Investigando inflamação intestinal em DSS-induzida Modelo de IBD
Summary
Modelos experimentais de doença inflamatória intestinal nos permitiram analisar a complexa inata e adaptativa respostas imunes associadas com a patogênese. Usando pontuação histológico, quantificação de citocinas pró-inflamatórias e atividade da mieloperoxidase, pode-se começar a avaliar essas respostas visto na doença inflamatória intestinal.
Abstract
Doença inflamatória intestinal (DII) engloba uma gama de patologias intestinais, o mais comum dos quais são a colite ulcerosa (UC) e Doença de Crohn (DC). Ambos UC e CD, quando presentes no cólon, gerar um perfil de sintomas similares que podem incluir sangramento, diarréia retal, dor abdominal e perda de peso. 1 Embora a patogênese da DII permanece desconhecida, é descrita como uma doença multifatorial que envolve tanto componentes genéticos e ambientais. 2
Existem inúmeros modelos animais e variável de inflamação do cólon que se assemelham a várias funcionalidades do IBD. Modelos animais de colite gama daqueles surge espontaneamente em estirpes sensíveis de certas espécies para aqueles que requerem a administração de concentrações específicas de colite indutores de produtos químicos, como dextran sulfato de sódio (DSS). Química induzida por modelos de inflamação intestinal são os modelos mais usados e melhor descrito de IBD. Adminidemonstração de DSS na água potável produz colite aguda ou crônica, dependendo do protocolo de administração. 3 Animais dada a perda de peso DSS exposição e sinais de fezes moles ou diarréia, às vezes com evidências de sangramento retal 4,5. Aqui, descrevemos os métodos pelos quais colite desenvolvimento ea resposta inflamatória pode ser caracterizado após a administração de DSS. Estes métodos incluem a análise histológica de hematoxilina / eosina seções cólon manchado, medição de citocinas pró-inflamatórias, e determinação de mieloperoxidase (MPO), atividade que pode ser usado como um marcador da inflamação 6.
A extensão da resposta inflamatória em estado de doença pode ser avaliada pela presença de sintomas clínicos ou por alteração na histologia nos tecidos da mucosa. Dano histológico do cólon é avaliado por meio de um sistema de pontuação que considera perda de cripta arquitetura, infiltração de células inflamatórias, músculo thickening, a depleção de células caliciformes, e cripta abscesso. 7 Quantitativamente, os níveis de citocinas pró-inflamatórias agudas inflamatórias, como a interleucina (IL)-1β, IL-6 e fator de necrose tumoral (TNF)-α, pode ser determinada usando métodos convencionais de ELISA. Além disso, a atividade de MPO pode ser mensurado através de um ensaio colorimétrico e usado como um índice de inflamação. 8
Na colite experimental, a gravidade da doença é muitas vezes relacionada com um aumento na atividade MPO e os níveis mais altos de citocinas pró-inflamatórias. Gravidade e colite associada à inflamação danos podem ser avaliados através da análise de consistência das fezes e sangramento, além de avaliar o estado histopatológico do intestino usando hematoxilina / eosina secções de tecido do cólon. Fragmentos de tecido do cólon pode ser usado para determinar a atividade MPO e produção de citocinas. Juntas, essas medidas podem ser utilizadas para avaliar a resposta inflamatória intestinal emmodelos animais de colite experimental.
Protocol
Discussion
DSS colite é um modelo amplamente utilizado induzido quimicamente de inflamação intestinal. Neste modelo, os camundongos são dadas de água potável suplementado com DSS, que é pensado para ser tóxico para células epiteliais do intestino e perturbar a integridade da barreira mucosa. 10 Administração da SAD induz uma colite aguda que se caracteriza por fezes, sangramento fecal, e infiltração com granulócitos. DSS 10 Durante a administração, colite é normalmente associada com perda de …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabalho é suportado por concessões do Canadian Institutes of Health Research (CIHR) e por Crohn e Colite Fundação de Canadá (CCFC).
Materials
| Name of reagent/equipment: | Company | Catalogue number | Comments |
| Eppendorf Safe-Lock Microcentrifuge Tube (2mL) | eppendorf | 0030 120.094 | |
| Biotek EL808 Absorbance plate reader | Biotek | EL808 | |
| Dextran sulphate sodium salt reagent grade (molecular weight 36,000-50,000 Da) | MP Biomedicals | 160110 | |
| Gen5 (software) | Biotek | Version 1.10.8 | |
| Hexadecyltrimethylammonium bromide (HTAB) | Sigma-Aldrich | H5882-100G | |
| Hydrogen peroxide, 30 wt.% solution in water | Sigma-Aldrich | 216763 | Store at 2-8°C |
| Microtest plate 96-well flat bottom | Sarstedt | 82.1581 | For single use only |
| o-Dianisidine | Sigma-Aldrich | D-3252 | Light sensitive. Store at 2-8°C |
| Potassium phosphate, dibasic | Caledon | 6620-1 | |
| Potassium phosphate, monobasic | EMD Chemicals | PX1565-1 | |
| Protease inhibitor cocktail | Sigma-Aldrich | P8340 | Store at -20°C |
| Triton X-100 | Sigma-Aldrich | T8787 | |
| Tungsten Carbide beads for Tissue Lyser II | QUIAGEN | 69997 |
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