بروتوكول لدينا يوضح كيفية صب المواد الهلامية بروتين متعددة في وقت واحد بواسطة Nupage إعادة تدوير أشرطة إينفيتروجن minigel Novex، ومواد غير مكلفة شراؤها في منزل تحسين تخزين. هذه الطريقة اقتصادية ويشمل تبسيط وسيلة لتخزين المواد الهلامية في 4 درجة مئوية لمدة بضعة أسابيع. ويمكن من خلال إعادة استخدام الأشرطة هلام البلاستيك من المواد الهلامية المتاحة تجاريا، ومختبرات المواد الهلامية التي تعمل بروتين متكرر توفير تكاليف كبيرة ويساعد في تحسين البيئة.
Abstract
تقييم البروتينات باستخدام كبريتات الصوديوم بولكرلميد دوديسيل الهلام الكهربائي (SDS-PAGE) التحليل هو التقنية المستخدمة من قبل الباحثين الكيمياء الحيوية والبيولوجيا الجزيئية 1-4. بالنسبة للمختبرات التي تقوم بإجراء التحاليل اليومية من البروتينات، يمكن أن تكلفة المواد الهلامية بولكرلميد المتاحة تجاريا (~ $ 10/gel) أن تكون كبيرة بمرور الوقت. للتخفيف من هذه التكاليف، وبعض الباحثين تعد المواد الهلامية التي بولكرلميد الخاصة. الطرق التقليدية في صب هذه المواد الهلامية تستخدم عادة المعدات المتخصصة وألواح الزجاج هلام التي يمكن أن تكون باهظة الثمن ويحول دون صب المواد الهلامية كثير وتخزينها لاستخدامها في المستقبل. وعلاوة على ذلك، يمكن التعامل مع لوحات من الزجاج أثناء التنظيف أو هلام صب يؤدي إلى كسر عرضي خلق يشكل خطرا على السلامة، والتي قد تحول دون استخدامها في الصفوف الجامعية مختبر. بروتوكول لدينا يوضح كيفية صب المواد الهلامية بروتين متعددة في وقت واحد بواسطة Nupage إعادة تدوير أشرطة إينفيتروجن minigel Novex، وماجستير غير مكلفةاستنباط مواد تم شراؤها في منزل تحسين تخزين. هذه الطريقة اقتصادية ويشمل تبسيط وسيلة لتخزين المواد الهلامية في 4 درجة مئوية لمدة بضعة أسابيع. ويمكن من خلال إعادة استخدام الأشرطة هلام البلاستيك من المواد الهلامية المتاحة تجاريا، ومختبرات المواد الهلامية التي تعمل بروتين متكرر توفير تكاليف كبيرة ويساعد في تحسين البيئة. وبالإضافة إلى ذلك، والأشرطة هلام البلاستيك هي مقاومة جدا للكسر، الأمر الذي يجعلها مثالية لقاعات الدراسة الجامعية مختبر.
Protocol
1. إعداد أشرطة الكاسيت نظيفة الأمامي والخلفي لوحات لاستخدامها كاسيت Nupage إينفيتروجن minigel Novex، أو غيرها من كاسيت minigel التجارية. إعداد مل 1-3 تقريبا من الايبوكسي البلاستيك وتخلط جيدا وفقا لتعليم?…
Discussion
بروتين الكهربائي للهلام هو وسيلة لا غنى عنها للمختبرات البيولوجيا الجزيئية الأكثر. minigels المتاحة تجاريا توفير مستوى عال من الراحة، ولكن يمكن أن يكون مكلفا. هنا نبين كيفية إعادة استخدام الأشرطة minigel من ماركة شعبية من minigels متاحة تجاريا. هذا الأسلوب يحتفظ الراحة من وجود …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
الكتاب أشكر معهد هوارد هيوز الطبي لعلوم الحياة الجبهة المتحدة للمشاركة في الجائزة إلى AH
Materials
Name of reagent
Company
Catalogue number
Comments
Invitrogen Nupage Novex Minigel Cassette (1.0 mm)
Invitrogen
NC2010
Available in 2, 5, 10, 12, 15 and 2D wells
Plastic Epoxy
Loctite
108771
Electrical Tape
Scotch
125 mL side arm flask
Pyrex
5360
4X Tris-Base resolving gel buffer
1.5 M Tris-base pH 8.7
acrylamide
Fisher Scientific
01065-500
Bis-acrylamide
MP Biomedicals, Inc.
800173
30.8% acrylamide solution
30:0.8 acrylamide: bis-acrylamide in IRG-H2O
10% APS
Fisher Scientific
BP179-25
0.1 g ammonium persulfate in 1 ml IRG-H2O, prepared immediately before use
TEMED
Arcos Organics
138450500
1-butanol saturated with 1X resolving gel buffer
5:2 1-butanol to 1X resolving gel buffer
4X Tris-Base stacking gel buffer
1.5 M Tris-base pH 6.8
Gel comb
Invitrogen
NC3015
15 well, 1.0 mm thickness
Impulse Sealer
TEW Electric Heating Equipment
Heat Sealable Pouch
Kapak/Scotchpak
1 pint size (6.5″ x 8″)
Gel storage buffer
1X stacking gel buffer with 0.1% sodium azide
Novex SDS Tris-Glycine sample buffer (2X)
Invitrogen
LC2676
DTT
FisherBiotech
BP172-5
10X Tris-Gylcine Running buffer
Invitrogen
LC2675
1L of 10X stock: 29.0 g Tris-Base, 144.0 g Glycine, 10.0 g SDS
Hwang, A. C., Grey, P. H., Cuddy, K., Oppenheimer, D. G. Pouring and Running a Protein Gel by reusing Commercial Cassettes. J. Vis. Exp. (60), e3465, doi:10.3791/3465 (2012).