Kültür kas hücreleri innerve kas özetlemek için yetersiz bir modeli vardır<em> In vivo</em>. Fonksiyonel bir motor ünitesi çoğaltılabilir<em> In vitro</em> Rat embriyo omurilik eksplantlarındaki farklılaştırılmış insan birincil kas hücrelerinin innervasyon tarafından. Bu makale, spinal kord aşılar ve kas hücrelerinin co-kültürler kurulur açıklamaktadır.
Bir sinir bileşeni yokluğunda, hücre farklılaşması sınırlıdır ve motor nöron stimülasyon 1 eksik kendiliğinden, çünkü İnsan primer kas hücreleri tek tabaka içinde aneurally nadiren sözleşme kültüre. Bu sınırlamalar, kültürlü kas hücrelerinde birçok nöromüsküler hastalıklar, in vitro çalışma engelleyebilir. Önemlisi, tek sıralı, kültürlü kas hücrelerinin deneysel kısıtlamaları ortak kültürlerinde omurilik eksplant ile myofibers fonksiyonel innervasyonu aşılabilir.
Burada, Askanas 2 tarafından geliştirilen yönteme göre farklılaşmasını ve fiber kasılması tamamlamak için açan, insan birincil kas hücreleri için etkili, uygun innervasyon elde etmek için gerekli adımları gösteren farklıdır. Bunu yapmak için, kas hücreleri hala omurilik dilim bağlı dorsal kök gangliyon ile ED 13.5 olarak sıçan embriyolarında omurilik eksplant ile birlikte kültüre edilir. Birkaç gün sonra, kas fiyle sözleşme başlar ve sonunda kas hücrelerine bağlanan bu omurilik eksplantlarının çıkıntı fonksiyonel neurites tarafından innervasyonu ile çapraz çizgili olur. Bu yapı, basit bir kültür ortamında düzenli değişimi ile, çok sayıda ay boyunca muhafaza edilebilir.
Insan kas gelişimi ve innervasyon multidisipliner analiz için işlevsel bir model temsil ettiği bu paha biçilmez aracı uygulamaları çoktur. Aslında, tam bir de novo nöromusküler kurulum temel ve fizyolojik bağlamda her adımda birçok parametre kolay bir ölçüm, izin, bir kültür çanak oluşur.
Birkaç örnekleri, genomik ve / veya proteomik çalışmaları anmakta co-kültürler doğrudan uygulanabilir. Her iki bileşenler farklı türlerden gelir çünkü Ayrıca, pre-ve post-sinaptik etkiler özellikle ve ayrı ayrı, nöromüsküler kavşakta değerlendirilebilirSıçan ve insan idi. Sinir-kas co-kültürü ayrıca kas veya nöromüsküler hastalıklar 3 muzdarip hastaların izole insan kas hücreleri ile yapılabilir, ve böylece aday ilaçlar için bir tarama aracı olarak kullanılabilir. Son olarak, hiçbir özel ekipman, ancak düzenli bir BSL2 tesisi bir kültür kabına fonksiyonel bir motor ünite üretmek için gereklidir. Bu yöntem, normal ve hastalık bağlamında, kas gibi nöromüsküler fonksiyon fizyolojik ve mekanik çalışmalar için nöromüsküler araştırma her iki toplum için değerlidir.
Kas hücre kültürlerinde genellikle birden çok hücre ve hücre tipi bağlantılar önemini recapitulate çünkü normal ve patolojik bağlamda kas hücre fonksiyonu incelemek için bir fizyolojik in vitro aracı, myologists için en ilgi biridir. Kas hücreleri için motor nöron saflaştırılmış Ayrıca Schwann hücreleri varlığında 5 verimli olmasını innervasyon için gerekli olan ve ilgili protokolü burada açıklanan (3B + özel bir dağıtım) topolojik sahiptir olmadığı için i?…
The authors have nothing to disclose.
Çalışmalarımız İsviçre Ulusal Bilim Vakfı (SNF), Sistem Biyolojisi (SystemsX.ch), Muskuler Distrofi Derneği USA (MDA), Association Française contre les Miyopatiler (AFM), Birleşik Mitokondriyal Hastalık Vakfı İsviçre Girişimi tarafından desteklenmektedir (UMDF), Gebert-RUF Vakfı Nadir Hastalıklar Programı (GRF), Kas Hastalıkları (SSEM / FSRMM), Swiss Life "Jubiläumsstiftung für Volksgesundheit und Medizinische Forschung", Roche Araştırma Vakfı ve Üniversitesi Araştırma İsviçre Toplum Basel.
Name of reagent | Company | Catalog Number |
HBSS | Gibco/Invitrogen | 14170 |
MEM | Gibco/Invitrogen | 31095 |
Medium 199 | Gibco/Invitrogen | 31153 |
Fetal Bovine Serum | Fetal Clone Perbio | SH30066.03 |
Insuline | Sigma | I9278 |
Human EGF | Sigma | E9644 |
Human FGF | Sigma | F0291 |
Penicillin/streptomycin solution | Gibco | 15140 |