우리의 프로토콜은 홈 개선 스토어에서 구입 재활용 Invitrogen Nupage Novex minigel 카세트, 그리고 저렴한 재료로 한 번에 여러 개의 단백질 젤을 부어하는 방법을 보여줍니다. 이것은 경제적이고 능률적인 방법은 몇 주 동안 4 ° C에서 젤을 저장하는 방법을 포함하고 있습니다. 상용 젤, 자주 단백질 젤을 실행 실험실에서 플라스틱 겔 카세트를 다시 사용함으로써 상당한 비용을 절약하고 환경에 도움을 줄 수 있습니다.
Abstract
나트륨 dodecyl 황산염의 polyacrylamide 겔 전기 영동 (SDS-PAGE) 분석을 사용하여 단백질의 평가는 생화학 및 분자 생물학 연구 1-4에서 사용하는 일반적인 기법입니다. 단백질의 일상 분석을 수행하는 실험실의 경우 상용 polyacrylamide의 젤 (~ $ 10/gel)의 비용은 시간의 경과에 상당한 될 수 있습니다. 이 비용을 완화하기 위해 일부 연구자들은 자신의 polyacrylamide 젤을 준비합니다. 이러한 젤류를 따르고 전통적인 방법은 일반적으로 전문 장비와 비용이 많은 젤류를 따르고과 향후 사용을 위해 그들을 저장할 수 있습니다 배제 유리 겔 접시를 사용합니다. 또한, 붓는 청소 또는 젤 동안 유리 조각으로 취급하는 것은 대학 연구실 교실에서 자신들의 사용을 배제 있습니다 안전 위험을 작성, 우발적인 파손이 발생할 수 있습니다. 우리의 프로토콜은 재활용 Invitrogen Nupage Novex minigel 카세트에 의해 동시에 여러 단백질 젤을 잡다, 그리고 저렴한 mA하는 방법을 보여줍니다terials는 인테리어 가게에서 구입했습니다. 이것은 경제적이고 능률적인 방법은 몇 주 동안 4 ° C에서 젤을 저장하는 방법을 포함하고 있습니다. 상용 젤, 자주 단백질 젤을 실행 실험실에서 플라스틱 겔 카세트를 다시 사용함으로써 상당한 비용을 절약하고 환경에 도움을 줄 수 있습니다. 또한, 플라스틱 겔 카세트는 학부 실험실 교실에 이상적하게 파손에 매우 저항력이 있습니다.
Protocol
1. 카세트를 준비 클린 앞면과 뒷면 사용 Invitrogen Nupage Novex minigel 카세트, 또는 기타 상업적 minigel 카세트의 접시. 플라스틱 에폭시의 약 1-3 ML을 준비하고 제조 업체의 지시에 따라 잘 섞는다. 카세트가 조립되면 두 접시가 접촉되는 전면 판의 안쪽 가장자리에 에폭시를 적용합니다. 오프닝을 막기에서 초과 에폭시을 방지하기 위해 카세트를 조립하면 다시 접시의 바…
Discussion
단백질 겔 전기 영동은 대부분의 분자 생물학 연구소를위한 indispensible 방법입니다. 상용 minigels의 편의를 높은 수준을 제공하지만, 치명타가 될 수 있습니다. 여기 상용 minigels의 인기 브랜드에서 minigel 카세트를 다시 사용하는 방법을 보여줍니다. 이 방법은 젤의 기성품 소스를 가지고있는 편리함을 유지하지만, 상용 minigels 비용의 분수에. 이 절차의 주요 단계는 완전히 유출을 방지하기 위해 unpo…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
저자는 AH에 생명 수상 University of Florida의 과학 하워드 휴즈 의학 연구소 감사
Materials
Name of reagent
Company
Catalogue number
Comments
Invitrogen Nupage Novex Minigel Cassette (1.0 mm)
Invitrogen
NC2010
Available in 2, 5, 10, 12, 15 and 2D wells
Plastic Epoxy
Loctite
108771
Electrical Tape
Scotch
125 mL side arm flask
Pyrex
5360
4X Tris-Base resolving gel buffer
1.5 M Tris-base pH 8.7
acrylamide
Fisher Scientific
01065-500
Bis-acrylamide
MP Biomedicals, Inc.
800173
30.8% acrylamide solution
30:0.8 acrylamide: bis-acrylamide in IRG-H2O
10% APS
Fisher Scientific
BP179-25
0.1 g ammonium persulfate in 1 ml IRG-H2O, prepared immediately before use
TEMED
Arcos Organics
138450500
1-butanol saturated with 1X resolving gel buffer
5:2 1-butanol to 1X resolving gel buffer
4X Tris-Base stacking gel buffer
1.5 M Tris-base pH 6.8
Gel comb
Invitrogen
NC3015
15 well, 1.0 mm thickness
Impulse Sealer
TEW Electric Heating Equipment
Heat Sealable Pouch
Kapak/Scotchpak
1 pint size (6.5″ x 8″)
Gel storage buffer
1X stacking gel buffer with 0.1% sodium azide
Novex SDS Tris-Glycine sample buffer (2X)
Invitrogen
LC2676
DTT
FisherBiotech
BP172-5
10X Tris-Gylcine Running buffer
Invitrogen
LC2675
1L of 10X stock: 29.0 g Tris-Base, 144.0 g Glycine, 10.0 g SDS
Hwang, A. C., Grey, P. H., Cuddy, K., Oppenheimer, D. G. Pouring and Running a Protein Gel by reusing Commercial Cassettes. J. Vis. Exp. (60), e3465, doi:10.3791/3465 (2012).