הערכת שינויים מטבוליים כבדית במהלך להתיישבות מתקדמת של עכבר נבט בחינם על ידי 1 H NMR ספקטרוסקופיה

Summary

הליך קולוניזציה פרוגרסיבי מתואר להמשיך להעריך את השפעתה על מטבוליזם בכבד המארח. ההתיישבות מנוטר הלא פולשני על ידי הערכת הפרשת השתן של חיידקים שיתוף מטבוליטים על ידי אפיון NMR מבוססי המטבולית בזמן חילוף החומרים בכבד נבחנת על ידי Magic רזולוציה גבוהה זווית ספינינג (MAS HR) פרופיל התמ"ג של ביופסיה ללא פגע.

Abstract

זה ידוע היטב כי חיידקי מעיים לתרום באופן משמעותי הומאוסטזיס המארח, מתן מגוון של הטבות כגון ההגנה החיסונית וסינתזה ויטמין. הם גם מספקים את המארחת עם כמות רבה של חומרים מזינים, מה שהופך את המערכת האקולוגית איבר מטבוליים חיוניים. בהקשר של ראיות הגוברת של הקשר בין צמחיית המעיים ואת תסמונת מטבולית, הבנת האינטראקציה בין מטבולית המארח החיידקים במעיים שלו הופכת לאתגר החשוב של הביולוגיה המודרנית. ^1-4

להתיישבות (המכונה גם תהליך נורמליזציה) מייעדת את הקמתה של מיקרו אורגניזמים חיה נבט ללא לשעבר. אמנם תהליך טבעי המתרחש בלידה, הוא משמש גם נבט ללא בעלי חיים בוגרים כדי לשלוט על המערכת האקולוגית פרחים במעיים ובהמשך לקבוע את השפעתה על מטבוליזם המארח. הליך נפוץ לשלוט בתהליך הקולוניזציה היא להשתמש בשיטה gavage עם singlדואר או תערובת של מיקרו אורגניזמים. התוצאה היא שיטה קולוניזציה מהירה מאוד ומציג את החיסרון של להיות מלחיץ מאוד ^5. לכן כדאי לצמצם את הלחץ כדי להשיג תהליך הקולוניזציה איטי לצפות בהדרגה את ההשפעה של הקמת חיידקי על המטבוליזם המארח.

בכתב היד הזה, אנו מתארים הליך להעריך את השינוי של חילוף החומרים בכבד במהלך תהליך הקולוניזציה הדרגתי באמצעות שאינו הרסני פרופיל טכניקה מטבולית. אנו מציעים לעקוב קולוניזציה של חיידקים במעי על ידי בחינה של פעילות מטבולית של חיידקים במעיים לידי ביטוי בהפרשת השתן של חיידקים שיתוף מטבוליטים על ידי פרופיל מטבולי ¹ H NMR מבוססות. זה מאפשר הערכה של היציבות של פעילות חיידקים במעיים מעבר להקמת יציב של המערכת האקולוגית של חיידקים במעיים העריכו בדרך כלל על ידי חיידקים בצואה על ידי ניטור DGGE (denaturing ג'ל אלקטרופורזה שיפוע). ⁶קולוניזציה מתרחשת בסביבה פתוחה קונבנציונאלי הוא שיזם החול מלוכלך מלוכלך על ידי בעלי חיים רגילים, אשר תשמש שולטת. מכרסמים להיות חיות coprophagous, זה מבטיח קולוניזציה הומוגנית כפי שתואר לעיל. ⁷

פרופיל מטבולי כבדית נמדדת ישירות באמצעות ביופסיה בכבד שלם ¹ H ברזולוציה גבוהה קסם זווית ספינינג NMR ספקטרוסקופיה. טכניקה זו וכמותיות מציע דרך מהירה להעריך, מבלי לפגוע במבנה התא, מטבוליטים גדולות כמו טריגליצרידים, גלוקוז גליקוגן כדי לקדם להעריך את יחסי הגומלין המורכבים בין תהליך הקולוניזציה ואת חילוף החומרים בכבד ^7-10. שיטה זו יכולה לחול גם על כל רקמה ביופסיה ^11,12.

Protocol

1. להתיישבות של חיידקים ללא חיות איסוף דגימה הסר נבט ללא חיות המבודדים והבית אותם בחדר בעלי קונבנציונאלי בכלובים מצויד במסנן מול החיות הקונבנציונלית אשר תשמש שולטת (איור 1). Half מערבבים בחבור?…

Discussion

בפרוטוקול זה, תיארנו תהליך הקולוניזציה פרוגרסיבי בסביבה פתוחה להמשיך לחקור את ההשפעה של החיידקים במעיים על מטבוליזם בכבד על ידי העריכו ¹ פרופיל H MAS NMR HR של ביופסיה ללא פגע. שיטות שונות של קולוניזציה תוארו בספרות. השיטות הנפוצות ביותר ליישב חיות עם החיידקים מוגד?…

Materials

Table of specific reagents and equipment:

Name of the reagent	Company	Catalogue number	Comments
2.5 mm microtube	New Era	NE-H5/2.5-V-Br
1.7 mm capillary tube	Sigma-Aldrich	NORS175001
Capillary adapter	New Era	NE-325-5/1.7
Extraction rod	New Era	NE-341-5
HR-MAS rotor BL4 with 50 μL spherical Teflon spacer kit	Bruker	HZ07213
Tool kit for 50 μL inserts	Bruker	B2950
Advance III 600 MHz NMR	Bruker
1H HR MAS NMR solid probe	Bruker
Deuterium oxide 99.9 %	Sigma-Aldrich	530867-1L
3-(trimethylsilyl)propionic acid-d4 (TSP)	Sigma-Aldrich	269913