La radioterapia combinata in un modello di tumore ortotopico cervello di topo

Summary

Lo scopo di questo articolo è quello di descrivere l'utilizzo di un modello di glioblastoma ortotopico per gli studi di chemio-radioterapia. Questo articolo passare attraverso l'elaborazione delle cellule, l'impianto, e la radioterapia del mouse utilizzando un modello intracranica.

Abstract

Glioblastoma multiforme (GBM) sono le più comuni e aggressivi tumori cerebrali primari adulti ^1. Negli ultimi anni sono stati compiuti progressi sostanziali nella comprensione dei meccanismi di invasione tumorale, e diretta inoculazione intracerebrale del tumore offre l'opportunità di osservare il processo invasivo in un ambiente fisiologicamente appropriato ^2. Per quanto riguarda i tumori del cervello umano sono interessati, i modelli ortotopici attualmente disponibili sono stabiliti mediante iniezione stereotassica di sospensioni cellulari o impianto di un pezzo solido di tumore mediante una procedura complicata craniotomia ^3. Nella nostra tecnica si raccogliere cellule da coltura tissutale per creare una sospensione di cellule utilizzata per impiantare direttamente nel cervello. La durata dell'intervento è di circa 30 minuti, e come il mouse deve essere in un piano costante chirurgico, un anestetico iniettabile viene utilizzato. Il mouse viene posizionato in un telaio stereotassico fatta da Stoetling (figura 1). A poppaer la zona chirurgica viene pulito e preparato, si pratica un'incisione, e il bregma si trova per determinare la posizione del craniotomia. La posizione del craniotomia è di 2 mm verso destra e 1 mm anteriore del bregma. La profondità di 3 mm dalla superficie del cranio, e le cellule vengono iniettate ad una velocità di 2 microlitri ogni 2 minuti. La pelle viene suturata con 5-0 PDS, e il mouse è autorizzato a svegliarsi su una piastra elettrica. Dalla nostra esperienza, a seconda della linea cellulare, il trattamento può avvenire da 7-10 giorni dopo l'intervento. Somministrazione di farmaci dipende dalla composizione di farmaco. Per la radioterapia i topi vengono anestetizzati, e metterlo in una maschera su misura. Piombo copre il corpo del topo e espone solo il cervello del mouse. Lo studio della tumorigenesi e la valutazione di nuove terapie per GBM richiedono accurati e riproducibili cerebrali modelli animali tumorali. Così usare questo modello ortotopico cervello per studiare l'interazione del microambiente del cervello e il tumore, per testare il EFFICACIAess di diversi agenti terapeutici con e senza radiazioni.

Protocol

I. Preparazione cellulare Le cellule vengono coltivate a confluenza in DMEM con 10% FBS circa un 80% confluenti 225 centimetri pallone da 3 per ogni 5 topi per essere impiantate. Aspirare mezzi fuori delle cellule, lavare con 10 ml di PBS senza calcio o magnesio. Aspirato PBS le cellule. Tripsinizzare le cellule con 3 ml di tripsina, attendere 10-15 min, e neutralizzare la tripsina con 15 ml di mezzo. Pipettare tutte le cellule ei media in una ml 50 conica. Due flaconi…

Discussion

Gliomi maligni, quali glioblastoma multiforme, rappresentano i più comuni tumori cerebrali primari e hanno una prognosi infausta ^4. La sopravvivenza dei pazienti affetti da GBM è rimasto praticamente invariato negli ultimi dieci anni (cioè, 9-12 mesi post-diagnosi), nonostante i progressi nella chirurgia, radioterapia e chemioterapia ^5. Le caratteristiche di un modello appropriato per lo studio del trattamento glioma dovrebbe includere una posizione riproducibile tumore e la crescita delle cellu…

Materials

Lab Standard Stereotaxic Instrutment	Stoelting Mouse and Rat Adaptor
Betadine	100% EtOH
70% EtOH	50% Acetone
6″ Q-tips	Alcohol swabs
Hamilton syringe 80008	Ethicon 5-0 PD
1701 SN 31-33G/1″/PT3 needle	1 ml syringes
25G needles	Heating pad
Artificial Tears Ointment	Very fine tipped permanent marker