准备用传统的方法,纯化共同净化核酸酶和蛋白酶的真核细胞的核糖体的污染造成了消极影响下游的生化和结构分析。一个快速和简单的色谱的净化方法是用来解决这个问题作为一个模型系统中使用的酵母核糖体。
真核生物核糖体相比,他们真细菌和archael更加不稳定,从而构成了重大挑战,研究人员。特别麻烦的是,细胞溶解释放大量的蛋白酶和核酸,这可以降低核糖体。因此,重要的是尽可能快地从这些酶中分离出来的核糖体。不幸的是,传统的差分离心方法叶时间不可接受的长期接触这些酶的核糖体,影响其结构的完整性和功能。为了解决这个问题,我们利用一个色谱法使用收费Sulfolink树脂半胱氨酸。这个简单,快速的应用显着降低水解蛋白和nucleolytic活动,共同净化生产完好,高度生化活性酵母核糖体的高产量。我们建议,这种方法也应适用于哺乳动物的核糖体。简约的方法,增强的纯度和色谱纯化的核糖体的活动的一个显著的技术进步,为真核细胞的核糖体的研究。
核糖体净化协议主要涉及裂解细胞,收获一个细胞质分数从低转速旋转,然后造粒核糖体由高速离心1。虽然提出了一些新颖的方法已被用于净化细菌核糖体,同样没有被真正的真核生物2-4。虽然这些年来,例如盐清洗和甘油垫子(如看到5)增加额外的步骤,酵母核糖体的生化和结构的研究已阻碍了他们的倾向,成为在净化过程中的内源性降解酶降解,最有可能由于长期?…
The authors have nothing to disclose.
我们衷心感谢Dinman实验室的所有成员,包括阿什顿Belew,莫文蔚杰克,Sharmishtha Musalga,谢尔盖Sulima,Shivani雷迪,他们的帮助和在这个项目上的投入和Michael Rhodin。这项工作得到了补助金,上午由美国心脏协会(AHA 0630163N)和开发部的国立卫生研究院(5R01 GM058859 – 12)。日航是支持美国再投资和恢复法案2009年补充父补助金(3R01GM058859 11S1)。