כדי לעקוב אחר ההתקדמות של תגובה חיסונית לאורך זמן בתוך העכבר זאת, בלוטות הלימפה ניתן להסיר ברצף על ידי ניתוח. כאן, אנו מתארים כיצד טכניקה זו ניתן לבצע.
בתחום אימונולוגיה, להבין את התקדמות התגובה החיסונית נגד החיסון, זיהום או גידול, התגובה מלווה לעיתים קרובות לאורך זמן. באופן דומה, המחקר של הומאוסטזיס לימפוציטים דורש כמובן ניסויים זמן. ביצוע מחקרים אלו בתוך העכבר אותו הוא אידיאלי כדי להפחית את השתנות ניסיוני, כמו גם את מספר העכברים המשמשים. הנסיגה הדם מאפשרת ביצוע ניסויים כמובן זמן, אבל זה רק נותן מידע על מחזורי לימפוציטים ומספק מספר מוגבל של תאים 1-4. מאז לימפוציטים במחזור דרך הגוף המתגוררים בלוטות הלימפה יש מאפיינים שונים, חשוב לבחון את שני המקומות. הסרת רציפה של בלוטות הלימפה על ידי ניתוח מספק הזדמנות ייחודית לבצע תגובה חיסונית או הרחבת התא החיסונית של העכבר באותו הזמן. יתר על כן, שיטה זו מניבה בין 1-2×10 6 תאים בכל מפרק הלימפה אשר די PErform אפיון פנוטיפי ו / או מבחני תפקודית. לימפה הצומת רציף ניתוח או lymphadenectomy שימש בהצלחה על ידינו ואחרים 5-11. כאן, אנו מתארים כיצד בלוטות הלימפה הזרוע ואת מפשעתי ניתן להסיר על ידי ביצוע חתך קטן בעור של עכבר anesthetised. מאז הניתוח היא שטחית של דבר במהירות, עכבר מתאושש מהר מאוד, מחלים היטב ואינו לחוות כאב מוגזם. כל יום 2, ניתן לקצור אחת או שתיים בלוטות הלימפה המאפשר ניסויים כמובן זמן. טכניקה זו מתאימה ובכך ללמוד את המאפיינים של בלוטת לימפה לימפוציטים המתגוררים לאורך זמן. גישה זו מתאימה עיצובים ניסיוניים שונים ואנו מאמינים כי במעבדות רבות ירוויחו ביצוע ניתוחים עוקבים הצומת לימפה.
תיארנו פרוטוקול הניתוח LN אשר יכול לחול על מערכות ניסיוניות רבות. אמנם שימושי מאוד לעקוב אחר התגובות החיסוניות או הומאוסטזיס תא החיסון, טכניקה זו יש מספר מגבלות. ראשית, רק 4 LNs ניתן לקצור. שנית, התגובה החיסונית למד חייב להיות מערכתי או להתרחש שטחיות (עור, ניקוז) LNs מפשעתי …
The authors have nothing to disclose.
אנו מודים Lesage סילבי וכל חברי המעבדה של קריאה ביקורתית של פרוטוקול. עבודה זו נתמכה על ידי מענק (MOP-77545) מן המכון הקנדי לבריאות מחקר (CIHR). נטלי Labrecque נתמך על ידי מלגה בכיר FRSQ ומליסה מתייה קיבל אלכסנדר גרהם בל NSERC קנדה מלגות לתואר שני.
Reagent Name | Company | Catalog number | Comments |
Graefe Fine Pattern Premium Forceps | Harvard Apparatus | 52-2144 | Strongly Curved, 10 cm (4 in), 0.8 mm tip |
Michel Clip Applying and Removing Forceps | Harvard Apparatus | 52-3779 | 12.5 cm (5 in) |
Michel Clip 100 | Harvard Apparatus | 52-3746 | 7.5-1.75 mm |
Temgesic (Buprenorphine hydrochloride) | Schering-Plough | ||
Vetalar (Ketamine hydrochloride) | Boniche Animal Healthcare | DIN: 01989529 | |
Rompun (Xylazine) | Bayer | DIN: 02169592 | |
Isoflurane | ABBOTT | DIN: 02032384 | |
Hypotears eye ointment | Novartis Ophtalmics | DIN: 02133288 | |
Baxedin (Clorhexidine gluconate 2% in isopropyl alcohol 70%) | Omega | L0000017 | DIN: 02251477 |