine | Sigma-Aldrich | D-3252 | Light sensitive. Store at 2-8°C |
| Potassium phosphate, dibasic | Caledon | 6620-1 | |
| Potassium phosphate, monobasic | EMD Chemicals | PX1565-1 | |
| Protease inhibitor cocktail | Sigma-Aldrich | P8340 | Store at -20°C |
| Triton X-100 | Sigma-Aldrich | T8787 | |
| Tungsten Carbide beads for Tissue Lyser II | QUIAGEN | 69997 |
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