ゼブラフィッシュ胚の心臓の免疫染色を実施する迅速な方法が説明されています。全体のマウント免疫染色の手法に比べ、この方法は劇的に非常に低下処理時間内に心臓の細胞/細胞内構造を明らかに高解像度の画像を得ることができる抗体の浸透を、増加させる。
ゼブラフィッシュの胚は、心臓の開発とその有利な発生学と遺伝学1,2のために人間の心の病気を研究するためのin vivoで脊椎動物のモデルで人気となる。約100-200胚は、成魚の単一ペアから毎週容易に入手可能である。 EX子宮を開発透明な胚は、心臓の欠陥3を評価するために最適です。任意の遺伝子の発現は、モルホリノ技術またはRNAの注射4を介して操作することができます。また、前方に遺伝子スクリーニングは、すでに心臓発生5の様々な観点に影響を与える変異体のリストを生成している。
全体のマウント免疫染色では、特定の組織6に標的タンパク質の発現パターンを明らかにするためには、この動物モデルにおいて重要なテクニックです。しかし、携帯電話または細胞内構造を明らかにすることができる高解像度の画像は、主に物理的なlocatに、難しい状態が続いている心と抗体のほとんど通過のイオン。
ここで、我々は最初の心臓を解剖し、顕微鏡スライドの表面に染色処理を行うことにより、これらのボトルネックに対処する方法を提示する。小さな心臓サンプルの損失を防ぐために、ソリューションの取り扱いを容易にするために、我々はimmEdgeのペンによって描画される顕微鏡の表面をスライド上に円の中で心臓のサンプルを制限。染色後、蛍光シグナルを直接複合顕微鏡で観察することができます。
胚魚の心臓は、わずか数細胞層で構成されて以来、私たちの新しいメソッドは、抗体の浸透を大幅に向上します。無傷の心からの高品質の画像が2日から6日に歳のゼブラフィッシュ胚のために多くの削減行列の時間内に得ることができます。我々の方法は、潜在的にゼブラフィッシュや他の小動物のいずれかから切除した他の器官を染色するために拡張することができます。
古典的な全体のマウント免疫染色の方法に比べ、本手法は次のような利点があります。最初に、はるかに強い蛍光シグナルが一貫して改善された浸透のために取得することができます。全体のマウント免疫染色法では、心臓を取り巻く濃い皮膚組織は大幅に全身に高グラウンドで、その結果、多くの抗体の浸透を減少させた。この問題は、3日後に受精(DPF)より古い胚には特に厳しいです。…
The authors have nothing to disclose.
我々は、ゼブラフィッシュ畜産で彼の助けのためにBeninio Jomokに感謝。この作品は、NIH HL81753によって運営されている。
PBST: 1 x PBS 0.5% Triton-X 100
25X Tricaine: 400 mg Tricaine 97.9 mL ddH2O 2.1 mL (1M Tris pH9) Adjust pH to 7.0