لمتابعة تطور استجابة مناعية أكثر من مرة داخل الماوس نفسه، ويمكن إزالة الغدد الليمفاوية بشكل متتابع عن طريق الجراحة. هنا، نحن تصف كيف يمكن تنفيذ هذه التقنية.
في مجال علم المناعة، لفهم تطور استجابة مناعية ضد لقاح لعدوى أو ورم، ويتبع في كثير من الأحيان استجابة مع مرور الوقت. وبالمثل، فإن دراسة التوازن لمفاوية يتطلب بطبيعة الحال التجارب المرة. تنفيذ هذه الدراسات في الماوس نفسه مثالية للحد من التقلبات التجريبية، فضلا عن عدد من الفئران المستخدمة. سحب الدم يسمح أداء التجارب مسار الزمن، لكنه يعطي فقط معلومات حول تعميم الخلايا اللمفية، ويقدم لعدد محدود من الخلايا 1-4. منذ الخلايا الليمفاوية من خلال تعميم الجسد والمقيمين في الغدد الليمفاوية لها خصائص مختلفة، من المهم أن تدرس كلا الموقعين. إزالة متتابعة من الغدد الليمفاوية عن طريق الجراحة يوفر فرصة فريدة لمتابعة استجابة مناعية أو توسيع الخلية المناعية في الماوس نفسه مع مرور الوقت. وعلاوة على ذلك، هذا الأسلوب ينتج بين الخلايا 6 1-2×10 في العقدة الليمفاوية التي هي كافية لPErform التوصيف المظهري و / أو فحوصات وظيفية. وقد متتابعة لعملية جراحية العقدة الليمفاوية أو الغدد الليمفاوية استخدمت بنجاح من قبلنا وغيرها من 5-11. هنا، نحن تصف كيف يمكن إزالة العقد اللمفية العضدية، والاربية من خلال جعل شق صغير في الجلد من فأر anesthetised. منذ العملية الجراحية هو سطحي والقيام بسرعة، والماوس للشفاء بسرعة كبيرة، ويشفى تماما وليس تجربة الألم المفرط. كل يوم الثاني على التوالي، فمن الممكن لجني الغدد الليمفاوية واحد أو اثنين مما يسمح للتجارب دوام. هذا الأسلوب هو مناسب وبالتالي إلى دراسة خصائص العقدة الليمفاوية، الخلايا الليمفاوية المقيمين على مر الزمن. هذا النهج هو مناسبة لتصاميم تجريبية مختلفة، ونعتقد أن العديد من المختبرات ستستفيد من تنفيذ عمليات جراحية متتابعة العقدة الليمفاوية.
وقد وصفت نحن بروتوكولا للجراحة LN التي يمكن أن تنطبق على كثير من النظم التجريبية. وعلى الرغم من المفيد جدا لمتابعة الاستجابات المناعية أو المناعي توازن الخلية، هذه التقنية لديها عدد قليل من القيود. أولا، يمكن أن يحصد سوى أربعة LNS. ثانيا، يجب أن يكون رد الفعل المناعي در?…
The authors have nothing to disclose.
نشكر سيلفي ليسيج وجميع أفراد مختبر لقراءة نقدية للبروتوكول. وأيد هذا العمل من خلال منحة (MOP-77545) من المعاهد الكندية لأبحاث الصحة (CIHR). ويدعم ناتالي Labrecque بواسطة منحة دراسية كبار FRSQ وميليسا ماتيو تلقى الكسندر غراهام بيل NSERC منحة دراسات عليا كندا.
Reagent Name | Company | Catalog number | Comments |
Graefe Fine Pattern Premium Forceps | Harvard Apparatus | 52-2144 | Strongly Curved, 10 cm (4 in), 0.8 mm tip |
Michel Clip Applying and Removing Forceps | Harvard Apparatus | 52-3779 | 12.5 cm (5 in) |
Michel Clip 100 | Harvard Apparatus | 52-3746 | 7.5-1.75 mm |
Temgesic (Buprenorphine hydrochloride) | Schering-Plough | ||
Vetalar (Ketamine hydrochloride) | Boniche Animal Healthcare | DIN: 01989529 | |
Rompun (Xylazine) | Bayer | DIN: 02169592 | |
Isoflurane | ABBOTT | DIN: 02032384 | |
Hypotears eye ointment | Novartis Ophtalmics | DIN: 02133288 | |
Baxedin (Clorhexidine gluconate 2% in isopropyl alcohol 70%) | Omega | L0000017 | DIN: 02251477 |